雙脫氧末端終止測序法原理-過程和目標(biāo)基因cDNA序列拼接和分析

雙脫氧末端終止測序法原理過程和目標(biāo)基因cDNA序列拼接和分析41、俯仰終宇宙，不樂復(fù)何如。42、夏日長抱饑，寒夜無被眠。43、不戚戚于貧賤，不汲汲于富貴。44、欲言無予和，揮杯勸孤影。45、盛年不重來，一日難再晨。及時(shí)當(dāng)勉勵，歲月不待人。雙脫氧末端終止測序法原理過程和目標(biāo)基因cDNA序列拼接和分析雙脫氧末端終止測序法原理過程和目標(biāo)基因cDNA序列拼接和分析41、俯仰終宇宙，不樂復(fù)何如。42、夏日長抱饑，寒夜無被眠。43、不戚戚于貧賤，不汲汲于富貴。44、欲言無予和，揮杯勸孤影。45、盛年不重來，一日難再晨。及時(shí)當(dāng)勉勵，歲月不待人。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)雙脫氧末端終止法測序的原理、過程和目標(biāo)基因序列的分析教師:程琳2011年11月實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、通過本實(shí)驗(yàn)了解雙脫氧鏈終止法的基本原理,掌握DNA測序的基本方法;2、學(xué)會序列查詢、核酸及蛋白質(zhì)的同源性搜索和比對。聽說讀寫訓(xùn)練的最高境界是寫作，寫作是一個(gè)人所思所識所見的綜合體現(xiàn)。透過一篇文章，我們或許未必能全觀一個(gè)人的思想智慧，但是它好過“以貌取人”的方面總是顯而易見的。就像塞萬提斯所說：“筆乃心靈之舌?！弊髡叩囊曇啊⒆R見、思維或情操，透過文章總可略見一斑，形成一個(gè)初步定位。這也正是我國封建社會千百年來以一篇文章定終身的考試制度的根源所在?！笆旰盁o人曉，一朝成名天下知”，一篇文章中有十年苦讀的功夫。雖當(dāng)今社會取才之方式更為多元化，已不再是一篇文章定終身，但高中生的作文教學(xué)依然有著不可取代的地位。就功利的角度講，它依然占據(jù)著高考語文的半壁江山；就人文的角度講，更是不可限量。正是因?yàn)閷懽魇蔷C合能力的體現(xiàn)，非一朝一夕之功，而文學(xué)天才又不是人人都可以揮毫潑墨、倚馬可待，只能令我們羨慕有余，心有戚戚焉。英國“悖論王子”切斯特頓說：“文學(xué)只是一種奢侈。”我們農(nóng)村高中的作文教學(xué)現(xiàn)在陷入一種困境：古人云：“讀書破萬卷，下筆如有神?！钡壳稗r(nóng)村高中學(xué)生閱讀量有限，有的甚至幾乎沒有課外閱讀量。態(tài)度上，學(xué)生厭倦寫作；能力上，學(xué)生寫作水平躑躅不前，不見提升。教師似乎也束手無策，只好“顧左右而言他”，作文教學(xué)成了疑難雜癥，陷入山重水復(fù)疑無路之境。其實(shí)，作為一個(gè)痼疾，農(nóng)村高中作文教學(xué)積重并非難返，突破在于“恒”和“變”上，恒定地堅(jiān)持某些理念，適當(dāng)?shù)馗淖円恍┬问?。重視學(xué)生的閱讀是一個(gè)方面。我們不難發(fā)現(xiàn)學(xué)生的閱讀與寫作之間的關(guān)系，學(xué)生的經(jīng)驗(yàn)來自于他的直接經(jīng)驗(yàn)和間接經(jīng)驗(yàn)，除非他的直接經(jīng)驗(yàn)足夠多，感性經(jīng)驗(yàn)極為豐富，理性認(rèn)識極為深刻。我所教的班級中，稍好的作文分為兩類，一類是文采好、語感強(qiáng)、信馬由韁的；一類是格局工整、行文穩(wěn)健，言必談“蘇軾”“李清照”，喜歡寫歷史文化大散文的。調(diào)查得知，前者往往有課外閱讀的愛好，但曾經(jīng)得到的閱讀指導(dǎo)較為薄弱；后者往往沒有自己的課外閱讀設(shè)置，故寫作難能有自己的真情實(shí)感、真知灼見，只能中規(guī)中矩，穩(wěn)妥有余，不見光彩。還有一類學(xué)生，讀了些書，但在寫作文時(shí)，感覺完全用不到，提筆容易落筆難。這類學(xué)生一則由于快餐閱讀，沒有內(nèi)化為自己的東西，一則由于看得太少，沒有上升到一定的知識儲備或形成語感。還有一部分學(xué)生，課外閱讀量幾乎為零，喜歡寫“現(xiàn)代版雷鋒式作文”，題材老套陳舊，甚至連寫作篇幅都難以充實(shí)起來，這類學(xué)生是“零閱讀”。我們在讀書的時(shí)候都對一本或幾本書癡迷過，對于大部分不愛閱讀的學(xué)生應(yīng)注意引導(dǎo)他們觸碰到自己的閱讀興奮點(diǎn)，做科學(xué)的推薦，做好他們的啟蒙老師。對于已經(jīng)愛上閱讀的學(xué)生，大可放手給他們空間，并要推波助瀾，培養(yǎng)他們的定力，引導(dǎo)他們博覽、內(nèi)化，形成廣度閱讀和深度閱讀。錢鐘書先生進(jìn)入清華讀書時(shí)曾立下志愿：要橫掃清華圖書館。他的夫人楊絳先生在《我們仨》中回憶，錢鐘書幾乎所有假期的時(shí)間都用來讀書，以至于在清華4年，連玉泉山、八大處都沒有去過。錢鐘書入清華創(chuàng)造了一次又一次紀(jì)錄：讀書數(shù)量第一，發(fā)表文章第一，口出狂言第一……閱讀對寫作的影響是一個(gè)循序漸進(jìn)、水到渠成的過程，也是一個(gè)毫不刻意的過程。學(xué)生的閱讀速度也是一個(gè)漸進(jìn)的過程，我們會發(fā)現(xiàn)學(xué)生的閱讀量達(dá)到一定程度時(shí)，他的閱讀速度可以達(dá)到一般學(xué)生的幾倍以上。閱讀與寫作之間其實(shí)就是一個(gè)治學(xué)三境界的過程，堅(jiān)持閱讀，“驀然回首，那人卻在燈火闌珊處”的境界自會不期而至。培養(yǎng)學(xué)生熱愛生活的情感，保有一顆熱誠的敏感的心。詩人艾青說過：“為什么我的眼里常含淚水，因?yàn)槲覍@土地愛得深沉。”文人往往是有詩性的，詩性是情操和智慧的結(jié)晶，詩人的語言往往是多經(jīng)錘煉的，詩意和愛，能創(chuàng)造一切激情。偉大的教育家陶行知是一位熱愛生活、充滿生活激情的詩人，陶行知善于用詩的眼光把世界看成詩的世界，以帶有詩意的言行，將他的生命、事業(yè)詩化，陶行知的詩情源于他富有激情的教育生活和對美好教育生活的無限追求。學(xué)生的情感傾向可以有愉悅和傷感之別，但是一定要保有一顆赤誠的詩情的赤子之心。青春年少，往往是張揚(yáng)的，情感豐盈的，敢說敢做，敢愛敢恨的，這種品格是一種天性，也需要保護(hù)、及時(shí)地捕捉及引導(dǎo)。同樣的一個(gè)孩子，在不同的環(huán)境中，他可以是一個(gè)思維保持活躍的人，也可以成為一個(gè)麻木無感的人。麻木無感可以直接摧毀創(chuàng)造力。作文隨筆化，隨筆生活化。學(xué)生的隨筆往往比作文寫得好，一方面因?yàn)殡S筆更多的是有感而發(fā)，寫的往往是肺腑之言，情更真感更實(shí)；還有一方面，便是隨筆的隨意化，學(xué)生卸去了心理重壓，沒有包袱，當(dāng)然能寫得更自如些。隨筆的“隨”，除了隨意，還有隨時(shí)，更易于捕捉剎那靈感。靈感是寫作的最佳狀態(tài)，可以遇之卻不可以求之，因此，教師要給學(xué)生創(chuàng)造輕松的寫作環(huán)境。隨筆是有效構(gòu)建寫作和生活之間銜接的橋梁。要寫好隨筆，就要培養(yǎng)學(xué)生的生活意識。寫作源于生活。學(xué)生對生活的敏感，并非是一種無意識，而一旦形成，便極為珍貴。曾經(jīng)教過一個(gè)女生，成績優(yōu)異，寫作視野廣，且具有極強(qiáng)的思辨能力，她的弟弟也是如此，他們從小便被嚴(yán)母定下一條規(guī)矩，每次從外面回來，一定要談?wù)勛约涸谕饷娴乃娝妓?，多年不曾間斷，久而久之，便形成了一種習(xí)慣和本能，外部世界時(shí)時(shí)在她的視野和思維之中。學(xué)生的隨筆要用心寫。其隨意當(dāng)是較之于嚴(yán)格的定時(shí)定點(diǎn)定內(nèi)容定篇幅的寫作，形式上的自由化，而并非隨便寫寫、草草了事。心不動則筆不動，寫一句也當(dāng)有一句話的匠心。學(xué)生的隨筆要堅(jiān)持寫。動筆是一種習(xí)慣，由最初的三五句，片紙只字也無妨，慢慢來，筆耕不輟，堅(jiān)持下去自當(dāng)文江學(xué)海、斐然成章。隨筆生活化，能夠訓(xùn)練學(xué)生敏銳的捕捉能力和對寫作的敏感能力，作文隨筆化，也是有效地構(gòu)建作文和生活、寫作主體的銜接，是使寫作有意義的手段。這一環(huán)節(jié)的實(shí)施中，王棟生先生的改革使我獲益匪淺，那就是：打破每周一次的作文格局。各位有時(shí)間可以拜讀《王棟生作文教學(xué)筆記》。作文教學(xué)既是攻堅(jiān)之戰(zhàn)，突圍便非彗汜畫涂、易如拾芥。結(jié)合自己的作文教學(xué)實(shí)踐，在堅(jiān)持與變通上，以上幾點(diǎn)體會于己較為深刻：一則閱讀，二則詩情，三則改轍思變。且行且得！相信每位高中英語老師都有這樣的親身體會：自己剛剛接手的高一新生在初中階段英語成績非常好，英語學(xué)習(xí)的興趣也非常濃厚，可是這些學(xué)生在升入高中之后，英語成績卻突然直線下降，更別提那些原本基礎(chǔ)就不好的學(xué)生，應(yīng)付英語的學(xué)習(xí)更是頗為吃力，從而陷入了初、高中英語學(xué)習(xí)銜接困境。通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，就主觀方面來看，學(xué)生在結(jié)束初中階段的學(xué)習(xí)進(jìn)入高中后，在學(xué)習(xí)態(tài)度，學(xué)習(xí)興趣，學(xué)習(xí)動機(jī)上都存在著一些不足之處，從而導(dǎo)致了學(xué)生在高中的英語學(xué)習(xí)上存在著一定的困難；就客觀因素來說，高中教師在高一的英語教學(xué)中，缺乏必要的銜接意識，欠缺做好銜接工作的知識和技能指導(dǎo)，當(dāng)學(xué)生在進(jìn)入高一階段出現(xiàn)銜接困難的時(shí)候沒有采取正確的措施，在客觀上進(jìn)一步導(dǎo)致了學(xué)生的初、高中英語銜接學(xué)習(xí)的困難。本文僅就高中英語教師在高一學(xué)生初、高中英語學(xué)習(xí)銜接困境方面所形成的教學(xué)行為因素和改進(jìn)措施，談?wù)勛约旱目捶?。首先，高一英語教師的高考意識強(qiáng)化了高一學(xué)生對英語學(xué)習(xí)興趣的逆向增長。相信每一個(gè)初中孩子從小學(xué)開始就被培養(yǎng)學(xué)習(xí)英語的熱情，明白學(xué)習(xí)英語的重要性，事實(shí)也如此，小學(xué)、初中的孩子大部分都能將英語學(xué)得頂呱呱，但是隨著學(xué)段的升高，學(xué)生學(xué)習(xí)英語越來越從一種興趣愛好發(fā)展為學(xué)習(xí)任務(wù)，使得他們在學(xué)校學(xué)英語不是為了滿足自己求知的欲望，更多的則是為了完成學(xué)習(xí)任務(wù)，取得更高的分?jǐn)?shù)。等他們進(jìn)入高一，這種功利化的傾向更加嚴(yán)重。而高一英語教師大部分是從高三畢業(yè)班循環(huán)下來的老師，我們從高三的應(yīng)試狀態(tài)突然“硬著陸”到高一的初始狀態(tài)，需要很長一段時(shí)間的心理狀態(tài)調(diào)整，但在這段時(shí)間內(nèi)，受高考指揮棒的“前攝干擾”效應(yīng)，我們對高一學(xué)生的要求是相當(dāng)苛刻的，使得高一英語的教學(xué)起點(diǎn)偏高，搞得學(xué)生“亞歷山大”，使我們失去了對英語原本僅存的一點(diǎn)點(diǎn)熱情。針對這種情況，高一英語教師應(yīng)該盡快從高三的備考狀態(tài)調(diào)整過來，從高一新學(xué)期一開始就要以嶄新的心態(tài)幫助學(xué)生規(guī)劃好他們的英語學(xué)習(xí)生涯。要注意給學(xué)生一定的緩沖時(shí)間或者過渡期，讓學(xué)生能自主的慢慢進(jìn)入角色，熟悉高中英語的教材和教師的教學(xué)方式，結(jié)合學(xué)生的實(shí)際學(xué)習(xí)情況，同時(shí)還要精挑細(xì)選，盡量與現(xiàn)行的教材相輔相成，用好教材，而不是一味以高考為基準(zhǔn)，盲目拔高。其次，高一英語教師對初中英語教材體系的盲目無知，導(dǎo)致英語知識點(diǎn)教學(xué)的遺漏或重復(fù)。再加上高中教師和初中教師之間能相互交流的機(jī)會很少，高中教師基本不了解初中英語的教法和課堂，由于存在著一種懶惰及事不關(guān)己的心理，我們也懶得去了解和鉆研。因此，對于學(xué)生在課堂上顯示出來的銜接困難，大多數(shù)老師都選擇視而不見，認(rèn)為完成自己高中學(xué)段的教學(xué)任務(wù)，搞好自己的教學(xué)就好了。但是這勢必在學(xué)情的掌握和教材的把握方面，使自己陷入了被動局面，進(jìn)一步導(dǎo)致了學(xué)生在初、高中英語學(xué)習(xí)銜接的困難。針對這種情況，高一英語教師要克服高中繁重教學(xué)任務(wù)的不利因素，爭取時(shí)間盡快熟悉初中新課標(biāo)和新教材，對初、高中英語教材體系做一番貫通性的把握和研究，了解初中學(xué)生的英語學(xué)習(xí)水平以及知識掌握的牢固情況，從而找好初高中英語教學(xué)的銜接點(diǎn)，做到有的放矢、胸有成竹，既不會產(chǎn)生教學(xué)時(shí)間上的浪費(fèi)，也不會遺漏知識點(diǎn)的講解。同時(shí)，高中英語教師還應(yīng)該深入初中英語課堂，主動與初中教師進(jìn)行交流、溝通與合作。教育行政部門也應(yīng)該適當(dāng)?shù)匕才鸥咧欣蠋煹匠踔心昙壓统踔杏⒄Z教師互相聽課，評課，積極地提供一個(gè)大家可以互相交流和互相合作的平臺，以便為教師的合理銜接提供科學(xué)的指導(dǎo)。再次，高一英語教師容易忽視高一學(xué)生學(xué)習(xí)心理發(fā)展?fàn)顩r，對于學(xué)生初、高中英語銜接的困境缺乏相應(yīng)的心理干預(yù)措施。高一的學(xué)生，尤其是剛剛步入高中學(xué)校的新生，其學(xué)習(xí)心理狀況仍然處在好動、感性的狀態(tài)，他們渴望依賴興趣去學(xué)習(xí)，他們喜歡在活動中去學(xué)習(xí)，他們不喜歡枯燥乏味的課堂講授和浩瀚無邊的題海戰(zhàn)術(shù)。而我們的高一英語課堂相比較初中英語課堂，要做的改變顯然是非常必要的。我們在改變老舊的教學(xué)觀念，死板的教學(xué)方式，沉悶的教學(xué)氛圍的同時(shí)，針對語言學(xué)習(xí)的特點(diǎn)，尤其是英語學(xué)習(xí)的特點(diǎn)，要適當(dāng)展開一些必要的活動課程。英文歌曲的學(xué)唱，英語影視作品欣賞，英語演講比賽，英語話劇比賽，詩歌朗誦，外語角，英語書法大賽形式多樣的英語課外活動能從很多方面鍛煉學(xué)生的英語能力，實(shí)現(xiàn)在英語課堂上想象不到的效果。另外，要在課堂課下建立平等和諧的師生關(guān)系，遵循學(xué)生的身心發(fā)展規(guī)律，挖掘?qū)W生的潛在能量，關(guān)注學(xué)生獨(dú)特的個(gè)性，尊重學(xué)生、理解學(xué)生，相信學(xué)生，在課堂上大膽的放手讓學(xué)生自主學(xué)習(xí)。加強(qiáng)心理調(diào)適和人文關(guān)愛，讓學(xué)生在高中起始階段，盡量縮短高中英語教學(xué)的高原區(qū)效應(yīng)的適應(yīng)過程?？偠灾鳛橐痪€的高中英語教師，我們要在實(shí)際的英語教學(xué)活動中積極探索，不斷總結(jié)，努力減輕學(xué)生初、高中銜接階段的學(xué)習(xí)不適感，幫助學(xué)生在思想上和學(xué)習(xí)上實(shí)現(xiàn)平穩(wěn)地過渡，在英語的學(xué)習(xí)上取得巨大的進(jìn)步。【分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)雙脫氧末端終止法測序的原理、過程和目標(biāo)基因序列的分析教師:程琳2011年11月實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、通過本實(shí)驗(yàn)了解雙脫氧鏈終止法的基本原理,掌握DNA測序的基本方法;2、學(xué)會序列查詢、核酸及蛋白質(zhì)的同源性搜索和比對。、DNA測序的方法DNA測序技術(shù)主要有兩種方法,都是在20世紀(jì)70年代中期發(fā)明的。A.雙脫氧鏈終止法(thechainterminationmethod),是通過合成與單鏈DNA互補(bǔ)的多核苷酸鏈來讀取待測DNA分子的順序?；瘜W(xué)降解法(chemicaldegradationmethod)是將雙鏈DNA分子用化學(xué)試劑處理,產(chǎn)生切口,用同位素標(biāo)記進(jìn)行測序。dNTPA.C,G或T基本原理誠基√聚丙烯酰胺凝膠電泳可以HO-P-0-P-0-P-0-CH2/O區(qū)分長度只差一個(gè)核苷酸的DNA分子√利用DNA聚合酶不能夠區(qū)分dNTP和ddNTP的特性,ddNTPAC使ddNtP參入到寡核苷酸鏈的3-末端。因?yàn)閐dNTP3不H0-P-0-P-0-P-0-CH2∠0是OH,不能與下一個(gè)核苷酸聚合延伸,從而終止DNA鏈的增長模板TAGCAACT引物ATCGTTGA熒光標(biāo)記」引物延長和合成陽斷雙脫dATPdATPdATPdATP+ddATPdGTP+ddGTP氧ddTTpdCTP+ddCTPdCTP法dTTPTTPdTTP原-ATCGTddTaddsATCGTTddGATCGTTGddA理ATCGddT-ATCddGddAAddT示意長排列圖ATCGTTGddATddGAAA自造接雷AddT2、具體操作:測序時(shí)分成四個(gè)反應(yīng),每個(gè)反應(yīng)除上述成分外分別加入23-雙脫氧的A,C,G,T核苷三磷酸(稱為ddaTp,dCTP,ddgtp,ddTtp),然后進(jìn)行聚合反應(yīng)。在第一個(gè)反應(yīng)中,ddaTP會隨機(jī)地代替dATP參加反應(yīng),一旦dATP加入了新合成的DNA鏈,由于其第3位的OH變成了H,所以不能繼續(xù)延伸,于是第一個(gè)反應(yīng)中所產(chǎn)生的DNA鏈都是到A就終止了同理第二個(gè)反應(yīng)產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的;第三個(gè)反應(yīng)的都以G結(jié)尾,第四個(gè)反應(yīng)的都以T結(jié)尾,電泳后就可以讀出序列了假如有一個(gè)DNA,互補(bǔ)序列是GATCCGAT,我們試著做一下:在第一個(gè)反應(yīng)中由于含有dNTP+ddatP,所以遇到G,T,C三個(gè)堿基時(shí)沒什么問題,但遇到A時(shí),摻入的可能是dATP或