分子生物學實驗項目三

PAGEPAGE4實驗三植物基因組DNA的提取實驗目的通過本實驗學習從植物組織中提取DNA的方法。實驗原理利用液氮對植物組織進行研磨，從而破碎細胞。細胞提取液中含有SDS溶解膜蛋白而破壞細胞膜，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液經(jīng)乙醇沉淀。儀器、材料與試劑（一）儀器1低溫離心機2恒溫水浴鍋3臺式離心機4瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)5微量加樣器（二）材料與試劑1三羥甲基氨基甲烷（Tris）2乙二胺四乙酸（EDTA）3氯化鈉（Nacl）4β-巰基乙醇5氯化鉀（KCl）6異丙醇7乙醇8瓊脂糖9十二烷基硫酸鈉（SDS）1050mL離心管11陶瓷研缽12吸頭、小指管13細胞提取液100mmol/LTris.HCl(PH8.0)5mmol/LEDTA(PH8.0)500mmol/LNacl1.25%SDS1mmol/Lβ-巰基乙醇145mol/LKCl15TE緩沖液10mmol/LTris.HCl(PH8.0)1mmol/LEDTA(PH8.0)16哥倫比亞野生型擬南芥（ArabidopsisColumbia）三周幼葉。17TIANGEN基因組DNA提取試劑盒（PlantGenomicDNAKit）（離心柱型）。實驗步驟一、自配試劑提取步驟1取4g新鮮葉片，在液氮中充分研磨成粉末狀（越細越好）。2將研磨好的粉末轉(zhuǎn)移至50mL的離心管中，加入16mL細胞提取液，充分混勻，65℃3從水浴中取出離心管，加入5mL5mol/L的KCl溶液，混勻，冰浴20min。44000r/min離心20min。5降上清液轉(zhuǎn)移到另一50mL的離心管中。6加等體積的酚/氯仿混勻，12000r/min離心5min，取上清。7加等體積氯仿，混勻，12000r/min離心5min，取上清。8加入0.6-1倍體積的異丙醇（沉淀DNA），混勻。9離心獲得沉淀，加70%乙醇洗滌3次，風干沉淀。10加入500μLTE緩沖液，溶解DNA。11取3mL上清液，瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的濃度和質(zhì)量。二植物基因組DNA提取試劑盒提取步驟1、擬南芥基因組DNA的提取4、擬南芥簡介擬南芥（Arabidopsisthaliana）十字花科。二年生草本，高7～40厘米?；~有柄呈蓮座狀，葉片倒卵形或匙形；莖生葉無柄，披針形或線形。總狀花序頂生，花瓣4片，白色，匙形。長角果線形，長1～1.5厘米?；ㄆ?～5月。我國內(nèi)蒙、新疆、陜西、甘肅、西藏、山東、江蘇、安徽、湖北、四川、云南等省區(qū)均有發(fā)現(xiàn)。擬南芥的優(yōu)點是植株小（1個茶杯可種植好幾棵）、每代時間短（從發(fā)芽到開花不超過6周）、結(jié)子多（每棵植物可產(chǎn)很多粒種子）、生活力強（用普通培養(yǎng)基就可作人工培養(yǎng)）。擬南芥的基因組是目前已知植物基因組中最小的。每個單倍染色體組（n=5）的總長只有7000萬個堿基對，即只有小麥染色體組長的1/80，這就使克隆它的有關基因相對說來比較容易。擬南芥是自花受粉植物，基因高度純合，用理化因素處理突變率很高，容易獲得各種代謝功能的缺陷型。例如用含殺草劑