主要禽病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法及結(jié)果分析詳解演示文稿

主要禽病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法及結(jié)果分析詳解演示文稿1本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（優(yōu)選）主要禽病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法及結(jié)果分析2本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)高度特異性反應(yīng)可逆性反應(yīng)二階段性影響反應(yīng)的因素3本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分血清學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用抗原抗體的快速檢測(cè)微生物的鑒定與分析生物活性物質(zhì)的超微定量抗原抗體在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平定位4本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分2、血清學(xué)反應(yīng)類型及常用試驗(yàn)方法反應(yīng)類型常用試驗(yàn)名稱凝集試驗(yàn)直接凝集試驗(yàn)→平板凝集試驗(yàn)（SPA）血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）沉淀試驗(yàn)瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）中和試驗(yàn)病毒中和試驗(yàn)（VN）標(biāo)記抗體技術(shù)酶標(biāo)記技術(shù)→酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）5本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（1）平板凝集試驗(yàn)（SPA）基本原理：細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒狀抗原與相應(yīng)抗血清在電解質(zhì)存在情況下，產(chǎn)生可見(jiàn)的顆粒凝集現(xiàn)象。主要應(yīng)用：雞白?。⊿P）支原體（MG/MS）6本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖1平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果7本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）基本原理：某些病毒（如NDV）能夠凝集特定種類動(dòng)物的紅細(xì)胞，此即紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。這種紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象可以被特異性抗血清所抑制，即紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)。主要應(yīng)用：新城疫（ND）禽流感（AI）產(chǎn)蛋下降綜合癥（EDS）雞傳染性支氣管炎（IB）8本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖2血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果G.Cattoli（OIE）9本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）基本原理：可溶性抗原（毒素、病毒、細(xì)菌裂解液）與相應(yīng)抗體結(jié)合,在電解質(zhì)存在情況下，產(chǎn)生可見(jiàn)的沉淀物。主要應(yīng)用：雞馬立克氏病病毒（MDV）雞痘病毒（FPV）10本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖3瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果1.抗原；2.陽(yáng)性對(duì)照；3-6.待檢血清；7.陰性對(duì)照11本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（4）病毒中和試驗(yàn)（VN）基本原理：抗原與相應(yīng)的抗血清按適當(dāng)比例混合作用后，可被中和而失去感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、組織細(xì)胞或雞胚的能力。主要應(yīng)用：雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）的血清分型。12本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖4采用雞胚接種進(jìn)行IBV分離空白對(duì)照病毒接種13本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖5采用中和試驗(yàn)對(duì)疑似IBV分離物進(jìn)行鑒定與分型空白對(duì)照病毒接種病毒+抗血清14本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（5）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）基本原理：抗原抗體反應(yīng)的特異性酶促反應(yīng)的高效性使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面并保持其免疫活性；使抗原（或抗體）與某種酶連接成酶標(biāo)物，這種酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留酶的活性。15本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分主要應(yīng)用：多種禽病檢測(cè)抗體檢測(cè)最常用ELISA方法：間接法，是利用酶標(biāo)記的抗抗體（一般為抗雞IgG）檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的抗體。16本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖6間接ELISA方法測(cè)抗體的基本原理示意圖固相載體包被抗原待檢抗體酶標(biāo)二抗底物顯色17本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分考慮血清學(xué)檢測(cè)的目的血清樣品的采集方法采集血清樣品的數(shù)量血清樣品的標(biāo)記血清樣品的貯藏及運(yùn)輸3、血清學(xué)檢測(cè)應(yīng)注意的問(wèn)題18本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分1、病原分離鑒定（1）定義：指通過(guò)人工培養(yǎng)的方法分離出病原體的過(guò)程。（二）病原學(xué)檢測(cè)方法19本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）病原分離主要目的進(jìn)行疾病診斷疾病確診的黃金方法病原學(xué)研究的基礎(chǔ)20本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）病原分離方法細(xì)菌分離培養(yǎng)：各種培養(yǎng)基病毒分離鑒定：雞胚、細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物接種21本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（4）進(jìn)行病毒分離應(yīng)注意的問(wèn)題樣品采集時(shí)間采集樣品種類樣品貯藏及運(yùn)輸常見(jiàn)接種途徑常用鑒定方法22本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分2、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）（1）主要目的：通過(guò)對(duì)特異性基因片段的檢測(cè)達(dá)到檢測(cè)病原體的目的。（2）優(yōu)缺點(diǎn)：方便快捷、存在假陽(yáng)（陰）性23本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖7常規(guī)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果（電泳圖）24本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分3、其它病原學(xué)檢測(cè)方法（1）血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)（2）瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）（3）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）（4）膠體金試紙條檢測(cè)（5）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢查25本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分1、雛雞母源抗體檢查（1-3日齡）（1）了解原產(chǎn)地的免疫種類了解原產(chǎn)地易發(fā)病種類及保護(hù)性水平確定需根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r加免的疫苗根據(jù)抗體反應(yīng)追蹤是否有過(guò)感染二、實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)方案的制定26本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）了解母源抗體水平根據(jù)母源抗體水平及各種疫病母源抗體半衰期合理確定疫苗首免時(shí)間了解雛雞免疫保護(hù)能力，便于疫病診斷27本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分2、免疫檢查（1）免疫前檢查目的是了解免前抗體水平、決定免疫時(shí)間和進(jìn)行免疫效果評(píng)價(jià)。初免前檢查再免前檢查28本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）免疫后檢查目的是檢查免疫效果，評(píng)價(jià)免疫成功或失敗，盡快采取相應(yīng)措施確保生產(chǎn)安全。通常應(yīng)選擇免疫后14-21天進(jìn)行。29本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）定期檢查目的是規(guī)律性檢查抗體消長(zhǎng)水平以便及時(shí)采取補(bǔ)救措施，分析各種免疫之間的相關(guān)性，調(diào)整免疫程序。30本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（4）重要節(jié)點(diǎn)檢查30~50d檢查（檢查前幾次免疫效果）開(kāi)產(chǎn)前檢查（產(chǎn)蛋期及雛雞保護(hù)性抗體需求）36~40W檢查（確定抗體水平、適時(shí)補(bǔ)免）31本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分3、生產(chǎn)發(fā)生變動(dòng)時(shí)的檢查（1）日常規(guī)律性抗體監(jiān)測(cè)做為發(fā)病時(shí)檢查的參考數(shù)據(jù)做為雞群抵抗力的依據(jù)，指示病因分析方向做為流行病學(xué)分析數(shù)據(jù)，利于發(fā)現(xiàn)病原變異32本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）雙份血清檢測(cè)鑒于發(fā)病后抗體常有明顯升高，雙份血清抗體值對(duì)比分析有很好的診斷價(jià)值。33本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）抗原檢測(cè)某些情況下，抗原檢測(cè)可以直接證實(shí)感染狀況的存在。34本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（4）未免疫雞群抗體檢測(cè)未免疫雞群某疾病抗體的出現(xiàn)，特別注意雛雞母源抗體消失后抗體的再出現(xiàn)以及隨日齡增加而抗體持續(xù)上升的現(xiàn)象，這對(duì)疾病診斷十分重要。35本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分4、重要疫病流行動(dòng)態(tài)分析流行動(dòng)態(tài)分析對(duì)生產(chǎn)企業(yè)來(lái)說(shuō)，開(kāi)展具有一定的難度，但對(duì)重要疫病，尤其是重點(diǎn)進(jìn)行免疫防控的疫病仍然值得重視，對(duì)長(zhǎng)期的流行資料進(jìn)行分析，會(huì)得到極為有益的技術(shù)支持。36本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分流行動(dòng)態(tài)分析需要進(jìn)行大量工作，除抗體監(jiān)測(cè)外，必需配合針對(duì)性的實(shí)驗(yàn)室研究工作，如病原分離鑒定、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和必要的分子生物學(xué)研究。37本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分1、HI檢測(cè)結(jié)果與分析（1）常見(jiàn)HI檢測(cè)結(jié)果1-3d15-25d25-35d35-50d>50d開(kāi)產(chǎn)前36w左右≥40wH5N125-720-320-423-526-727-925-627-9H9N225-920-323-524-727-829-1226-729-11ND25-920-323-525-827-1029-1227-829-12三、重要疫病的常見(jiàn)檢查結(jié)果與分析38本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖8種雞開(kāi)產(chǎn)前NDV抗體檢測(cè)情況39本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）免疫抗體空檔期15-25d是母源抗體逐漸消失，新的免疫抗體尚未建立的時(shí)期野毒侵襲大多發(fā)生于此，一般18-25d多發(fā)空檔期隨免疫（程序和疫苗）成功達(dá)到最短40本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖9NDV母源抗體衰減情況41本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖1015-30日齡雛雞NDV抗體檢測(cè)情況42本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）HI檢查的抗體離散度在4lg2內(nèi)是允許范圍大于4lg2的基本原因初免時(shí)母源抗體水平參差不齊免疫成功率不高-漏免太多疫苗質(zhì)量不好二免后離散度應(yīng)達(dá)到要求43本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（4）抗體保護(hù)臨界值通過(guò)攻毒試驗(yàn)加以驗(yàn)證的結(jié)果AIV要求≥26NDV要求≥28-10臨界值是針對(duì)有效保護(hù)對(duì)等而言，即疫苗和流行毒株有良好的相關(guān)性。當(dāng)流行毒株變異而疫苗株保護(hù)性不足時(shí)，原有臨界值在一定程度上失去意義，需要新確立或提高臨界值水平。44本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（5）診斷試劑問(wèn)題抗原問(wèn)題：抗原不純（影響HA的確定）抗原制備毒株和流行毒株存在明顯差異陽(yáng)性血清問(wèn)題：陽(yáng)性血清不純45本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（6）診斷指標(biāo)H5N1雙份血清檢測(cè)：應(yīng)用常規(guī)

Re-4、Re-5苗免疫情況下，如果知道發(fā)病前抗體水平，則發(fā)病后10-14d可檢測(cè)出Re-4、Re-5抗體滴度上升22-3。未免相應(yīng)疫苗的情況下，檢測(cè)變異株抗體達(dá)到26-9有診斷價(jià)值。46本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖11某肉種雞群發(fā)生H5感染前后抗體檢測(cè)結(jié)果（38W發(fā)生，2W產(chǎn)蛋率75%→5%，死淘20%）47本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖12某肉種雞群H5感染后變異株抗體檢測(cè)結(jié)果（換羽24W發(fā)生，降蛋10%，累計(jì)死亡率5%）48本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分H9N2產(chǎn)蛋雞發(fā)病后10-14天，HI抗體20%以上達(dá)到212以上有診斷價(jià)值。雛雞20-30dHI抗體達(dá)到26-9有診斷價(jià)值。49本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分ND產(chǎn)蛋雞發(fā)病后10-14d，HI抗體≥213有診斷價(jià)值。雛雞20-35dHI抗體達(dá)到26-9有診斷價(jià)值。50本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分圖13某肉種雞群發(fā)生NDV感染后抗體檢測(cè)結(jié)果51本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分HI診斷應(yīng)注意的問(wèn)題HI診斷應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)，當(dāng)臨床表現(xiàn)無(wú)異常而檢測(cè)結(jié)果異常時(shí)往往是檢測(cè)結(jié)果出了錯(cuò)，應(yīng)提高警惕。52本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分2、平板凝集試驗(yàn)（SPA）檢測(cè)結(jié)果與分析（1）可用于MG、MS、SP檢查（2）可進(jìn)行血清平板和全血平板，相對(duì)來(lái)說(shuō)血清平板更準(zhǔn)確和易于判斷。53本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）SPA準(zhǔn)確率相對(duì)較差，假陽(yáng)性率高，一般群體檢查超過(guò)30%以上陽(yáng)性才有確實(shí)群體感染的診斷意義。（4）國(guó)內(nèi)產(chǎn)品和國(guó)外產(chǎn)品特異性上有一定差距。54本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分3、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）檢測(cè)結(jié)果與分析（1）可用于MD、POX和IC（2）對(duì)MD可進(jìn)行抗體、抗原兩種檢測(cè)50d左右，50%以上抗體陽(yáng)性預(yù)示疫苗反應(yīng)正常用羽髓做瓊擴(kuò)有發(fā)病診斷價(jià)值55本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）POX常不用檢測(cè)，通過(guò)觀察接種部位反應(yīng)可了解免疫效果，觀察臨床癥狀進(jìn)行疫病診斷。（4）IC的瓊擴(kuò)試劑很少，可從國(guó)外進(jìn)口或選用日本北里所的間接血凝試劑。56本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分4、ELISA檢測(cè)結(jié)果與分析（1）目前可應(yīng)用ELISA檢測(cè)的疾病ND、AIMG、MS、SPIB、IBD、REO、AE、RE、ILT、CIAALV-A/B、ALV-J、ALV-Ag57本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（2）常見(jiàn)ELISA檢測(cè)結(jié)果1-3d15-25d25-35d>50d開(kāi)產(chǎn)前產(chǎn)蛋期IB2000-80000-10001000-20002000-80002000-150002000-15000IBD2000-80000-15002000-40004000-100004000-100004000-12000REO2000-50000-5000-20002000-60002000-150002000-15000ILT2000-30000-10000-5002000-40002000-60002000-6000AE500-20000-5000-300300-6000300-8000500-8000CIA+（<0.3）+/--+/-+（<0.1）+（<0.1）58本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（3）ELISA試劑盒之間的差異每種試劑盒都有自己的特定的陽(yáng)性值及敏感范圍。原則上同一疾病不同廠家ELISA試劑盒之間沒(méi)有直接可比性，除非做過(guò)平行對(duì)比研究。同一病原的抗體檢測(cè)可能針對(duì)的抗原表位不同會(huì)得到不同結(jié)果，要格外慎重。59本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分（4）對(duì)REV檢測(cè)結(jié)果的認(rèn)識(shí)REV抗體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)該為陰性。20-30d檢出陽(yáng)性率超過(guò)20％則預(yù)示雞群可能存在嚴(yán)重免疫抑制問(wèn)題。60本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期三\1點(diǎn)29分當(dāng)1-15d檢出100％陽(yáng)性率時(shí)，可能大雞免疫或污染過(guò)；檢出少于5％陽(yáng)性率時(shí)，可能種雞是污染群或假陽(yáng)性結(jié)果。超過(guò)30d以上的檢測(cè)通常都只能做為污染的佐證，