兔兒傘不同溶劑提取物的體外抗氧化作用研究

兔兒傘不同溶劑提取物的體外抗氧化作用研究【摘要】目的探討兔兒傘乙醇、丙酮、醋酸乙酯、水提取物體外抗氧化能力。方法利用微波輔助提取法分別得到了兔兒傘乙醇提取物、丙酮提取物、醋酸乙酯提取物和水提取物，采用Fonton反應體系產生羥基自由基和鄰苯三酚自氧化產生超氧陰離子自由基。結果4種提取物對羥自由基、超氧陰離子自由基(O2-·)均有清除作用，其中以乙醇提取物的效果最佳。結論兔兒傘可作為抗氧化物質資源，有一定的開發(fā)利用價值。

【關鍵詞】兔兒傘；自由基；抗氧化活性

自由基(freeradical)也稱活性氧，很多情況下，它都缺少一個電子，處于不穩(wěn)定的狀態(tài)。不穩(wěn)定的自由基會從周圍的物質中奪取電子配對，這種行為就是自由基的氧化作用。被奪走電子的物質，又去搶奪其它物質的電子。就這樣，爭奪電子的連鎖反應逐漸擴散到各處，細胞一個一個被氧化，從而失去了其正常功能。越來越多的科學研究證實自由基是人體疾病和衰老的直接制造者。人只要活著，自由基就在不斷生成。自由基一旦大量產生，超過身體內酶所能處理的程度，人的健康就會亮起紅燈，出現(xiàn)癌癥、動脈硬化、糖尿病、白內障、風濕性關節(jié)炎、巴金森氏癥等多種疾病［1］。動物實驗也指出，壽命的長短與自由基的產生及人體內抗氧化劑的濃度確實有密切的關聯(lián)；流行病學與研究也顯示，如果人體內有足夠的抗氧化劑，則可降低多種疾病的罹患幾率。然而研究發(fā)現(xiàn)，合成抗氧化劑對人體具有潛在的威脅，如BHA可造成大鼠前胃增生、乳狀瘤甚至癌變，在日本已被禁用;BHT能使人的Wl-38胚胎細胞分裂后期發(fā)生陽性的染色體異常，甚至導致死亡，因此在美國和日本已經停止使用。隨著消費者自身健康意識的提高，天然抗氧化劑日益受到重視［2～4］。因此，研究開發(fā)廣譜、高效、安全的天然抗氧化劑，已經成為當今的研究之一。

兔兒傘Synlesisaconitifolia(Bunge)Maxim.為菊科兔兒傘屬多年生草本植物［5］，含有黃酮、維生素、多糖等多種保健活性成分和營養(yǎng)成分，其嫩葉和幼苗在我國民間許多地方都作為一種藥食兩用食品，很受歡迎［6］。研究表明兔兒傘中黃酮類化合物及生物堿含量較高［7，8］，藥對其抗炎鎮(zhèn)痛作用進行了探討［9］，而對兔兒傘進行自由基清除的抗氧化研究未見報道，本文首次對兔兒傘提取物的抗氧化活性進行了探討，以期為兔兒傘作為一種天然的抗氧化物得到推廣和利用。

1材料與儀器

材料

兔兒傘由安徽師范大學張中信老師于2007-06采自安徽黃山，經安徽師范大學張小平教授鑒定為兔兒傘Synlesisaconitifolia(Bunge)Maxim.。

儀器與試劑

WF-4000微波快速反應系統(tǒng)；UV1900PPC紫外可見分光光度計；電子天平(北京賽多利斯天平儀器廠)。所有試劑均為分析純。

2方法

兔兒傘不同溶劑提取物制備將一定量的兔兒傘干燥粉末置于微波反應釜中，分別以水、乙醇、丙酮、醋酸乙酯為溶劑，料液比為1∶60，微波功率800W，提取3次，15min/次，合并提取液，減壓濃縮，真空干燥備用。

羥自由基(·OH)的清除能力采用亞鐵離子催化H2O2產生·OH(Fonton反應)的方法［10，11］。取mol/L鄰二氮菲溶液lml，PBS液2ml和蒸餾水1ml，充分混勻后，加mmol/L硫酸亞鐵Iml，混勻，加%的H2O2lml，37℃水浴60min，以PBS液調零，536nm處測定吸光度，其值記為AP；用lml蒸餾水代替lmlH2O2，以PBS調零，測得吸光度記為AB；用1ml試樣代替1ml蒸餾水，以同濃度不加H2O2的加試樣管調零，測得吸光度記為As。·OH清除率(d%)計算公式:d(%)=(As-AP)/(AB-Ap)×100%。

超氧陰離子自由基(O2-·)清除能力取mol/LpH的Tris一HCl緩沖液mol于試管中，置25℃水浴預熱20min，加入供試樣品，mmol/L鄰苯三酚ml，混勻后在25℃水浴反應4min加8mmol/L鹽酸兩滴終止反應，nm處測定吸光度，空白組以ml蒸餾水代替供試樣品，并按下式計算清除率［12］。d%=(A空白-A樣品)/A空白×100%。

3結果

不同溶劑提取物對羥自由基的清除作用兔兒傘不同溶劑提取物對·OH的清除作用如1所示。乙醇提取物對羥自由基清除率的回歸方程是:Y=79+04X，丙酮提取物對羥自由基清除率的回歸方程是：Y=+53X，水提取物對羥自由基清除率的回歸方程是Y=+5X，醋酸乙酯提取物對羥自由基清除率的回歸方程是Y=+5X，由回歸方程可求出兔兒傘的乙醇、丙酮、水、醋酸乙酯提取物對·OH清除率為50%時的提取物濃度分別為：，，，mg/ml。由此可見，4種溶劑提取物對羥自由基均有一定的清除作用，其中乙醇提取物對羥自由基的清除效果最好。

不同溶劑提取物對超氧陰離子自由基的清除作用兔兒傘不同溶劑提取物對O2-·的清除作用如圖2所示。乙醇提取物對超氧陰離子自由基的清除率回歸方程是:Y=04+11X，丙酮提取物對超氧陰離子自由基的清除率回歸方程是：Y=98+75X，水提取物對超氧陰離子自由基的清除率回歸方程是Y=，醋酸乙酯提取物對超氧陰離子自由基的清除率回歸方程是Y=+，由曲線方程可求出兔兒傘的乙醇、丙酮、水、醋酸乙酯提取物對超氧陰離子自由基的清除率為50%時的提取物濃度分別為：，，，mg/ml。由此可見，兔兒傘4種提取物對超氧陰離子都有一定的清除作用，其中乙醇提取物對超氧陰離子自由基的清除效果最好。圖2兔兒傘不同溶劑提取物對超氧陰離子自由基的清除作用

4討論

人體內的氧自由基如游離羥基、超氧陰離子等的過量產生，是人體細胞衰老凋亡和癌變的重要原因?！H是毒性最大的活性氧，它可以加成至堿基雙鍵中，破壞堿基，從而破壞細胞內DNA的結構，導致基因突變［13］。研究發(fā)現(xiàn)黃酮類物質、花色苷等可作為抗氧化藥物對心血管起保護作用［14］。研究發(fā)現(xiàn)兔兒傘4種提取物均有一定的清除O2·和·OH的作用，這可能與其含有的黃酮類化合物有關，其中乙醇提取物對自由基的清除效果最好，可能是因為以乙醇為提取劑時其中黃酮類化合物含量最高所致。因此，兔兒傘作為一種潛在的抗氧化功能食品有待進一步深入研究。

【參考文獻】

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