醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)

醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第1頁。概述直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、肌肉、皮下組織或接觸創(chuàng)傷、潰瘍等部位而發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料、滅菌器具等都要進(jìn)行無菌檢查?！盁o菌”是指無存活微生物，無菌保證水平（SAL）=10-6；“無菌醫(yī)療器械”表示為醫(yī)療器械中，有存活微生物的醫(yī)療器械的概率小于10-6，即一百萬件中小于1件。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第2頁。無菌檢驗(yàn)用于檢驗(yàn)一次性使用無菌醫(yī)療器械是否染有活菌的一種方法。本實(shí)驗(yàn)系將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品是否有細(xì)菌和真菌污染，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，同時(shí)也應(yīng)避免在抑菌條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第3頁。檢測標(biāo)準(zhǔn)GB/T14233-2：2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第二部分：生物試驗(yàn)方法》中“3.無菌實(shí)驗(yàn)”；《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄XIH“無菌檢查法”；ISO11737-2：2009Sterilizationofmedicaldevices–Microbiologicalmethods—Part2:Testofsterilityperformedinthedefinition,validationandmaintenanceofasterilizationprocess.醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第4頁。實(shí)驗(yàn)條件無菌操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)環(huán)境實(shí)驗(yàn)器材醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第5頁。無菌操作技術(shù)微生物學(xué)基礎(chǔ)微生物實(shí)踐基礎(chǔ)無菌操作意識醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第6頁。實(shí)驗(yàn)環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)；定期按GB/T16292-16294：2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證；實(shí)驗(yàn)中監(jiān)控：實(shí)驗(yàn)時(shí)將制備好的營養(yǎng)瓊脂平板打開放于實(shí)驗(yàn)臺上，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束收起，30℃~35℃培養(yǎng)48h，菌落平均數(shù)應(yīng)≦1cfu/φ90mm。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第7頁。實(shí)驗(yàn)器具儀器超凈工作臺、光學(xué)顯微鏡、生化培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀、比濁儀等。用具試管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精密pH試紙、集菌培養(yǎng)器、剪刀、鑷子、無菌服、牛皮紙等。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第8頁。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境保證實(shí)驗(yàn)試液培養(yǎng)基滅菌方法醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第9頁。實(shí)驗(yàn)環(huán)境保證環(huán)境清潔，表面消毒（75%(V/V)乙醇、新潔爾滅(1：1000)溶液或其他適宜消毒溶液）空氣過濾系統(tǒng)，紫外燈或臭氧空氣消毒儀醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第10頁。實(shí)驗(yàn)試液

稀釋劑

1.0.9%氯化鈉溶液

2.0.1%蛋白胨水溶液

3.pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液：調(diào)解pH至近中性，其中蛋白胨對菌細(xì)胞有保護(hù)作用，有利于菌數(shù)及控制菌測定表面活性劑與中和劑醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第11頁。培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)需氧菌、厭氧菌)，置30℃~35℃培養(yǎng)；其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。在供試品接種前,培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則,須經(jīng)

100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過

20分鐘）迅速冷卻,只限加熱一次，并應(yīng)防止被污染。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第12頁。培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)真菌）置23~28℃培養(yǎng)；歐、美、日藥典：大豆酪蛋白水解液培養(yǎng)基（SCD），適用于需氣、厭氣真菌及需氣菌培養(yǎng)。中國藥典、GB、USP、EP、FDA：胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）,胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），應(yīng)用于一般細(xì)菌的培養(yǎng)，藥品、生物制品的無菌試驗(yàn)及消毒劑消毒效果的檢測。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第13頁。培養(yǎng)基 保存：2℃~25℃、避光保存時(shí)間非密閉容器中：一般在三周內(nèi)使用密閉容器中：一般可在一年內(nèi)使用醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第14頁。滅菌方式濕熱：115℃~121℃，15min~30min

滅菌結(jié)束，物品切勿立即取出置冷處，以免急速冷卻，使滅菌物品內(nèi)蒸氣冷凝造成負(fù)壓，以致染菌。干熱：160℃~170℃，2h

適于耐高溫的玻璃、陶瓷或金屬器皿的滅菌。滅菌程序需要經(jīng)過驗(yàn)證醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第15頁。培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基的無菌性檢查培養(yǎng)基靈敏度檢查本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第16頁。培養(yǎng)基的無菌性檢查每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶），培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第17頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查菌種金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003］銅綠假單胞菌［CMCC（B）10104］枯草芽孢桿菌［CMCC（B）63501］生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第18頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查菌株要求

傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第19頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查菌液制備取細(xì)菌新鮮培養(yǎng)物（一般培養(yǎng)18h~24h，白念24h~48h，黑曲霉5~7天），用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液（黑曲霉用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液）。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第20頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查培養(yǎng)基接種金黃色葡萄球菌2支銅綠假單胞菌2支硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基枯草芽孢桿菌2支生孢梭菌2支空白對照1支每管小于100cfu，培養(yǎng)3天。

醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第21頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查培養(yǎng)基接種

白色念株菌2支

改良馬丁培養(yǎng)基黑曲霉2支

空白對照1支每管小于100cfu，培養(yǎng)5天。

醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第22頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查培養(yǎng)基接種金黃色葡萄球菌2支銅綠假單胞菌2支枯草芽孢桿菌2支胰蛋白胨大豆肉湯生孢梭菌2支白色念珠菌2支黑曲霉2支空白對照1支每管小于100cfu，培養(yǎng)7天。

醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第23頁。培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果判斷空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第24頁。方法驗(yàn)證無菌實(shí)驗(yàn)方法薄膜過濾法優(yōu)先采用封閉式薄膜過濾器，也可使用一般薄膜過濾器。直接接種法醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第25頁。方法驗(yàn)證當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查：薄膜過濾法規(guī)定量的供試品

過濾

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

濾膜

接種

改良馬丁培養(yǎng)基

胰蛋白胨大豆肉湯沖洗

▲每種菌均作1管不含供試品管作為對照加入試驗(yàn)菌過濾醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第26頁。方法驗(yàn)證直接接種法硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌2管、大腸埃希菌2管、枯草芽孢桿菌2管、生孢梭菌2管

改良馬丁培養(yǎng)基：白色念珠菌2管、黑曲霉2管胰蛋白胨大豆肉湯：金黃色葡萄球菌2管、銅綠假單孢菌2管、枯草芽孢桿菌2管、生孢梭菌2管、白色念珠菌2管、黑曲霉2管

每種菌均作1管接入規(guī)定量的供試品，另1管作為對照醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第27頁。方法驗(yàn)證結(jié)果判斷與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長良好，則供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，可照此檢查法和檢查條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中試驗(yàn)菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第28頁。供試品無菌檢驗(yàn)細(xì)菌檢測管：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基+供試品真菌檢測管：改良馬丁培養(yǎng)基+供試品陽性對照管：對應(yīng)陽性菌+對應(yīng)培養(yǎng)基+供試品陰性對照管：培養(yǎng)基醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第29頁。供試品無菌檢驗(yàn)檢驗(yàn)數(shù)量：是指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。一般情況下，供試品無菌檢查若采用薄膜過濾法，應(yīng)增加最小檢驗(yàn)數(shù)量的1/2作陽性對照用；若采用直接接種法，應(yīng)增加供試品無菌檢查時(shí)每個(gè)培養(yǎng)基容器接種的樣品量作陽性對照用。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第30頁。供試品無菌檢驗(yàn)檢驗(yàn)量：是指一次試驗(yàn)所用的供試品總量（g或ml）。采用直接接種法時(shí)，若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于直接接種法的供試品總接種量，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第31頁。批出廠產(chǎn)品最少檢驗(yàn)數(shù)量供試品批產(chǎn)量N（個(gè)）接種每種培養(yǎng)基所需最少檢驗(yàn)數(shù)量注射劑大體積注射劑(＞100ml)≦100100＜N≦500＞50010%或4個(gè)10個(gè)2%或20個(gè)(取較少者)2%或10個(gè)(取較少者)眼用及其他非注射產(chǎn)品≦200＞5005%或2個(gè)(取較多者)10個(gè)桶裝固體原料抗生素原料藥(≧5g)≦44＜N≦50＞50每個(gè)容器20%/2%或4/10個(gè)容器(取較多者)6個(gè)容器醫(yī)療器具≦100100＜N≦500＞50010%或4件(取較多者)10件2%或20件(取較少者)醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第32頁。液體制劑最少檢驗(yàn)量及

上市抽驗(yàn)樣品的最少檢驗(yàn)數(shù)量供試品裝量V(ml)每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量供試品最少檢驗(yàn)數(shù)量(瓶或支)≦11＜V＜55≦V＜2020≦V＜5050≦V＜10050≦V＜100100≦V≦500V＞100全量半量2ml5ml10ml半量半量500ml10101010101066醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第33頁。固體制劑最少檢驗(yàn)量及

上市抽檢樣品的最少檢驗(yàn)數(shù)量供試品裝量M每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量供試品最少檢驗(yàn)數(shù)量(瓶或支)M＜

50mg50mg≦M＜300mg300mg≦M＜5gM＞5g外科用敷料棉花及紗布縫合線、一次性醫(yī)用材料帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療用具其他醫(yī)療器具全量半量150mg500mg100mg或1×3cm整個(gè)材料整個(gè)器具(切碎或拆散開)1010101010101010醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第34頁。供試品無菌檢驗(yàn)供試品處理供試品進(jìn)入無菌實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)作表面消毒，用適宜的消毒液對供試品容器表面進(jìn)行徹底消毒。醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第35頁。供試品無菌檢驗(yàn)供試品處理供試液制備水溶液供試品，取規(guī)定量，直接過濾或接種，必要時(shí)須沖洗或加入中和劑／滅活劑

a)可溶于水的固體制劑供試品，按比例溶解稀釋后同水溶液項(xiàng)檢測

b)β-內(nèi)酰胺類抗生素供試品，按水溶液或固體制劑項(xiàng)檢測，以β-內(nèi)酰胺酶清除或中和抗生素

c)具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）供試品，以一定量沖洗液沖洗內(nèi)壁后，按水溶液項(xiàng)檢測醫(yī)療器械無菌檢驗(yàn)全文共42頁，當(dāng)前為第36頁。供試品無菌檢驗(yàn)供試品處理供試液制備非水溶性制劑供試品，稀釋液中加入聚山梨酯80或其他適宜乳化劑，混合后同水溶液項(xiàng)檢測可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品，以十四烷酸異丙酯溶解過濾，仍無法過濾者用100ml稀釋液萃取上述供試液，取水相作供試品檢測無菌氣（噴）霧劑供試品，-20℃冷凍1h，無菌鉆孔，取樣，依樣品性質(zhì)選擇處理方法檢測裝有藥物的注射器供試品，藥液與針頭均需檢測，針頭直接接種敷料供試品，100mg或1cm*3cm腸線、縫合線等供試品，直接接種滅菌