常用病原學檢測

常用病原學檢測第一頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日2臨床病原學檢查山東大學劉金玲第二頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日臨床病原體檢查目的臨床病原體檢查目的:是確定感染的發(fā)生和性質(zhì)，在疾病早期提供恰當?shù)闹委煼桨?，并采取有效的預防措施，防止感染傳播造成的危害。第三頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日各種不同病原體的實驗診斷方法遵循以下基本原則1.正確、規(guī)范采集和運送標本。2.直接顯微鏡查見病原體或檢出病原體抗原，借助分子生物學的方法檢測病原體核酸，結合病人的病史、癥狀或體征，快速作出初步診斷。3.初步診斷同時，對病原體進行分離與鑒定。4.檢測機體對病原體的免疫產(chǎn)物。5.參與臨床選擇抗菌藥物，指導和監(jiān)控微生物的治療方案，避免耐藥菌株的產(chǎn)生。第四頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日5病原學診斷細菌學診斷病毒學診斷真菌學診斷

第五頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日致病菌的檢驗程序和常用項目標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)形態(tài)特征生化試驗血清學試驗動物實驗明確診斷初步診斷血清學診斷細菌的快速鑒定形態(tài)學檢查（常規(guī)培養(yǎng)或特殊培養(yǎng)）（凝集試驗、沉淀反應、免疫標記技術等）(微生物數(shù)字編碼分類鑒定法、血培養(yǎng)自動化檢測系統(tǒng)、核酸雜交技術、PCR技術、DNA芯片技術等）藥物敏感試驗第六頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日7細菌感染檢查檢驗特點通過對標本直接顯微鏡檢，病原菌的分離培養(yǎng)鑒定，病原菌的抗原檢測，核酸檢測和細菌感染后機體免疫應答產(chǎn)物的測定及藥物的測定及藥物敏感性試驗，對細菌感染性疾病可作出及時、準確的病原學診斷。第七頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日DiagnosisStrategyforBacterialInfection第八頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日9

革蘭陽性菌(Grampositivebacteria)

革蘭陰性菌(Gramnegativebacteria)涂片結晶紫

染色碘液媒染酒精脫色復紅復染革蘭染色法（GramStain）由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。1.步驟第九頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日①直接涂片染色鏡檢適用于具有特征性形態(tài)和染色性的病原菌,如葡萄球菌、腦膜炎奈瑟菌、抗酸染色陽性的結核分枝桿菌等。第十頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日大多數(shù)細菌的形態(tài)與染色并無顯著特異性，因此需要分離培養(yǎng)。如腸道桿菌均為G-桿菌，菌落形態(tài)亦相同。培養(yǎng)特征：化膿性鏈球菌---小而透明、溶血環(huán)。②分離培養(yǎng)第十一頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日生化試驗：如腸道桿菌進行乳糖發(fā)酵試驗。血清學試驗：已知抗體測抗原或已知抗原測病人血清中相應的抗體。如玻片凝集，鑒定菌種和型。動物試驗：測定細菌的毒力、病原菌的分離和鑒定。②分離培養(yǎng)第十二頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日③血清學診斷原理：已知抗體測未知抗原進行病原菌的鑒定或用已知抗原檢測患者體液中有無相應特異性抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。標本：雙份血清標本，恢復期血清抗體效價比急性期升高≥4倍者方有意義。單份血清效價超過一定標準才有診斷意義。種類：凝集試驗、沉淀試驗、中和試驗、補體結合試驗。第十三頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日常用的血清學診斷方法類型診斷應用舉例直接凝集試驗傷寒和副傷寒（肥達試驗）、立克次體（外斐試驗）、鉤端螺旋體（顯微凝集試驗）乳膠凝集試驗檢測腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等抗體沉淀試驗梅毒（VDRL、RPR試驗）補體結合試驗檢測Q熱柯克斯體等抗體中和試驗風濕熱（抗O試驗）ELISA廣泛用于病原體的診斷和流行病學調(diào)查第十四頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日玻片凝集試驗試管凝集試驗第十五頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日酶聯(lián)免疫吸附試驗第十六頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日④細菌的快速鑒定API細菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)第十七頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日PCR技術第十八頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日19姬姆薩染色衣原體包涵體HSV病毒被支原體感染的精子梅毒螺旋體第十九頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日20

檢測程序第二十頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日病毒感染的微生物學檢查法

第二十一頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日DiagnosisStrategyforViralInfection第二十二頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日23病毒感染的微生物學檢查法

第二十三頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日ELISAforHIVantibody

MicroplateELISAforHIVantibody:colouredwellsindicatereactivity第二十四頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日病毒的數(shù)量與感染性測定蝕斑測定：準確滴定病毒感染性的方法蝕斑（Plaque）每個蝕斑是由一個有感染性病毒顆粒形成，稱為蝕斑形成單位（Plaqueformingunit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示50%感染量（ID50）或50%組織細胞感染量（TCID50）不能準確地測定感染性病毒顆粒的數(shù)量第二十五頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日乙型肝炎的病原學診斷

第二十六頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日A病毒性肝炎HepatitisVirus腸道傳播腸道外傳播F,TTV?其他ENANBBDC病毒性肝炎-背景第二十七頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日

傳染源糞便血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液糞便傳播途徑糞-口經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜糞-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎類型ABCDE基因組類型ssRNAdsDNA

ssRNA

ssRNA

ssRNA第二十八頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日HepatitisBVirus乙型肝炎的病原體在全世界廣泛流行，估計全球半數(shù)以上人口已被HBV感染過，5%的人口為HBV慢性感染中國：乙肝高發(fā)區(qū)，人群HBsAg的檢出率達9.8%第二十九頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日HBVvirionTheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticle.第三十頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日HBVViralGenomeOrganizationHBsAgHBcAgHBeAg3200BasePairGenomeHepatocytereceptorbindngsiteHBVDNAPolymeraseProteinthattransactivatestranscriptionalpromotors第三十一頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日BothcomprisedofHBsAg第三十二頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日HBVnomenclatureHBV:hepatitisB

virusHBsAg:hepatitisBvirussurfaceantigenHBsAb:hepatitisBvirussurfaceantibodyHBcAg:hepatitisBviruscoreantigenHBcAb:hepatitisBviruscoreantibodyHBeAg:hepatitisBviruse

antigenHBeAb:hepatitisBviruse

antibody第三十三頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日抗原組成--HBsAg位于病毒表面，是一種糖蛋白4種亞型(adr,adw,ayr,ayw)歐美國家:adw我國漢族:adr我國少數(shù)民族:ayw判斷HBV感染的指標之一刺激機體產(chǎn)生保護性抗體即抗-HBs第三十四頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日抗原組成--HBcAg位于Dane顆粒核心部分和肝細胞核內(nèi)，在血清中不易檢出游離的HBcAg主要成分是蛋白質(zhì)刺激機體產(chǎn)生抗-HBc(非保護性抗體)在乙肝急性期、恢復期和HBsAg攜帶者中常可檢出抗-HBc抗-HBcIgM常提示病毒處于復制狀態(tài)第三十五頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日抗原組成--HBeAg位于HBV的核心,是一種可溶性蛋白抗原HBeAg和Dane顆粒出現(xiàn)相平行，且與DNA多聚酶在血中的消長動態(tài)相符合血中HBeAg的出現(xiàn)可作為HBV復制及血清有感染性的指標刺激機體產(chǎn)生抗-HBe抗-HBe能與受染肝細胞表面的e抗原結合,通過補體介導破壞受染的肝細胞,抗-HBe的出現(xiàn)是預后良好的征象第三十六頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日抗原組成--Pre-S抗原位于HBV的外衣殼上，有兩種刺激機體產(chǎn)生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻斷HBV與肝細胞受體結合，從而起到抵抗病毒的作用抗Pre-S1和抗Pre-S2的出現(xiàn)，表示病情好轉，趨向痊愈第三十七頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日傳染源患者潛伏期急性期慢性期無癥狀HBsAg攜帶者第三十八頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日

各種體液中HBV的濃度高中等低/不能檢出血液精液尿血清陰道分泌物糞便傷口滲出物唾液汗液淚液乳汁第三十九頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日血源性傳播輸血、注射、外科和牙科手術、針刺等剃刀、牙刷和蚊蟲叮咬等母嬰垂直傳播宮內(nèi)傳播分娩時微小皮損處傳播產(chǎn)后母嬰密切接觸性傳播HBV傳播途徑第四十頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日高(>8%):占45%一生感染的危險>60%嬰幼兒感染常見中等(2%～7%):占43%一生感染的危險是20%～60%感染存在于所有年齡組低(<2%):占12%一生感染的危險<20%許多感染發(fā)生在成人危險組GlobalPatternsofChronicHBVInfection第四十一頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日第四十二頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日病原學診斷---抗原抗體檢測項目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)發(fā)光免疫分析(定量)反相間接血凝試驗(少用)第四十三頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日ELISA的基本原理利用抗原和抗體特異性結合主要的試劑固相抗原或抗體酶標記的抗原或抗體酶的底物第四十四頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日ELISA的主要方法間接法:測定抗-HBs夾心法：測定HBsAg和HBeAg競爭法：測定抗-HBc中和法：測定抗-HBe捕捉法：測定抗-HBcIgM第四十五頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日病原學診斷(二)---核酸檢測核酸雜交探針PCR引物第四十六頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日HBsAg–感染的標志Anti-HBs–既往感染/接種疫苗Anti-HBcIgM–急性感染標志Anti-HBcIgG–既往或慢性感染HBeAg–急性病毒復制，有傳染性

Anti-HBe–病毒不再復制HBV-DNA–急性病毒復制，比HBeAg更準確；主要用于監(jiān)測治療反應第四十七頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日血清學檢測的臨床意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義急性或慢性感染(大三陽)+-+-++++乙肝后期或慢性感染(小三陽)--++---潛伏期或急性乙肝早期--+++痊愈或恢復期,有免疫力-----+++--痊愈,有免疫力疫苗接種或曾經(jīng)感染過,有免疫力第四十八頁，共五十四頁，編輯于2023年，星期日SymptomsHBeAganti-HBeTotalanti-HBcIgManti-HBcanti-HBsHBsAg0481216202428323652100AcuteHBVInfectionwith