毛細(xì)管電泳法檢測(cè)鮮肉中抗生素殘留

毛細(xì)管區(qū)帶電泳方法檢測(cè)鮮肉中抗菌藥物殘留實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、通過(guò)毛細(xì)管區(qū)帶電泳實(shí)驗(yàn)，初步掌握毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的簡(jiǎn)單操作。2、了解毛細(xì)管電泳分析方法的確立與編輯。實(shí)驗(yàn)原理：高效毛細(xì)管電泳是指離子或帶電粒子以毛細(xì)管為分離室,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的液相分離分析技術(shù)。當(dāng)固體（毛細(xì)管壁）與液體接觸時(shí)，固體表面由于某種原因帶-種電荷，則因靜電引力使其周?chē)后w帶有相反電荷，在液-固界面形成雙電層，二者之間存在電位差。當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)液體兩端被施加電壓時(shí)，就會(huì)發(fā)生液體相對(duì)于毛細(xì)管壁的移動(dòng)，即液體會(huì)以某一固定的速度流動(dòng)，整體移動(dòng)著的液體叫電滲流。由于電滲流的存在，毛細(xì)管電泳過(guò)程中各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：v+=v電滲流+v+ef，陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；v_=v電滲流-匕f，陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反；V=v ，中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致0電滲流在一般情況下（毛細(xì)管表面帶負(fù)電），電滲流的方向是由正極到負(fù)極。由于電滲流可以比陰離子的淌度大一個(gè)數(shù)量級(jí)，它可以將陰離子推向陰極。所以，陰離子，中性離子以及陽(yáng)離子可以向同一方向“遷移”面在一次分析中得到分離。三、 儀器及試劑儀器：AngilentHP3DCE型高效毛細(xì)管電泳儀；未涂層熔硅彈性石英毛細(xì)管柱75pm（i.d）X60cm（有效長(zhǎng)度為56cm）（河北永年光纖廠(chǎng)）；PHS-3C型pH計(jì)；KQ250B型（250W,40KHz）超聲波清洗器；自動(dòng)移液槍?zhuān)晃⒘考訕悠鳌Ｋ芰蠘悠菲咳舾蓚€(gè)，分別用存放標(biāo)準(zhǔn)樣品、緩沖溶液、NaOH、超純水和廢液，做好標(biāo)號(hào)；0.22pm纖維素濾膜。標(biāo)樣：準(zhǔn)確稱(chēng)取環(huán)丙沙星、氧氟沙星、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品，用30mmol/LTris-HCl緩沖液（PH8.3）溶解，配成80〃g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，密封置于4°C冰箱保存。緩沖溶液（buffer）：配置30mmol/LTris-HCl緩沖溶液，用HCl和NaOH調(diào)節(jié)pH為8.3，置4°C冰箱儲(chǔ)存，備用。0.1mol/LNaOH溶液，超純水。四、 實(shí)驗(yàn)步驟開(kāi)機(jī)：在實(shí)驗(yàn)教師的指導(dǎo)下，打開(kāi)儀器和配套的工作站，儀器初始化。2.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作：（1）、灌裝樣品瓶（沖洗液、緩沖液和樣品），（2）、樣品瓶脫氣，（3）、樣品瓶放入樣品盤(pán)方法編輯前處理：依次用1mol/LNaOH溶液沖洗10min，水沖洗5min，緩沖液沖洗5min檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；壓力進(jìn)樣（30mbar）；進(jìn)樣時(shí)間：8s；分離電壓:18kV；溫度：18°C。檢測(cè)開(kāi)始5.完成實(shí)驗(yàn)以后，用0.1mol/LNaOH沖洗毛細(xì)管10min,純水沖洗5min。6.打印報(bào)告，清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)。五、 數(shù)據(jù)處理根據(jù)電泳圖確定樣品的遷移時(shí)間和峰面積。六、 注意事項(xiàng)沖洗毛細(xì)管時(shí)禁止在毛細(xì)管上加電壓；不允許更改講義上給定的工作電壓，也不建議改變進(jìn)樣時(shí)間。NaOH、超純水、樣品和緩沖溶液等之間的切換是自動(dòng)的，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要隨時(shí)注意是否放在樣品盤(pán)正確位置。沖洗毛細(xì)管對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重現(xiàn)性至關(guān)重要，務(wù)必認(rèn)真完成每一次沖洗，不允許縮短沖洗時(shí)間或者不沖洗。做完實(shí)驗(yàn)以后一定要用水沖洗毛細(xì)管，否則可能會(huì)導(dǎo)致毛細(xì)管堵塞，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)