護肝寶對四氯化碳急性肝損傷大鼠肝膽轉(zhuǎn)運功能的影響

護肝寶對四氯化碳急性肝損傷大鼠肝膽轉(zhuǎn)運功能的影響【摘要】目的研究中藥組方護肝寶對四氯化碳(CCl4)所致急性肝損傷大鼠的靛氰綠(ICG)肝清除率的影響。方法將32只大鼠隨機分為空白對照組、模型組和護肝寶高、低劑量組，每組8只。用CCl4制作大鼠急性肝損傷模型，測定下列變化：①大鼠血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST);②肝臟形態(tài)學的改變;③肝血流量和靛氰綠肝清除率的改變;觀察護肝寶對CCl4大鼠急性肝損傷的影響。結(jié)果護肝寶能明顯抑制CCl4所致大鼠血清中ALT及AST含量的升高(P或P)，改善肝臟病理，對抗CCl4所致肝血流量和肝清除率下降(P)。結(jié)論護肝寶可保護肝臟，對抗CCl4所致肝清除率和肝血流量下降。

【關(guān)鍵詞】護肝寶;四氯化碳;靛氰綠;肝清除率

肝臟是藥物消除的重要器官。有研究結(jié)果表明[1，2]，四氯化碳(CCl4)所致急性肝損傷可造成肝膽轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的損害，影響染料指示劑靛氰綠(Indocyaninegreen，ICG)在肝膽內(nèi)的轉(zhuǎn)運過程，但目前關(guān)于肝病治療藥物對這一轉(zhuǎn)運過程的影響尚未見報道。中藥復方制劑護肝寶是我課題組自行研究的一種中藥復方制劑，由黃芪、丹參、虎杖等藥物組成，具有益氣活血、舒肝利膽、清熱解毒、燥濕利濕等作用，治療急性肝炎取得了良好的療效。本實驗研究了護肝寶對CCl4所致急性肝損傷大鼠肝臟對ICG清除的影響。結(jié)果如下。

1材料

雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量220～250g，由河北醫(yī)科大學動物學部提供。動物分組：將大鼠隨機分為空白對照組，CCl4急性肝損傷病理模型組、護肝寶高劑量組(80g生藥/kg·d)和低劑量組(40g生藥/kg·d)，每組8只。高、低劑量組連續(xù)灌胃給藥7d，1次/d;空白對照組、病理模型組灌等量生理鹽水。灌胃第7日時，給模型組、護肝寶大、小劑量給藥組大鼠灌胃(ig)1次給予體積分數(shù)為50%的CCl4溶液2ml/kg，對照組ig給予等量生理鹽水，24h后進行實驗。主要試劑：ICG，比利時ACROS公司生產(chǎn);CCl4，北京化學試劑廠生產(chǎn)。

2方法

觀察指標及方法

血液生化檢測測定指標包括丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)。

肝臟組織學檢查取動物肝臟，甲醛固定，石蠟包埋，切片染色，進行組織學觀察。

肝血流量及肝臟清除率測定大鼠頸靜脈連續(xù)注入ICG，采取改良的簡易肝血流量測定法測定肝血流量及ICG肝清除率,具體方法①肝靜脈和股動脈插管分別收集血液標本;②股靜脈插管以進行ICG的連續(xù)注入：采用微量自動注入泵,注入速度為119μmol/h。第30和40分鐘時分別自股動脈收集ml的股動脈血，第35和40分鐘時分別自肝靜脈收集ml的肝靜脈血，所收集血漿經(jīng)11倍稀釋后用紅外光譜測定儀測定805～800nm處ICG吸收峰值，根據(jù)標準曲線計算濃度，再根據(jù)下列計算公式計算肝血流量和ICG肝清除率

肝血流量=I/Cpa-CPv;ICG肝清除率=I/CPa

上式中I：ICG注入速度;Cpa：ICG動脈血中濃度;CPv：ICG肝靜脈血中濃度。

學處理所有數(shù)據(jù)用±s表示，統(tǒng)計進行方差分析。

3結(jié)果

護肝寶對ALT及AST含量的影響護肝寶明顯抑制CCl4所致急性肝損傷大鼠血清中ALT及AST含量的升高(P，P)。結(jié)果見表1。表1護肝寶對急性肝損傷大鼠血清ALT，AST的影響與模型組比較,*P，**P，***P;n=8

護肝寶對肝臟學影響光鏡觀察可見CCl4肝損傷大鼠肝細胞排列紊亂，炎細胞浸潤，肝細胞空泡變性，胞漿疏松化、氣球樣變和肝細胞濁腫。由于肝細胞變性壞死，所剩細胞減少，被擴張的肝竇所取代而出現(xiàn)肝竇變寬。還可見中心靜脈區(qū)域損害程度遠甚于門脈區(qū)域。護肝寶能減輕肝細胞腫脹、肝組織壞死、炎性細胞浸潤等病變化(P，P)，結(jié)果見表2。護肝寶對肝血流量及ICG肝臟清除率的影響CCl4肝損傷大鼠肝血流明顯減慢(P)，ICG肝臟清除率明顯下降(P)。結(jié)果見表3。表2護肝寶對各組動物肝組織病理變化的影響例表3護肝寶對急性肝損傷大鼠肝血流量和ICG肝清除率的影響

4討論

影響ICG在血漿中消除的主要原因是肝血流量、有功能肝細胞總數(shù)、膽汁排泄和膽道暢通的程度等因素。近期有研究結(jié)果顯示，CCl4所致急性肝損傷可引起肝細胞顯著破壞，肝血流量減少，引起肝膽轉(zhuǎn)運系統(tǒng)損害，影響ICG自血液進入肝細胞，導致肝臟清除ICG功能減退。護肝寶由黃芪、丹參、虎杖、柴胡、黃芩、龍膽草等中藥組成，方中虎杖利膽活血，清熱解毒;黃芪、丹參益氣活血;龍膽草苦寒瀉火解毒;黃芩、梔子清熱解毒，瀉火燥濕，諸藥合用，共奏益氣活血、舒肝利膽、清熱解毒、燥濕利濕之功效。單味藥的研究結(jié)果表明[3，4]，黃芪對于小鼠急性中毒性肝炎模型有保護肝臟，防止肝糖原減少的作用。組織化學法檢查肝臟可見糖原增加，溶酶體及組織脫酶體活躍。具有很好的調(diào)節(jié)免疫功能的作用和一定的抗病毒作用。黃芪對不同類型的急慢性肝炎的作用也有報道，其疏肝作用在上有廣泛的實用價值。丹參有改善微循環(huán)障礙、改變血液流變、抗凝血、抗炎、耐缺氧、提高免疫功能、抗腫瘤活性等多種藥理作用;臨床研究表明，丹參對急慢性肝病確有療效，具有良好的護肝降酶，軟縮肝脾，改善血清蛋白含量，提高免疫功能，促進纖維吸收，對慢性肝炎轉(zhuǎn)化為肝硬化起延緩與阻斷作用。丹參可明顯改變臨床癥狀、黃疸指數(shù)(TBil)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)，為治療急慢性肝炎的有效藥物。

本實驗結(jié)果表明，護肝寶能對抗CCl4所致肝血流量和肝清除率下降，使肝膽轉(zhuǎn)運功能改善，此作用可能與護肝寶明顯抑制CCl4所致急性肝損傷大鼠血清中ALT及AST含量的升高，減輕肝細胞的變性、壞死等病理學改變以及促進大鼠的膽汁分泌有關(guān)，詳細機理有待進一步探討。

【參考文獻】

HongSS,ChungSJ,ShimCK.FunctionalimpairmentofsinusoidalmembranetransportoforganiccationsinratswithCCl4-inducedhepaticfailure[J].PharmRes,2000,17:833.

楚立，張建平，張鳳華，等.靛氰綠在四