疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

第三章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)內(nèi)容掌握抗原抗體反應(yīng)的原理與特點(diǎn)，了解抗原抗體結(jié)合力和比例。掌握免疫組化（IHC）的原理和方法，熟悉一抗、二抗的選擇與使用。掌握酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）反應(yīng)的原理方法。掌握免疫印痕（Westernblot）的技術(shù)原理與方法。了界放射免疫檢測(cè)技術(shù)（RIA）的原理與方法。目標(biāo)：掌握ELISA、IHC、Westernblot的操作方法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)就是利用抗原和抗體高度特異性結(jié)合的原理和方法，檢測(cè)分析各樣品中的目標(biāo)物質(zhì)，以監(jiān)控物品質(zhì)量、檢測(cè)機(jī)體免疫機(jī)能和診斷某些疾病的體外檢測(cè)方法。免疫檢測(cè)是微量檢測(cè)方法，靈敏、特異。隨著方法和技術(shù)的改進(jìn)，免疫檢測(cè)方法已滲入工、農(nóng)、食品、醫(yī)藥等各個(gè)領(lǐng)域。從20世紀(jì)50年代美國(guó)學(xué)者Berson和Yallow發(fā)明了放射免疫測(cè)定技術(shù)檢測(cè)胰島素起，免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)經(jīng)歷了從定性到定量；從常量分析到微量、超微量分析；從手工檢測(cè)到全自動(dòng)化；從單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)到高通量檢測(cè)等一系列長(zhǎng)足的進(jìn)步。本章主要學(xué)習(xí)血清學(xué)檢測(cè)方法——抗原抗體檢測(cè)方法。年代學(xué)者貢獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal,A.Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet,O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900K.Landsteiner人類ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1935M.Heidelberger,F.Kendall純化抗體,定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)1948O.Ouchterlony,S.Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1953P.Grabar,C.Williams免疫電泳分析,Ig多樣性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫標(biāo)記1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶標(biāo)免疫技術(shù)1975G.Kohler,C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史第一節(jié)免疫學(xué)檢測(cè)的基本原理抗原抗體反應(yīng)指抗原與相應(yīng)抗體間的特異性結(jié)合反應(yīng)。曾叫血清學(xué)反應(yīng)。

抗體結(jié)構(gòu)CCFcFabNNNNCC一、抗原抗體的特異性結(jié)合抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，在體內(nèi)可介導(dǎo)溶細(xì)胞效應(yīng)、溶菌、中和病毒、促吞噬作用，形成一整套機(jī)體體液免疫功能。體外反應(yīng)有凝集作用、沉淀作用、調(diào)節(jié)作用、中和作用等。1、抗原抗體的互補(bǔ)性和親和性抗原抗體的結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）與抗體超變區(qū)分子間的互補(bǔ)性和親和性?；パa(bǔ)性指抗原表位的空間結(jié)構(gòu)與抗體分子超變區(qū)內(nèi)的抗原結(jié)合位點(diǎn)間的空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)嵌合。親和性指抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)與相應(yīng)抗原表位間互相適應(yīng)產(chǎn)生的吸引力?；パa(bǔ)性是Ag和Ab結(jié)合的基礎(chǔ)，親和性是Ag和Ab間固有的作用力。2、抗原抗體結(jié)合力抗原和抗體分子的結(jié)合可以是游離形式的，也可以結(jié)合在細(xì)胞表面。這種結(jié)合也是非共價(jià)鍵結(jié)合?？乖c抗體相互結(jié)合只局限于分子表面的特定部位，即抗原決定簇和抗體結(jié)合位點(diǎn)之間，且以親和力的作用方式結(jié)合在一起。由這些特定部位之間的短程分子力相互作用的結(jié)果。這些吸引力只有在極短的距離內(nèi)才有效。因此抗原決定簇與抗體結(jié)合位點(diǎn)在空間上必須處于緊密接觸狀態(tài)，才能產(chǎn)生足夠的結(jié)合力。這種分子間的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)決定了抗原抗體結(jié)合的專一性?？乖贵w間的作用力有：抗原抗體分子間的作用力，即親和力包括以下幾種：1、鹽鍵（離子鍵）2、范德華力3、疏水作用4、氫鍵3、親水膠轉(zhuǎn)化為疏水膠抗體和大部分抗原在溶液中是親水膠，不會(huì)聚沉。一旦破壞電荷和水化層，如Ag+Ab，減少電荷，由親水膠轉(zhuǎn)化為疏水膠，形成可見的Ag–Ab復(fù)合物沉淀。利用此沉淀反應(yīng)可檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體。二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1、特異性抗原與抗體相互結(jié)合必須有空間構(gòu)型的互補(bǔ)性，因此，有很強(qiáng)的特異性。但，如果兩種抗原存在相同（似）的表位，或抗原、抗體間構(gòu)型有部分或全部相同，就可能出現(xiàn)交叉結(jié)合——凝集或沉淀。既可能干擾實(shí)驗(yàn)，也可以用于擴(kuò)大應(yīng)用范圍。2、比例性抗原（多價(jià)）抗體（2價(jià)或以上）不等價(jià)性，使抗原抗體反應(yīng)時(shí)存在比例關(guān)系，生成物的量與反應(yīng)物的量（濃度）有關(guān)。比例性：抗原抗體結(jié)合生成復(fù)合物的量與反應(yīng)物濃度的關(guān)系。只有2者分子比例合適，結(jié)合價(jià)相互飽和，才生成可見的復(fù)合物。在等價(jià)帶區(qū)的溶液中幾乎不存在游歷的抗原和抗體。滴度（效價(jià)）指抗原或抗體與一定量的對(duì)應(yīng)物產(chǎn)生明顯可見的反應(yīng)所需的最小量?？乖贵w反應(yīng)的等價(jià)帶（zoneofequivalence）：曲線的高峰部分，抗原抗體分子比例合適的范圍。在此范圍內(nèi)，抗原抗體充分結(jié)合，沉淀物形成快而多。最適比（optimalratio）：其中有一管反應(yīng)最快，沉淀物形成最多，上清液中幾乎無(wú)游離抗原或抗體存在，表明抗原與抗體濃度的比例最為合適。帶現(xiàn)象（zonephenomenon）：等價(jià)帶前后分別為抗體或抗原過(guò)剩則無(wú)沉淀物形成。前帶（prezone）：抗體過(guò)量后帶（postzone）：抗原過(guò)剩?？乖贵w比例對(duì)反應(yīng)現(xiàn)象的影響3、可逆性抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)是一個(gè)可逆的反應(yīng)。Ag+AbAg-Ab高親和力抗原表位和抗體超變區(qū)的構(gòu)型非常適合，結(jié)合牢固，不易解離。解離取決于：抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親和力環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響當(dāng)抗體與抗原結(jié)合時(shí)，如果是顆?？乖瑒t出現(xiàn)凝集現(xiàn)象；如果是可溶性抗原，則產(chǎn)生沉淀作用。4、階段性抗原抗體反應(yīng)被人為分為2階段。結(jié)合階段：當(dāng)抗原與同型抗體相遇時(shí)，在合適條件下，不論彼此量的多少，都立即發(fā)生特異性的結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，這一過(guò)程通常只需要幾秒的時(shí)間便可完成，稱為反應(yīng)的一級(jí)階段。反應(yīng)階段：在一級(jí)階段之后，繼發(fā)出現(xiàn)抗原與抗體間進(jìn)一步交聯(lián)而形成網(wǎng)絡(luò)狀凝集物，進(jìn)而出現(xiàn)可見的凝集和沉淀，稱為反應(yīng)的二級(jí)階段。這一階段是抗原抗體網(wǎng)格生長(zhǎng)的階段，速率要慢的多，且在很大程度上依賴于溫度、離子強(qiáng)度等外界條件，但更重要的是需要合適的抗原抗體分子比例。只有當(dāng)二者的結(jié)合價(jià)彼此飽和時(shí)，才能連接成一個(gè)大網(wǎng)格樣凝集物，出現(xiàn)凝集或沉淀。三、影響抗原抗體反應(yīng)的因素抗原抗體自身因素抗原：理化性狀決定簇種類和數(shù)量抗體：來(lái)源：兔等，馬、人單克隆抗體濃度特異性和親和力2環(huán)境因素電解質(zhì)Na+和C1－，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢(shì)下降，促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見的沉淀物或凝集物。酸堿度抗原抗體反應(yīng)一般在pH為6～8進(jìn)行。PH過(guò)高或過(guò)低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)，例如pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時(shí)，即使無(wú)相應(yīng)抗體存在，也會(huì)引起顆粒性抗原非特異性的凝集，造成假陽(yáng)性反應(yīng)。溫度溫度升高可加速分子運(yùn)動(dòng)，抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多，使反應(yīng)加速。但若溫度高于56℃時(shí)，可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；在40℃時(shí)，結(jié)合速度慢，但結(jié)合牢固，更易于觀察。常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃。適當(dāng)振蕩/攪拌可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸，加速反應(yīng)AbAg高親和力AbAg低親和力特異性結(jié)合力的表示方法親和力和親合力低親合力高親合力Ag-Ab反應(yīng)的原理Ab過(guò)剩Ag過(guò)剩比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò)Ag-Ab反應(yīng)的可見性常見血清學(xué)檢測(cè)1.凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)1:2稀釋待測(cè)血清1:41:81:16細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性Ag或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在的情況下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。玻片法試管法常用于菌種鑒定或ABO血型鑒定常用于檢測(cè)抗體的滴度或效價(jià)，見于臨床診斷傷寒或副傷寒所用的肥達(dá)氏反應(yīng)和診斷布氏菌病所用的瑞特試驗(yàn)。間接凝集反應(yīng)將可溶性Ag/Ab先吸附在某些顆粒載體上，形成致敏顆粒，然后再與相應(yīng)Ab/Ag進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生凝集，叫間接凝集反應(yīng)。如將溶血毒素O吸附于乳膠顆粒上的抗“O”試驗(yàn)、人IgG作為Ag吸附于乳膠顆粒上的類風(fēng)濕因子檢測(cè)。凝集反應(yīng)常用于溶血性疾病的診斷：+YYYYYYYYYYYY病人的RBC體內(nèi)anti-Rh由于抗體多屬于IgG，分子量較小，抗體與紅細(xì)胞間的結(jié)合力不能克服細(xì)胞間的排斥力，不出現(xiàn)凝集+YYYYYYYYYYYYYYY體外加入抗人IgG出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，叫直接庫(kù)姆試驗(yàn)正常人O型血的Rh+的RBC+YYYY患者血清內(nèi)的游離anti-Rh+Y體外加入抗人IgGYYYYYYYYYYYYYY出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，叫間接庫(kù)姆試驗(yàn)2.沉淀反應(yīng)AgAgAgAgAbingel單向免疫擴(kuò)散Ag1AbAg2Ag3Ag4雙向免疫擴(kuò)散免疫比濁過(guò)量AbAbAbAb毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，也可在半固體瓊脂凝膠中進(jìn)行。鑒定多種抗原是完全相同、部分相同或完全不同用于確定抗原濃度沉淀反應(yīng)—免疫電泳存在于不同區(qū)域的抗原與抗體結(jié)合，在比例適宜處形成沉淀弧。沉淀弧的數(shù)量、位置和形狀與標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)比，可分析樣品的成分及其性質(zhì)。第二節(jié)免疫組織化學(xué)檢測(cè)技術(shù)抗原＋抗體（特異性）＋酶標(biāo)記抗體，通過(guò)酶與底物作用生成有色反應(yīng)物，定位組織或細(xì)胞內(nèi)抗原的一門技術(shù)。免疫組織化學(xué)：用帶標(biāo)記物的抗體或抗原在組織細(xì)胞原位通過(guò)抗原抗體反應(yīng)或組織化學(xué)反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗或抗體進(jìn)行定性、定量、定位測(cè)定的技術(shù)。免疫組化分類免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為：免疫熒光法免疫酶法免疫鐵蛋白法免疫金法放射免疫自顯影法

按標(biāo)記抗體的方式分：標(biāo)記抗體IHCT法非標(biāo)記抗體IHCT法非標(biāo)記抗體IHCT法的二抗不被標(biāo)記，用以免疫動(dòng)物制備抗酶抗體，以酶-抗體再與二抗結(jié)合。按染色步驟分：直接法（一步法）間接法（2步法或多步法）一、檢測(cè)原理通過(guò)免疫學(xué)中抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，用特異性抗體(單克隆或多克隆)或抗原檢測(cè)組織、細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原或抗體物質(zhì)，形成抗原-抗體復(fù)合物；利用此復(fù)合物上帶有預(yù)先標(biāo)記的標(biāo)記物，通過(guò)與標(biāo)記物相對(duì)應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)，如酶底物顯色反應(yīng)可使之呈現(xiàn)某種顏色，從而可檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)的抗原，以達(dá)到診斷、鑒別診斷和研究的目的。可作為抗原的物質(zhì)有酶、受體、抗體、細(xì)胞外基質(zhì)激素、細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白、病原體。二、免疫標(biāo)記物顯色原理免疫酶測(cè)定法免疫熒光技術(shù)放射免疫測(cè)定法免疫膠體金技術(shù)①免疫酶測(cè)定法夾心法ELISA間接ELISABAS—ELISA利用生物素和抗生物素蛋白為橋梁微粒捕獲酶免疫分析技術(shù)將已知特異性抗體致敏的免疫微粒與生物素、親和素、酶相結(jié)合，最后酶作用于熒光底物發(fā)光，通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷未知抗原的含量。a）b）免疫組化技術(shù)定位、定性、定量檢測(cè)②免疫熒光技術(shù)海馬細(xì)胞微管蛋白綠色(胞體、樹突)軸突終末蛋白紅色(突觸)

培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞微管呈綠色核呈藍(lán)色③放射免疫測(cè)定用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。將同位素的敏感性與抗原抗體結(jié)合的特異性結(jié)合起來(lái)，具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于激素、藥物等微量物質(zhì)的檢測(cè)。常用的有131I、125I。④化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。最常用的發(fā)光物質(zhì)是魯米諾。靈敏度高、簡(jiǎn)便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析。⑤免疫膠體金技術(shù)用膠體金顆粒標(biāo)記Ab/Ag，以檢測(cè)未知Ag/Ab的方法。氯金酸在還原劑作用下，可聚合成特定大小的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，因靜電作用而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。該技術(shù)可應(yīng)用于免疫組化(光鏡下檢查)和免疫層析快速診斷。⑥免疫印跡法-Westernblotting三、標(biāo)記抗體的特點(diǎn)與應(yīng)用原理1、一級(jí)抗體（第一抗體）屬識(shí)別系統(tǒng)，特異性識(shí)別來(lái)自樣本的靶抗原。常用單抗或多抗，實(shí)驗(yàn)前-20℃—-40℃保存（1-2年有效），應(yīng)用液4℃約一周。一抗的使用濃度在不同實(shí)驗(yàn)中是不一樣的，最佳用量需經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定，一般選頂準(zhǔn)陽(yáng)性的稀釋度。2、二級(jí)抗體（第二抗體）連接放大和酶標(biāo)顯色指示系統(tǒng)的抗體。屬橋連抗體，一手連一抗，一手連標(biāo)志物（酶），根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。如要在實(shí)驗(yàn)中同時(shí)確定一抗、二抗的濃度，最簡(jiǎn)單的是方陣（棋盤）滴定法。3、非標(biāo)志抗體IHCT和放大檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用原理1）酶-抗酶法（PAP）利用酶聯(lián)抗體將酶與組織切片中抗原相結(jié)合，通過(guò)與適當(dāng)?shù)孜锓磻?yīng)（通常是H2O2）以及二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidineDAB)的顯色劑，產(chǎn)生一種不溶性棕色反應(yīng)產(chǎn)物。該法已被進(jìn)一步改進(jìn)發(fā)展為更敏感的多級(jí)橋聯(lián)法，后者利于增加在抗原部位反應(yīng)產(chǎn)物的沉積。PAP法是酶-酶抗體(PAP)復(fù)合物（常用辣根過(guò)氧化物酶）組成的可溶性復(fù)合物為五環(huán)狀結(jié)構(gòu)，3個(gè)分子辣根過(guò)氧化物酶和二個(gè)抗體分子組成，極為穩(wěn)定，比免疫熒光法敏感100-1000倍，比酶橋法敏感20倍，其原理是特異性初級(jí)抗體（一抗）的Fab段與組織抗原結(jié)合，二抗（橋抗）在一抗與PAP復(fù)合物之間形成分子橋聯(lián)（此時(shí)一抗與PAP中的免疫球蛋必須是同一種屬，以使得衍生自其它種屬的二抗，對(duì)一抗分子PAP中的FC段及穩(wěn)定成份都具有特異性），洗滌后用H2O2和DAB顯色，陽(yáng)性為褐紅色，陰性無(wú)色。2）標(biāo)記的親和素-生物素法（LSAB）生物素是一種低分子量的維生素，可以與抗體（二抗）共價(jià)結(jié)合。親合素是一種從卵白素中提取的具有4個(gè)生物素結(jié)合位點(diǎn)的糖蛋白，借生物素與親和素的結(jié)合，將抗體與酶相連，這一特性能使之成為多級(jí)免疫酶學(xué)系統(tǒng)各成分之間的橋接物。1981年Hsu等人建立了抗體-生物素-親和素-過(guò)氧化物酶(AvidiNBiotiN-peroxidaseComplexABC)系統(tǒng)。該方法是通過(guò)生物素相關(guān)的次級(jí)抗體將一抗連接到親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物上。比PAP法敏感8-40倍，特異性強(qiáng)、非特異性背景著色低、方法簡(jiǎn)便、應(yīng)用廣。

ABC系統(tǒng)通過(guò)將鏈球菌抗生物素蛋白代替親和素蛋白而得到進(jìn)一步改進(jìn)，稱為鏈球菌抗生物素蛋白-生物素系統(tǒng)(StreptavidiNbiotiNsystemSAB)。鏈球菌抗生物素蛋白在生理PH環(huán)境中為電中性，而不產(chǎn)生非特異性結(jié)合，而抗生物素蛋白在生理PH環(huán)境中帶正電荷。應(yīng)用抗生物素蛋白-生物素法時(shí)，內(nèi)源性生物素能與抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶復(fù)合物直接結(jié)合而產(chǎn)生非特異性或稱假陽(yáng)性染色，避免的方法可先通過(guò)切片與游離抗生物素蛋白反應(yīng)以去除游離生物素。

葡萄球菌A蛋白(StaphylococcalproteiNASPA)是金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上的一種蛋白成分，

單鏈多肽，分子量為42000，SPA最大的特點(diǎn)是能與不同種屬血清中免疫球蛋白分子穩(wěn)定FC段結(jié)合，此外還能與其它物質(zhì)如熒光素、過(guò)氧化物酶、鐵蛋白、膠體金等結(jié)合，并不影響其生物活性，因此被用來(lái)發(fā)展為一種簡(jiǎn)便而迅速的免疫過(guò)氧化物酶法，即用SPA代替PAP技術(shù)中的次級(jí)抗體，因SPA可與多種動(dòng)物的抗血清反應(yīng)，而不需因不同種動(dòng)物而制備相應(yīng)的第二抗體。SPA可以結(jié)合大多數(shù)IgG分子，可以充當(dāng)?shù)谝豢贵w和衍生自不同種屬的抗過(guò)氧化物酶抗體的橋接物即SPA-過(guò)氧化物酶聯(lián)法。同時(shí)由于SPA與FC段的高親和力可以減少非特異性背景染色。

3）多聚螯合物法將抗體和HRP共同連接在葡聚糖聚合物上，形成抗體—多聚化合物—酶。靈敏度高，每個(gè)聚合物有超過(guò)20個(gè)點(diǎn)與一抗結(jié)合。4、現(xiàn)色系統(tǒng)主要有DAB，AEC（3-氨基-9-乙基卡巴唑(AEC)）均以HRP為供氫體。固紅，固藍(lán)，氯藍(lán)四唑（NBT），以堿性磷酸酶為現(xiàn)色劑。四、基本操作過(guò)程全過(guò)程為：抗原制備與純化；抗體制備；標(biāo)記抗體制備；標(biāo)本采集與制備；免疫組化反應(yīng)與現(xiàn)色；結(jié)果觀察與分析。1、標(biāo)本采集與制備石蠟切片細(xì)胞爬片冰凍切片細(xì)胞涂片組織印片石蠟切片過(guò)程：取材—固定—沖洗—脫水—透明—浸蠟—包埋—切片—貼片—烤片—脫蠟—復(fù)水—染色—脫水—透明—封藏等步驟。組織標(biāo)本組織標(biāo)本

冰凍切片操作方法及技術(shù)要點(diǎn)：

①取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費(fèi)時(shí)，大者難以切完整，最好為24×24×2mm。②取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺(tái)上，冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個(gè)小臺(tái)后，再放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。③將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機(jī)持承器上，啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕，將組織修平。④調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細(xì)胞密集的薄切，纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切，一般在5～10um間。要注意的是：①組織快大小合適②選擇合適的冷凍度未固定過(guò)的組織-10—-15℃，脾、腎、肌肉等-15—-20℃，含脂肪組織-25—-30℃。③及時(shí)清除殘余的包埋劑，防止撕裂組織。④組織塊無(wú)須固定⑤用于附貼切片的載玻片室溫存放，無(wú)須冷凍。⑥切片不能馬上染色的可晾干低溫冷藏，或置組織培養(yǎng)液內(nèi)。0-4℃保存。2、免疫化學(xué)染色酶法染色免疫熒光染色標(biāo)本處理—熒光試劑—封片觀察一般為冰凍切片，石蠟切片效果差。免疫膠體金染色免疫金銀染色免疫雙重/多重標(biāo)記染色同一切片的同一組織上同時(shí)顯示2種/以上的抗原成分，也稱免疫組化雙染法。要求2種抗原分布于細(xì)胞不同部位。針對(duì)抗原使用不同顏色的熒光素、酶或不同直徑的顆粒。五、免疫組化的影響因素與對(duì)策1、非特異性著色由內(nèi)源性酶和生物素干擾滅活酶，用親和素飽和生物素。電荷吸附BSA或二抗動(dòng)物血清封閉非特異位點(diǎn)?？贵w原因抗體不純或標(biāo)本含與靶抗原類似的表位。用單抗。洗滌不充分加去污劑等洗。DAB不溶性顆粒未除掉而沉積在組織上。制片不當(dāng)壞死、變性、炎癥組織、切片拱起、皺縮、邊沿缺損等。二抗動(dòng)物血清封閉或重切。2、組化染色的假陰性標(biāo)本保存不當(dāng)老舊標(biāo)本、固定不當(dāng)或固定時(shí)間太長(zhǎng)、溫度過(guò)高等，改善條件，重做?？贵w等試劑質(zhì)量差滴度、純度、特異性或保存不當(dāng)，更換新試劑再做。操作失誤嚴(yán)格按操作規(guī)程作。3、雜音免疫組化中的非正常的背景著色。常見于抗體濃度過(guò)高、切片粘貼不牢，邊沿松動(dòng)等

第三節(jié)免疫印跡技術(shù)1979年RenartandTowbin將Southernblotting技術(shù)應(yīng)用與蛋白質(zhì)研究，并與酶免疫技術(shù)結(jié)合建立的蛋白檢測(cè)技術(shù)。靈敏度高，1-5ng。簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)。目前，廣泛用于蛋白質(zhì)相互作用研究和抗原性研究。一、原理：蛋白質(zhì)組分經(jīng)SDS分離后，平行轉(zhuǎn)移到固相支持體（NC膜或PVDF膜）上，通過(guò)免疫試劑來(lái)檢測(cè)靶蛋白。浸泡式電轉(zhuǎn)移的條件溫和，對(duì)蛋白樣本損失較小，缺點(diǎn)是耗時(shí)長(zhǎng)，需大量緩沖液；半干式電轉(zhuǎn)移時(shí)間短，但有可能損傷樣品。今天采取浸泡式電轉(zhuǎn)移。靶蛋白的檢測(cè)通常采用兩步法或間接法，用一抗結(jié)合靶蛋白，再用過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗，然后HRP催化化學(xué)顯色反應(yīng)或化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。當(dāng)前多采取化學(xué)顯色反應(yīng)。免疫學(xué)檢測(cè)

封閉加一抗洗膜

加二抗洗膜加底物試驗(yàn)記錄

搖育過(guò)夜

搖育2h（3次，每次10min）搖育1h二、操作過(guò)程1.SDS電泳2.電轉(zhuǎn)移：將冷卻管接上水龍頭，接上電源，根據(jù)凝膠面積調(diào)節(jié)電流（0.65mA/cm2），時(shí)間2小時(shí)。3.電轉(zhuǎn)移結(jié)束后，打開夾板，剪下NC膜左右上角做標(biāo)記（即標(biāo)記有蛋白結(jié)合面）。然后把NC膜分為兩份，其中一份放入氨基黑染色液中染色30～60秒，10％乙酸漂洗，觀察膜上有無(wú)蛋白條帶。如果有，可用另一份繼續(xù)以下的實(shí)驗(yàn)。4.封閉：（將NC膜上無(wú)蛋白結(jié)合處封閉，防止探針的非特異性結(jié)合）在一培養(yǎng)皿內(nèi)倒入封閉液（5％脫脂奶粉），將未染色的NC膜放入浸泡，室溫放置1小時(shí)。5.探針結(jié)合：封閉結(jié)束后，用PBS漂洗一次。倒干PBS后，加入HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG稀釋液，37oC孵育1小時(shí)。

6.孵育完成后，PBS漂洗三次（每次浸泡3分鐘），將未結(jié)合探針盡可能洗掉。倒干PBS后，加入底物工作液，避光顯色10分鐘，觀察顏色變化。三、影響因素與對(duì)策1、影響SDS的因素2、影響蛋白轉(zhuǎn)移的因素轉(zhuǎn)移膜的活化與大小、緩沖液、是否平整、有無(wú)氣泡、電壓、溫度、轉(zhuǎn)移時(shí)間等。3、封閉封閉試劑濃度不能過(guò)高過(guò)低。4、顯色設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照，DAB顯色后立即照相，否則易腿色。酶免疫技術(shù)按目的分類（一）酶免疫組織化學(xué)測(cè)定技術(shù)（二）酶免疫測(cè)定技術(shù)Ab*＋Ag→Ab*Ag＋Ab*Ab＋Ag*→AbAg*＋Ag*（1）Homogenous（均相測(cè)定）（2）Heterogenous（異相測(cè)定）——Solidphase

——liquidphase

第四節(jié)酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)一、ELISA的基本原理ELISA(Enzyme-Linkedimmunosorbentassay)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。這一方法的基本原理如下。（1）使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；（2）使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性．又保留酶的活性。二、基本操作流程測(cè)定抗原常用雙抗體夾心法，測(cè)定抗體用間接法?；具^(guò)程為：固相包被（吸附已知成分、洗滌、封閉、洗滌）加待測(cè)樣品促反應(yīng)洗滌加酶結(jié)合物促反應(yīng)洗滌加酶底物促反應(yīng)終止反應(yīng)測(cè)定（比色、熒光）ELISA的類型：ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。用于這些目的的檢測(cè)方法主要有以下幾種類型。1雙抗體(原)夾心法2間接法3競(jìng)爭(zhēng)法4雙位點(diǎn)一步法5捕獲法測(cè)IgM抗體6應(yīng)用親和素和生物素的ELISAELISA的類型ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物。可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。1、夾心法過(guò)程：包被加待測(cè)樣品洗滌加酶標(biāo)記物洗滌加底物測(cè)定1）雙抗體夾心法測(cè)抗原此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原（二價(jià)及以上），例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。2）雙抗原夾心法測(cè)抗體

用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBsAg的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。2、間接法測(cè)抗體

1）間接測(cè)抗體法傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。2）間接測(cè)抗原法3、雙位點(diǎn)一步法測(cè)定抗原由雙抗體夾心改進(jìn)而來(lái)，將雙抗體夾心中針對(duì)同一抗原決定簇的2種抗體改為針對(duì)抗原不同決定簇的2種單抗。敏感性和特異性大為提高。但抗原過(guò)量，Ag分別與固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合，抑制夾心復(fù)合物形成，出現(xiàn)所謂鉤狀效應(yīng)，甚至假陰性結(jié)果。過(guò)程：Ab1包被加待測(cè)樣品和酶標(biāo)Ab2洗滌底物也可用雙抗原夾心測(cè)抗體4、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體

過(guò)程：將待測(cè)抗體（原）同時(shí)加入包被孔，洗滌除去酶標(biāo)記物，加底物測(cè)定。用于測(cè)定只有一個(gè)決定簇的小分子抗原或半抗原，當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。

競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)

抗原5、捕獲包被法測(cè)抗體或IgM抗體捕捉ELISAIgM的檢測(cè)常用于傳染病的診斷。用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對(duì)抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM），再加抗原和酶標(biāo)2抗。此法常用于病毒性感染的早期診斷。6、橋聯(lián)法或稱抗酶抗體法或不標(biāo)記抗體酶法。常見的是HRP抗HRP法，AP抗AP法。首先用酶（如HRP）和抗原免疫同一種動(dòng)物分別制備針對(duì)抗原和酶的抗體（Ab1和Ab3）；以制備Ab1和Ab3動(dòng)物的IgG免疫另一種動(dòng)物，制備Ab2；Ab2與Ab1和Ab3反應(yīng)產(chǎn)生Ab1Ab2Ab3復(fù)合物，其中Ab2起橋梁作用；待測(cè)標(biāo)本含有與Ab1相應(yīng)的抗原，反應(yīng)可生成AgAb1Ab2Ab3酶復(fù)合物，加底物即可檢測(cè)。過(guò)程：已知抗體包被加待測(cè)樣品，洗滌加Ab1，洗滌加Ab2，洗滌加酶-酶抗體底物此外，目前比較流行的生物素、親和素、SPA蛋白橋聯(lián)法用的比較多。

ABS-ELISA法

①：固相支持物；②：樣品；③：特異性IgG；④：生物素化抗小鼠IgG（Biotin）；⑤：辣根過(guò)氧化物酶HRP-酶標(biāo)鏈親和素（Avidin）；⑥：DAB顯色液；⑦：顯色；7、其它酶聯(lián)免疫測(cè)定法1）斑點(diǎn)免疫結(jié)合實(shí)驗(yàn)以硝酸纖維薄膜或尼龍膜做載體，操作與用聚苯乙烯相似。2）酶聯(lián)免疫測(cè)定的放大系統(tǒng)①生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）利用一個(gè)親和素結(jié)合4個(gè)生物素的特點(diǎn)，放大反應(yīng)效果。②酶聯(lián)免疫熒光測(cè)定（ELFIA）酶促反應(yīng)生產(chǎn)熒光物質(zhì)。靈敏度提高16-39倍，達(dá)10-15Mol/L。③AKP放大系統(tǒng)多種酶偶連和氧化還原反應(yīng)反復(fù)循環(huán)進(jìn)行。3）均相EIA測(cè)定小分子抗原或半抗原，特別是藥物檢測(cè)。測(cè)定模式是競(jìng)爭(zhēng)抑制法。分為酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)和克隆酶供體免疫測(cè)定2種。三、1、標(biāo)本收集和保存收集時(shí)間和體位影響如做激素和藥物測(cè)定外源性干擾溶血、凝固不全、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)內(nèi)源性干擾補(bǔ)體、交叉反應(yīng)物質(zhì)2、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)物品、試劑、平衡溫度3、加血清樣本和及反應(yīng)試劑標(biāo)本稀釋、加樣順序和速度、加樣時(shí)間差4、酶促反應(yīng)混勻、溫度、反應(yīng)時(shí)間、pH5、洗板加去污劑，手工或機(jī)械洗。6、顯色HRP的底物OPD或四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。37℃反應(yīng)30min。7、比色選擇正確的濾光片和波長(zhǎng)、OPD492nm，TMB450nm。有的儀器使用雙波長(zhǎng)掃描，注意波長(zhǎng)選擇。8、結(jié)果判斷定性用陰、陽(yáng)性，定量則給出數(shù)據(jù)。第三節(jié)分析文體特征和表現(xiàn)手法2大考點(diǎn)書法大家啟功自傳賞析中學(xué)生，副教授。博不精，專不透。名雖揚(yáng)，實(shí)不夠。高不成，低不就。癱偏‘左’，派曾‘右’。面微圓，皮欠厚。妻已亡，并無(wú)后。喪猶新，病照舊。六十六，非不壽。八寶山，漸相湊。計(jì)平生，謚曰陋。身與名，一起臭。【賞析】寓幽默于“三字經(jīng)”，名利淡薄，人生灑脫，真乃大師心態(tài)。1.實(shí)用類文本都有其鮮明的文體特征，傳記的文體特征體現(xiàn)為作品的真實(shí)性和生動(dòng)性。傳記的表現(xiàn)手法主要有以下幾個(gè)方面：人物表現(xiàn)的手法、結(jié)構(gòu)技巧、語(yǔ)言藝術(shù)和修辭手法。2.在實(shí)際考查中，對(duì)傳記中段落作用、細(xì)節(jié)描寫、人物陪襯以及環(huán)境描寫設(shè)題較多，對(duì)于材料的選擇與組織也常有涉及。3.考生復(fù)習(xí)時(shí)要善于借鑒小說(shuō)和散文的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，同時(shí)抓住傳記的主旨、構(gòu)思以及語(yǔ)言特征來(lái)解答問(wèn)題。傳記的文體特點(diǎn)是真實(shí)性和文學(xué)性。其中，真實(shí)性是傳記的第一特征，寫作時(shí)不允許任意虛構(gòu)。但傳記不同于一般的枯燥的歷史記錄，它具有文學(xué)性，它通過(guò)作者的選擇、剪輯、組接，傾注了愛憎的情感；它需要用藝術(shù)的手法加以表現(xiàn)，以達(dá)到傳神的目的?？键c(diǎn)一分析文體特征從哪些方面分析傳記的文體特征？一、選材方面1.人物的時(shí)代性和代表性。傳記里的人物都是某時(shí)代某領(lǐng)域較

突出的人物。2.選材的真實(shí)性和典型性。傳記的材料比較翔實(shí)，作者從傳主

的繁雜經(jīng)歷中選取典型的事例，來(lái)表現(xiàn)傳主的人格特點(diǎn)，有

較強(qiáng)的說(shuō)服力。3.傳記的材料可以是重大事件，也可以是日常生活小事。[知能構(gòu)建]二、組材方面1.從時(shí)序角度思考。通過(guò)抓時(shí)間詞語(yǔ)，可以迅速理清文章脈絡(luò)，

把握人物的生活經(jīng)歷及思想演變過(guò)程。2.從詳略方面思考。組材是與主題密切相關(guān)的。對(duì)中心有用的，

與主題特別密切的材料，是主要內(nèi)容，則需濃墨重彩地渲染，

要詳細(xì)寫；與主題關(guān)系不很密切的材料，是次要內(nèi)容，則輕

描淡寫，甚至一筆帶過(guò)。三、句段作用和標(biāo)題效果類別作用或效果開頭段內(nèi)容：開篇點(diǎn)題，渲染氣氛，奠定基調(diào)，表明情感。結(jié)構(gòu)：總領(lǐng)下文，統(tǒng)攝全篇；與下文某處文字呼應(yīng)，為下文做鋪墊或埋下伏筆；與結(jié)尾呼應(yīng)。中間段內(nèi)容：如果比較短，它的作用一般是總結(jié)上文，照應(yīng)下文；如果比較長(zhǎng)，它的作用一般是擴(kuò)展思路，豐富內(nèi)涵，具體展示，深化主題。結(jié)構(gòu)：過(guò)渡，承上啟下，為下文埋下伏筆、鋪墊蓄勢(shì)。結(jié)尾段內(nèi)容：點(diǎn)明中心，深化主題，畫龍點(diǎn)睛，升華感情、卒章顯志，啟發(fā)思考。結(jié)構(gòu)：照應(yīng)開頭；呼應(yīng)前文；使結(jié)構(gòu)首尾圓合。標(biāo)題①突出了敘述評(píng)議的對(duì)象。②設(shè)置懸念，激發(fā)讀者的閱讀興趣。③表現(xiàn)了傳主的精神或品質(zhì)。④點(diǎn)明了主旨，表達(dá)了作者的情感。⑤運(yùn)用修辭，使文章內(nèi)涵豐富，意蘊(yùn)深刻，增加了文章的厚度與深度。四、語(yǔ)言特色角度分析鑒賞傳記的類別自傳采用第一人稱，語(yǔ)言或幽默調(diào)侃或自然親切；他傳采用第三人稱，語(yǔ)言或樸實(shí)自然或文采斐然。語(yǔ)意和句式句子中的關(guān)鍵詞所包含的情感、態(tài)度等，整句與散句、推測(cè)與肯定、議論與抒情、祈使與反問(wèn)等特殊句式，往往有著不同一般的表現(xiàn)力。這些都是分析語(yǔ)言的切入點(diǎn)。修辭的角度修辭一般是用來(lái)加強(qiáng)語(yǔ)言的表現(xiàn)力的。抓住修辭特點(diǎn)，就能從語(yǔ)言的表達(dá)效果上加以體味。語(yǔ)言風(fēng)格含蓄與明快、文雅與通俗、生動(dòng)與樸實(shí)、富麗與素淡、簡(jiǎn)潔與繁復(fù)等。1.(2015·新課標(biāo)全國(guó)卷Ⅰ)閱讀下面的文字，完成后面的題目。[即學(xué)即練]朱東潤(rùn)自傳1896年我出生在江蘇泰興一個(gè)失業(yè)店員的家庭，早年生活艱苦，所受的教育也存在著一定的波折。21歲我到梧州擔(dān)任廣西第二中學(xué)的外語(yǔ)教師，23歲調(diào)任南通師范學(xué)校教師。1929年4月間，我到武漢大學(xué)擔(dān)任外語(yǔ)講師，從此我就成為大學(xué)教師。那時(shí)武漢大學(xué)的文學(xué)院長(zhǎng)是聞一多教授，他看到中文系的教師實(shí)在太復(fù)雜，總想來(lái)一些變動(dòng)。用近年的說(shuō)法，這叫作摻沙子。我的命運(yùn)是作為沙子而到中文系開課的。大約是1939年吧，一所內(nèi)遷的大學(xué)的中文系在學(xué)年開始，出現(xiàn)了傳記研究這一個(gè)課，其下注明本年開韓柳文。傳記文學(xué)也好，韓柳文學(xué)也不妨，但是怎么會(huì)在傳記研究這個(gè)總題下面開韓柳文呢？在當(dāng)時(shí)的大學(xué)里，出現(xiàn)的怪事不少，可是這一項(xiàng)多少和我的興趣有關(guān)，這就決定了我對(duì)于傳記文學(xué)獻(xiàn)身的意圖。《四庫(kù)全書總目》有傳記類，指出《晏子春秋》為傳之祖，《孔子三朝記》為記之祖，這是三百年前的看法，現(xiàn)在用不上了。有人說(shuō)《史記》《漢書》為傳記之祖，這個(gè)也用不上。《史》《漢》有互見法，對(duì)于一個(gè)人的評(píng)價(jià)，常常需要通讀全書多卷，才能得其大略。可是在傳記文學(xué)里，一個(gè)傳主只有一本書，必須在這本書里把對(duì)他的評(píng)價(jià)全部交代。是不是古人所作的傳、行狀、神道碑這一類的作品對(duì)于近代傳記文學(xué)的寫作有什么幫助呢？也不盡然。古代文人的這類作品，主要是對(duì)于死者的歌頌，對(duì)于近代傳記文學(xué)是沒有什么用處的。這些作品，畢竟不是傳記文學(xué)。除了史家和文人的作品以外，是不是還有值得提出的呢？有的，這便是所謂別傳。別傳的名稱，可能不是作者的自稱而是后人認(rèn)為有別于正史，因此稱為“別傳”。有些簡(jiǎn)單一些，也可稱為傳敘。這類作品寫得都很生動(dòng)，沒有那些阿諛?lè)畛兄o，而且是信筆直書，對(duì)于傳主的錯(cuò)誤和缺陷，都是全部奉陳。是不是可以從國(guó)外吸收傳記文學(xué)的寫作方法呢？當(dāng)然可以，而且有此必要。但是不能沒有一個(gè)抉擇。羅馬時(shí)代的勃路塔克是最好的了，但是他的時(shí)代和我們相去太遠(yuǎn)，而且他的那部大作，所著重的是相互比較而很少對(duì)于傳主的刻畫，因此我們只能看到一個(gè)大略而看不到入情入理的細(xì)致的分析。英國(guó)的《約翰遜博士傳》是傳記文學(xué)中的不朽名作，英國(guó)人把它推重到極高的地位。這部書的細(xì)致是到了一個(gè)登峰造極的地位，但是的確也難免有些瑣碎。而且由于約翰遜并不處于當(dāng)時(shí)的政治中心，其人也并不能代表英國(guó)的一般人物，所以這部作品不是我們必須模仿的范本。是不是我國(guó)已經(jīng)翻譯過(guò)來(lái)的《維多利亞女王傳》可以作為范本呢？應(yīng)當(dāng)說(shuō)是可以，由于作者著墨無(wú)多，處處顯得“頰上三毫”的風(fēng)神。可是中國(guó)文人相傳的做法，正是走的一樣的道路，所以無(wú)論近代人怎么推崇這部作品，總還不免令人有“穿新鞋走老路”的戒心。國(guó)內(nèi)外的作品讀過(guò)一些，也讀過(guò)法國(guó)評(píng)論家莫洛亞的傳記文學(xué)理論，是不是對(duì)于傳記文學(xué)就算有些認(rèn)識(shí)呢？不算，在自己沒有動(dòng)手創(chuàng)作之前，就不能算是認(rèn)識(shí)。這時(shí)是1940年左右，中國(guó)正在艱苦抗戰(zhàn)，我只身獨(dú)處，住在四川樂(lè)山的郊區(qū)，每周得進(jìn)城到學(xué)校上課，生活也很艱苦。家鄉(xiāng)已經(jīng)陷落了，妻室兒女，一家八口，正在死亡線上掙扎。我決心把研讀的各種傳記作為范本，自己也寫出一本來(lái)。我寫誰(shuí)呢？我考慮了好久，最后決定寫明代的張居正。第一，因?yàn)樗馨岩粋€(gè)充滿內(nèi)憂外患的國(guó)家拯救出來(lái)，為垂亡的明王朝延長(zhǎng)了七十年的壽命。第二，因?yàn)樗活檪€(gè)人的安危和世人的唾罵，終于完成歷史賦予他的使命。他不是沒有缺點(diǎn)的，但是無(wú)論他有多大的缺點(diǎn)，他是唯一能夠拯救那個(gè)時(shí)代的人物。(有刪改)【相關(guān)鏈接】①自傳和傳人，本是性質(zhì)類似的著述，除了因?yàn)樽髡吡?chǎng)的不同，因而有必要的區(qū)別以外，原來(lái)沒有很大的差異。但是在西洋文學(xué)里，常會(huì)發(fā)生分類的麻煩。我們則傳敘二字連用指明同類的文學(xué)。同時(shí)因?yàn)楣糯挠梅?，傳人曰傳，自敘曰敘，這種分別的觀念，是一種原有的觀念，所以傳敘文學(xué)，包括敘、傳在內(nèi)，絲毫不感覺牽強(qiáng)。(朱東潤(rùn)《關(guān)于傳敘文學(xué)的幾個(gè)名詞》)②朱先生確是有儒家風(fēng)度的學(xué)者，一身正氣，因此他所選擇的傳主對(duì)象，差不多都是關(guān)心國(guó)計(jì)民生的有為之士。他強(qiáng)調(diào)關(guān)切現(xiàn)實(shí)，拯救危亡，尊崇氣節(jié)與品格。這都是可以理解的。(傅璇琮《理性的思索和情感的傾注——讀朱東潤(rùn)先生史傳文學(xué)隨想》)★作為帶有學(xué)術(shù)性質(zhì)的自傳，本文有什么特點(diǎn)？請(qǐng)簡(jiǎn)要回答。答：________________________________________________解析本題考查分析文本的文體基本特征和語(yǔ)言特色。解答時(shí)，要在閱讀的基礎(chǔ)上，了解文章的文體特征、內(nèi)容的側(cè)重點(diǎn)、內(nèi)容表達(dá)的特征。本文作為一篇帶有學(xué)術(shù)性質(zhì)的自傳，突出特點(diǎn)之一就是偏重學(xué)術(shù)經(jīng)歷，介紹了自己的傳記文學(xué)觀及其形成過(guò)程。文章的開頭與結(jié)尾，將自己的生平與學(xué)術(shù)結(jié)合起來(lái)，尤其是為張居正寫傳原因的解說(shuō)，結(jié)合當(dāng)時(shí)的社會(huì)背景和自己家庭的情況，更是呈現(xiàn)出學(xué)術(shù)背后的家國(guó)情懷。在行文方面，語(yǔ)言平易自然，穿插“怎么會(huì)在傳記研究這個(gè)總題下面開韓柳文呢？”“我寫誰(shuí)呢？”等口語(yǔ)，語(yǔ)言平白如話，就像面對(duì)面閑談一樣。答案①偏重學(xué)術(shù)經(jīng)歷，主要寫自己的傳記文學(xué)觀及其形成過(guò)程；②寫生平與寫學(xué)術(shù)二者交融，呈現(xiàn)學(xué)術(shù)背后的家國(guó)情懷；③行文平易自然，穿插使用口語(yǔ)，就像和老朋友閑談一樣。1.一般和具體結(jié)合我們?cè)趯?duì)文本的一般性特征進(jìn)行分析的同時(shí)，也應(yīng)該注意到富有個(gè)性的“具體”的特征。[思維建模]分析文體特征2要領(lǐng)2.注意效果解讀

分析文體特征時(shí)，不能僅僅停留在辨別認(rèn)知的層面上，而必須懂得去對(duì)它們做“效果”分析。對(duì)“效果”的分析不外乎從這樣的兩個(gè)方面去考慮：一是從表達(dá)者的表達(dá)這個(gè)方面去考慮，看他采用這樣的方式會(huì)給他的表達(dá)帶來(lái)怎樣的好處；二是從閱讀者這個(gè)方面考慮，看他這樣做可以對(duì)讀者的閱讀產(chǎn)生什么樣的積極的效果。分析傳記的文體特征?咀嚼經(jīng)典高考題目提升審題答題技能高考曾經(jīng)這樣考品答案，悟技巧，不丟分1.(2014·遼寧卷)本文第一自然段有何作用？請(qǐng)簡(jiǎn)要分析。(6分)(《侯仁之：城市的知音》)①交代侯仁之選擇歷史專業(yè)的原因；②寫出了侯仁之對(duì)國(guó)家民族命運(yùn)的關(guān)注，使傳主形象更加豐滿；③體現(xiàn)了傳記的真實(shí)性；④為下文介紹侯仁之的學(xué)術(shù)研究及成就做鋪墊。(答出1點(diǎn)給1分，2點(diǎn)給3分，3點(diǎn)給5分，4點(diǎn)給6分)2.(2013·福建卷)文章已有“《夢(mèng)里京華》”一例，為何還要例舉“委曲求全”？請(qǐng)簡(jiǎn)要分析。(4分)(《那一種遙遠(yuǎn)的幽默》)①增強(qiáng)說(shuō)服力，進(jìn)一步突出王文顯劇作別有一番幽默，肯定他喜劇創(chuàng)作的能力和影響。②引出下文對(duì)王文顯任代理校長(zhǎng)時(shí)行事風(fēng)格的敘寫，形成對(duì)比，以突出王文顯治校的持重務(wù)實(shí)，一絲不茍。(每點(diǎn)2分，意思對(duì)即可。)3.(2012·新課標(biāo)全國(guó)卷)12(1)選項(xiàng)E：本文擷取謝希德人生的若干片斷，描寫她熱愛祖國(guó)、獻(xiàn)身科學(xué)、關(guān)愛親人的事跡，表現(xiàn)了一位杰出女性的偉大人格。(√)(《謝希德的誠(chéng)與真》)本選項(xiàng)考查對(duì)文體特征的理解，涉及文章的選材、文本的主要內(nèi)容與主題等內(nèi)容。(正確選項(xiàng)，3分)因傳記是記載人物生平或事跡的一類記敘文體，它的表達(dá)技巧比較接近于小說(shuō)和散文，可以說(shuō)文學(xué)類文本的表現(xiàn)手法都與傳記相通。由于傳記的文體特征，需要格外注意其他人物對(duì)傳主的映襯、細(xì)節(jié)描寫、引用和議論等方面?？键c(diǎn)二分析表現(xiàn)手法3題型(一)敘述1.順敘的作用(效果)：思路清晰，結(jié)構(gòu)條理。2.倒敘的作用(效果)[知能構(gòu)建](1)能增強(qiáng)文章的生動(dòng)性，使文章產(chǎn)生懸念，更能引人入勝。(2)強(qiáng)調(diào)作用，這一段主要寫了……放到開頭強(qiáng)調(diào)了傳主的……(與傳主精神、品質(zhì)等的關(guān)系)。(3)表達(dá)了作者對(duì)傳主怎樣的情感(與作者情感的關(guān)系)。(4)深化了主旨(與主旨的關(guān)系)。(5)使文章結(jié)構(gòu)富于變化，避免了敘述的平淡和結(jié)構(gòu)的單調(diào)。3.插敘的作用(效果)(1)內(nèi)容上：①(如果是引述他人的話，或是傳主自己的話、書信等)突出了傳記的真實(shí)性，使文章內(nèi)容更充實(shí)。②深化了文章主題。③使人物形象更加鮮明。④(如果是引述他人的話等就屬于側(cè)面描寫)側(cè)面烘托了傳主的……⑤(如果插敘的語(yǔ)段拿傳主和其他人對(duì)比)通過(guò)對(duì)比，襯托出了傳主的……(2)結(jié)構(gòu)上：①避免了結(jié)構(gòu)的平鋪直敘，使行文起伏多變，使結(jié)構(gòu)更加緊湊集中。②對(duì)……做了必要的鋪墊照應(yīng)，補(bǔ)充說(shuō)明。(二)描寫(主要是細(xì)節(jié)描寫)1.描寫的三種作用(1)讓傳主形象更全面完整，更立體化。傳主形象是由多個(gè)側(cè)面組成的，只表現(xiàn)其偉大的一面，而不展現(xiàn)其普通的一面，人物就不能立體化。

(2)讓人物真實(shí)可信。要把人物寫好，就要寫其普通的一面，因?yàn)樽x者是普通的公民，他愿意接受偉人身上普通的一面。這樣的人物會(huì)讓讀者覺得真實(shí)親切，易于接受。(3)符合讀者心理需要。對(duì)于大人物諸如政治家、藝術(shù)家、影視明星等，讀者已經(jīng)從媒體中了解了一些他們?cè)诒拘袠I(yè)內(nèi)的成就、事跡。對(duì)于傳記作品，讀者更渴望了解一些花絮。因此，一些細(xì)節(jié)正能解決這一問(wèn)題。2.兩種答題方式(1)如果是寫人物的細(xì)節(jié)，可以這樣：①思維趨向：寫人物的細(xì)節(jié)＝細(xì)節(jié)內(nèi)容＋獨(dú)特形象＋表現(xiàn)主題＋讀者心理。②答題方式：通過(guò)描寫……細(xì)節(jié)，……刻畫出一個(gè)……形象，突出……(主題思想)，給讀者……感受。(2)如果是場(chǎng)面細(xì)節(jié)，可以這樣：①思維趨向：場(chǎng)面細(xì)節(jié)＝細(xì)節(jié)內(nèi)容＋讀者感受＋表現(xiàn)主題。②答題方式：通過(guò)對(duì)……的描寫，傳神地寫出在場(chǎng)人……的心情，烘托了……的現(xiàn)場(chǎng)氣氛，使讀者仿佛置身于現(xiàn)場(chǎng)之中，產(chǎn)生身臨其境之感。真實(shí)性和感染力都很強(qiáng)。真實(shí)地反映了……表達(dá)了……的情感傾向。(三)議論的作用1.內(nèi)容上：對(duì)主題表達(dá)起畫龍點(diǎn)睛的作用。評(píng)論性文字既是對(duì)

事實(shí)的闡釋，也是作者自我態(tài)度的呈現(xiàn)。2.結(jié)構(gòu)上：①用在開頭，起統(tǒng)領(lǐng)全文、點(diǎn)明中心、引出下文的

作用，并能使文章的主題思想得到鮮明的表達(dá)；②用在文章

的結(jié)尾，一般是為了加深對(duì)所寫人物的認(rèn)識(shí)，深化文章的主

題思想，凸顯所寫人物的品格意義，起畫龍點(diǎn)睛的作用；③用在文章的中間，起承上啟下的作用，使事與事之間緊密

地連接起來(lái)，使文章結(jié)構(gòu)顯得嚴(yán)謹(jǐn)。1.從側(cè)面表現(xiàn)傳主通過(guò)寫與傳主相關(guān)的人、事、物，從側(cè)面表現(xiàn)傳主的道德性格、特點(diǎn)、品性等。可以使傳記具有更為真實(shí)感人的力量，可以塑造豐滿的傳主形象，突出傳主的精神面貌，起到增強(qiáng)作品歷史深度和情感力度的作用，增強(qiáng)文章的真實(shí)性和可讀性。2.內(nèi)容和情節(jié)的需要不交代其他相關(guān)的人、事、物，內(nèi)容情節(jié)就不完整，就無(wú)法更好地表現(xiàn)傳主。只有把傳主放到一定的環(huán)境中，他的行為、性格才顯現(xiàn)其合理性。這樣寫可以更好地體現(xiàn)作者的寫作意圖，豐富文章內(nèi)容，增強(qiáng)文章內(nèi)涵，增強(qiáng)文章文化底蘊(yùn)等。3.由點(diǎn)及面，深化主題作者要揭示某種社會(huì)道理或者一個(gè)大的群體，比如整個(gè)民族的某種品質(zhì)，光憑傳主一個(gè)人無(wú)法全面地展現(xiàn)，就必須拓展，傳主再加上其他的人、事、物，點(diǎn)面結(jié)合，就可以更全面、更深刻地表現(xiàn)主題。4.增強(qiáng)表達(dá)效果增強(qiáng)文章的文學(xué)色彩；讓人產(chǎn)生豐富的想象，發(fā)人深省，耐人尋味；等等。直接引用大量原始材料，可以更好地突出人物的特點(diǎn)，揭示人物的精神面貌，對(duì)人物作出客觀公正的評(píng)價(jià)。在傳記中，引用主要包括以下幾個(gè)方面：引用內(nèi)容引用效果直接引用可以增加作品真實(shí)性，更好地突出人物的特點(diǎn)，揭示人物的精神面貌，對(duì)人物做出客觀公正的評(píng)價(jià)。引用詩(shī)詞可以從側(cè)面烘托和豐富傳主的思想精神，使傳記顯現(xiàn)出一種古樸文雅的風(fēng)格。引用故事可以增強(qiáng)文章的趣味性，使文章更具有可讀性。引用傳主在書信、日記中的表白以及傳主的話可以印證作者的觀點(diǎn)，也可以使傳記具有更為真實(shí)感人的力量。引用他人的話使文章對(duì)人物的評(píng)述更加全面客觀、真實(shí)可信，也能從側(cè)面烘托傳主的形象。閱讀下面的文字，完成后面的題目。[即學(xué)即練]朱啟鈐：“被抹掉的奠基人”林天宏①2006年6月13日下午，一場(chǎng)大雨過(guò)后，正陽(yáng)門箭樓被帶著水霧的腳手架包裹得嚴(yán)嚴(yán)實(shí)實(shí)。北京舊城中軸線上的這座標(biāo)志性建筑，正經(jīng)歷著新中國(guó)成立后規(guī)模最大的一次修繕。②由正陽(yáng)門箭樓北望，長(zhǎng)安街車水馬龍，它與城樓左右兩側(cè)的南北長(zhǎng)街、南北池街，一同構(gòu)成了北京舊城東西、南北走向的交通要道。③我問(wèn)同行的一個(gè)記者：“你知道改造北京舊城，使其具有現(xiàn)代城市雛形的第一人是誰(shuí)？”“梁思成？”她答道。④這個(gè)答案是錯(cuò)誤的，卻并不讓人意外。隨著北京舊城改造不斷進(jìn)入媒體視野，梁思成等一批建筑學(xué)家已被大眾熟知。但少有人知曉的是，從1915年起，北京已開始有計(jì)劃地進(jìn)行市政工程建設(shè)，正陽(yáng)門箭樓、東西長(zhǎng)安街、南北長(zhǎng)街與南北池街，都是在時(shí)任內(nèi)務(wù)部總長(zhǎng)朱啟鈐的主持之下改造與打通的。⑤同樣少有人知曉的是，1925年，25歲的美國(guó)賓夕法尼亞大學(xué)留學(xué)生梁思成，收到父親梁?jiǎn)⒊瑥膰?guó)內(nèi)寄來(lái)北宋匠人李誡撰寫的《營(yíng)造法式》一書，興趣大增，由此走上中國(guó)古代建筑研究之路。1930年，梁思成加入中國(guó)營(yíng)造學(xué)社，在那里撰寫了《中國(guó)建筑史》，成為建筑學(xué)一代宗師。而《營(yíng)造法式》一書的發(fā)現(xiàn)者與中國(guó)營(yíng)造學(xué)社的創(chuàng)始人，正是朱啟鈐。⑥“朱啟鈐是中國(guó)古建筑研究工作的開拓者與奠基人，沒有他，就不可能在上個(gè)世紀(jì)30年代出現(xiàn)像梁思成這樣的建筑學(xué)領(lǐng)軍人物，我們讀到《中國(guó)建筑史》的年份，還不知要推遲多少年?！敝袊?guó)文物研究所某研究人員曾這樣評(píng)價(jià)。但是，“由于歷史原因，他被研究者們有意無(wú)意地抹掉了”。⑦朱啟鈐于1930年創(chuàng)辦的中國(guó)營(yíng)造學(xué)社，將他的籌劃與組織才能發(fā)揮得“淋漓盡致”。他為學(xué)社請(qǐng)來(lái)當(dāng)時(shí)最為優(yōu)秀的學(xué)術(shù)精英：東北大學(xué)建筑系主任梁思成，中央大學(xué)建筑系教授劉敦楨，著名建筑師楊廷寶、趙深，史學(xué)家陳垣，地質(zhì)學(xué)家李四光，考古學(xué)家李濟(jì)……他還以其社會(huì)人脈，動(dòng)員許多財(cái)界和政界人士加入學(xué)社，直接從經(jīng)費(fèi)上支持營(yíng)造學(xué)社的研究工作。曾有建筑史家這樣評(píng)價(jià)朱啟鈐：“人力、物力、財(cái)力，這些都是研究工作所必不可少的條件，能把這方方面面的人事統(tǒng)籌起來(lái)，是需要非凡之才能的。朱啟鈐以一己之力，做了今天需要整個(gè)研究所行政部門做的事。”⑧有數(shù)據(jù)顯示，截至1937年，營(yíng)造學(xué)社野外實(shí)地測(cè)繪重要古建筑達(dá)206組，因此探索出一整套研究中國(guó)古建筑的科學(xué)方法，為撰寫中國(guó)建筑史構(gòu)建了扎實(shí)的科學(xué)體系。⑨假若沒有朱啟鈐，中國(guó)的古建筑研究，又會(huì)是怎樣的圖景？如今，斯人已逝，營(yíng)造學(xué)社停辦也已整整60周年。⑩6月13日的那場(chǎng)大雨，將故宮端門外西朝房沖洗得干干凈凈。游人如織，屋宇間卻依舊透著落寞，此處正是營(yíng)造學(xué)社舊址。而位于東城區(qū)趙堂子胡同3號(hào)的朱啟鈐故居，住著數(shù)十戶人家，雜亂之中，依稀可辨當(dāng)年氣魄。(摘自2006年6月21日《中國(guó)青年報(bào)》，有刪改)【注】朱啟鈐(1872—1962)，曾任全國(guó)政協(xié)委員、中央文史館館員。★2.文章多處提到梁思成，這對(duì)寫朱啟鈐有什么作用？請(qǐng)選一例作簡(jiǎn)要分析。答：______________________________________________解析結(jié)合文章第③⑤⑥段進(jìn)行分析，寫梁思成主要是從側(cè)面表現(xiàn)朱啟鈐，讓讀者對(duì)傳主有一個(gè)全面的、立體的了解。答案文章通過(guò)對(duì)梁思成有關(guān)事跡的敘述，或直接或間接地寫出了朱啟鈐對(duì)我國(guó)古建筑研究的重要貢獻(xiàn)。所選事例及分析：第③段，文章寫記者認(rèn)為改造北京舊城第一人是梁思成，間接說(shuō)明朱啟鈐不為人所熟知，點(diǎn)明題意，引出下文。第⑤段，梁思成因《營(yíng)造法式》一書而走上中國(guó)古代建筑研究之路，加入中國(guó)營(yíng)造學(xué)社，在中國(guó)建筑學(xué)界有很高的地位；而《營(yíng)造法式》一書的發(fā)現(xiàn)者與中國(guó)營(yíng)造學(xué)社的創(chuàng)始人就是朱啟鈐，這間接反映出朱啟鈐鮮為人知的貢獻(xiàn)，照應(yīng)題目。第⑥段，點(diǎn)明如果沒有朱啟鈐，就不可能在上個(gè)世紀(jì)30年代出現(xiàn)像梁思成這樣的建筑學(xué)領(lǐng)軍人物，直接突出朱啟鈐的貢獻(xiàn)。★3.作者為什么兩次提到6月13日那場(chǎng)大雨？請(qǐng)談?wù)勀愕目捶?。答：________________________________________________解析文章兩次提到大雨分別在第①段和最后一段。應(yīng)注意從內(nèi)容、結(jié)構(gòu)和表現(xiàn)人物主題等角度進(jìn)行分析。開篇寫雨是為了引出人物，結(jié)尾寫雨是為了營(yíng)造落寞氛圍，首尾照應(yīng)，使文章渾然一體，有力地表現(xiàn)了傳主。答案①文章開頭寫雨中正陽(yáng)門箭樓的修繕，引出朱啟鈐1915年就開始有計(jì)劃地進(jìn)行北京市政工程建設(shè)(或：現(xiàn)代北京舊城仍保留了朱啟鈐當(dāng)年規(guī)劃的格局)。②結(jié)尾的雨引出營(yíng)造學(xué)社舊址的落寞和朱啟鈐故居成為大雜院的情況，照應(yīng)文題，引發(fā)讀者的聯(lián)想和感慨。③首尾呼應(yīng)，結(jié)構(gòu)完整。開頭寫正陽(yáng)門箭樓的修繕，結(jié)尾寫營(yíng)造學(xué)社的舊址故宮端門外西朝房的落寞、朱啟鈐故居的雜亂，兩者通過(guò)“雨”聯(lián)系在一起，撫今追昔，深化了“不要忘記這位奠基人”的主題。[思維建模]分析傳記表現(xiàn)手法及作用4角度1.傳主角度：使人物形象更豐滿，突出傳主的精神面貌，增強(qiáng)作品的歷史深度和情感力度。2.文本角度：豐富文章內(nèi)容，增強(qiáng)文章的真實(shí)性、可讀性、典雅性、文化底蘊(yùn)。3.結(jié)構(gòu)角度：照應(yīng)標(biāo)題，設(shè)置懸念，埋下伏筆，對(duì)比映襯，總結(jié)上文，深化主旨，彰顯品格。4.讀者角度：有助于讀者全面深刻地了解傳主的精神和影響，提升傳記的閱讀價(jià)值。答題模板：特點(diǎn)＋作用①＋作用②＋作用③分析傳記的表現(xiàn)手法?咀嚼經(jīng)典高考題目提升審題答題技能高考曾經(jīng)這樣考品答案，悟技巧，不丟分1.(2013·福建卷)13題D項(xiàng)：文章最后一段描寫了王文顯舊居周邊的環(huán)境與情景，營(yíng)造了肅殺悲涼的氛圍，表達(dá)了作者對(duì)王文顯的深切懷念與沉痛哀悼。(×)(《那一種遙遠(yuǎn)的幽默》)本選項(xiàng)考查傳記中的描寫手法及其作用。文中的描寫意在表現(xiàn)王文顯當(dāng)年的住處如今已發(fā)生巨大變化，并非“肅殺悲涼”，表達(dá)的情感是“深切懷念”而非“沉痛哀悼”。(錯(cuò)誤選項(xiàng)，2分)2.(2011·廣東卷)請(qǐng)分別指出文中③④段畫線部分所用的修辭手法，并具體說(shuō)明這些修辭手法在文中的表達(dá)效果。(1)他走路比汽車或者比飛機(jī)還快。(2分)(2)對(duì)于他，辯論簡(jiǎn)直是練武術(shù)，手、腿、頭、眼、身一齊參加。(2分)(《梁宗岱先生》)(1)夸張手法。(1分)突出了梁宗岱善于跑路，有強(qiáng)健的體格。(1分)(2)比喻。(1分)形象生動(dòng)地寫出了梁宗岱擅長(zhǎng)且喜歡辯論，辯論的技巧出眾，辯論時(shí)激情洋溢的性格特點(diǎn)。(1分)3.(2011·湖北卷)本文細(xì)節(jié)描寫十分精彩，請(qǐng)舉兩例加以評(píng)析。(6分)(《才子趙樹理》)①他在一篇稿子的頁(yè)邊批了一行字：“排版，校對(duì)同志請(qǐng)注意，文內(nèi)所有‘你’字，一律不準(zhǔn)改為‘妳’，否則要負(fù)法律責(zé)任?！壁w樹理在一個(gè)尋常字眼的使用上，不盲從，并鄭重其事地在文稿中批字強(qiáng)調(diào)，凸顯趙樹理較真、堅(jiān)持己見的性格。②老趙劃拳與眾不同，兩只手出拳，左右開弓，一會(huì)兒用左手，一會(huì)兒用右手。趙樹理不循常規(guī)，以出其不意的方式劃拳，別具一格，意趣橫生。這個(gè)細(xì)節(jié)描寫體現(xiàn)趙樹理幽默風(fēng)趣的真性情，以及他和老舍之間的深厚感情。(每點(diǎn)3分)一、品悟經(jīng)典課文：《貝多芬：握住命運(yùn)的咽喉》以本為本，知能遷移——從教材中尋求解題突破[經(jīng)典聚焦]手法運(yùn)用作用及效果精雕細(xì)刻肖像烘托傳主個(gè)性，為寫命運(yùn)做鋪墊。大量的內(nèi)心獨(dú)白細(xì)膩地展示傳主內(nèi)心情感，直接體現(xiàn)人物精神，使文章具有真實(shí)感。引用傳主書信直接展示傳主精神，增強(qiáng)感染力。他人的話從側(cè)面突出傳主性格，使作者的評(píng)述更加客觀全面、真實(shí)可信。對(duì)比以傳主一生的種種不幸突出其性格的堅(jiān)忍執(zhí)著。以與歌德交往相處不和諧突出傳主倔強(qiáng)的個(gè)性。敘述中插入議論抒情表明作者的觀點(diǎn)態(tài)度，深化作品的主題，使作品更加真實(shí)深刻、更具表現(xiàn)力。細(xì)節(jié)描寫：陌生的手替他闔上眼睛暗示不認(rèn)識(shí)他的人也無(wú)比崇敬，表現(xiàn)貝多芬的偉大。二、重溫經(jīng)典手法1.本文是一篇由傳主本人口述的自傳，文章的語(yǔ)言有什么特點(diǎn)？請(qǐng)舉例說(shuō)明。《毛澤東：憶往昔，崢嶸歲月稠》答：_______________________________________________【提示】本文語(yǔ)言樸實(shí)，用詞巧妙，富有特色。作為黨的領(lǐng)袖和政治家，毛澤東在敘述經(jīng)歷的過(guò)程中，把革命斗爭(zhēng)中一些常用的政治術(shù)語(yǔ)融入家庭瑣事的描述當(dāng)中，使文章語(yǔ)言形象、生動(dòng)而幽默。如：①“我的不滿增加起來(lái)了，辯證的斗爭(zhēng)在我們的家庭中不斷地發(fā)展著。”反映了毛澤東的叛逆精神，而且體現(xiàn)了他反抗意識(shí)的不斷提高。②“在這個(gè)情形之下，雙方互相提出要求，以期停止‘內(nèi)戰(zhàn)’……”“內(nèi)戰(zhàn)”通常指國(guó)內(nèi)各軍閥之間的戰(zhàn)爭(zhēng)。這件事體現(xiàn)了毛澤東在反抗父親時(shí)已經(jīng)開始采取一定的策略，與父親交換條件，來(lái)達(dá)到自己的目的，從而獲取勝利。這種策略性的反抗也反映在毛澤東后來(lái)的革命斗爭(zhēng)中。2.本文第一人稱的敘述方式有什么好處？《毛澤東：憶往昔，崢嶸歲月稠》答：______________________________________________【提示】事件更真實(shí)可信；自傳貼近人物心靈，字里行間流露著自然、親切與真實(shí)，傳主在回憶中敘述飽含情感，易打動(dòng)人，拉近了讀者與文章的距離；語(yǔ)言個(gè)性色彩更濃厚，所敘事情多含自謙意味。3.本文的細(xì)節(jié)描寫很多，試找出兩三例與傳主逃學(xué)有關(guān)的細(xì)節(jié)描寫，并說(shuō)說(shuō)它們的作用。《沈從文：逆境也是生活的恩賜》答：______________________________________________【提示】(1)逃學(xué)的細(xì)節(jié)：①關(guān)于小孩子打架的細(xì)節(jié)；②關(guān)于爬山、翻筋斗的細(xì)節(jié)；③關(guān)于劃船的細(xì)節(jié)；④關(guān)于下河洗澡的細(xì)節(jié)；⑤關(guān)于趕場(chǎng)集的細(xì)節(jié)。(2)這些細(xì)節(jié)描寫，把傳主逃學(xué)中所經(jīng)歷的人和事生動(dòng)形象地展示出來(lái)，使讀者在“飽覽”了如此豐富多彩而又新鮮的生活的同時(shí)，可以深刻地領(lǐng)略大自然和社會(huì)生活對(duì)作者的人生觀所產(chǎn)生的巨大影響，體會(huì)到“大書”的博大精深、奧妙無(wú)窮。4.作者為什么從楊振寧獲諾貝爾獎(jiǎng)及其在頒獎(jiǎng)儀式上的演講寫起？《楊振寧：合璧中西科學(xué)文化的驕子》答：______________________________________________【提示】①一上來(lái)就抓住讀者要急于了解楊振寧何以會(huì)獲此大獎(jiǎng)的心理；②通過(guò)演講的內(nèi)容透出楊振寧的自豪，點(diǎn)出了楊振寧獲獎(jiǎng)的原因；③緊緊扣住題目“楊振寧：合璧中西科學(xué)文化的驕子”。閱讀下面的文字，完成1～2題。[訓(xùn)練提升]不朽的貝多芬羅曼·羅蘭①在大風(fēng)雨中，大風(fēng)雪中，一聲響雷中，1827年3月26日，貝多芬咽了最后一口氣，一只陌生的手替他闔上了眼睛。②貝多芬！多少人頌贊他藝術(shù)上的偉大。但，貝多芬遠(yuǎn)不只是音樂(lè)家中的第一人。他是近代藝術(shù)的最英勇的力。對(duì)于一般受苦而奮斗的人，他是最大、最好的朋友。當(dāng)我們對(duì)世界的劫難感到憂傷時(shí)，他會(huì)到我們身旁來(lái)，好似坐在一個(gè)穿著喪服的母親旁邊，一言不發(fā)，在琴上唱著他隱忍的悲歌，安慰那哭泣的人。當(dāng)我們斗爭(zhēng)到疲憊的辰光，到這意志與信仰的海洋中浸潤(rùn)一下，將獲得無(wú)可言喻的裨益。③貝多芬分贈(zèng)我們的是一股勇氣、一種奮斗的歡樂(lè)。他在《致不朽的愛》一信中有言：“當(dāng)我有所克服的時(shí)候，我總是快樂(lè)的。”《致韋格勒》一信中又說(shuō)：“我愿把生命活上千百次……我非生來(lái)過(guò)恬靜的日子的?！彼€分贈(zèng)我們一種感到與神同在的醉意。他仿佛在和大自然不息的溝通之下，竟感染了自然的深邃的力。申德勒說(shuō)：“貝多芬教了我大自然的學(xué)問(wèn)，在這方面的研究，他給我的指導(dǎo)和在音樂(lè)方面沒有分別。使他陶醉的并非自然的律令，而是自然的基本威力?！备窭餇柊筒邔?duì)貝多芬欽佩之中含有懼意，在提及他時(shí)說(shuō)：“他所到達(dá)的那種境界，藝術(shù)竟和獷野與古怪的元素混合為一?！笔媛岬健兜谖褰豁懬窌r(shí)也說(shuō)：“盡管你時(shí)常聽到它，它對(duì)你始終有一股不變的威力，有如自然界的現(xiàn)象，雖然時(shí)時(shí)發(fā)生，總教人充滿著恐懼與驚異?！必惗喾业拿苡焉甑吕召潎@：“他抓住了大自然的精神。”——這是不錯(cuò)的：貝多芬是自然界的一股力；一種原始的力和大自然其余的部分接戰(zhàn)之下，便產(chǎn)生了荷馬史詩(shī)般的壯觀。④貝多芬的一生宛如一天雷雨的日子?！仁且粋€(gè)明凈如水的早晨，僅僅有幾陣懶懶的微風(fēng)，但在靜止的空氣中，已經(jīng)有隱隱的威脅、沉重的預(yù)感。然后，突然之間巨大的陰影卷過(guò)，悲壯的雷吼，充滿著聲響的、可怖的靜默，一陣復(fù)一陣的狂風(fēng)，有如《英雄交響樂(lè)》與《第五交響樂(lè)》。然而白日的清純之氣尚未受到損害。歡樂(lè)依然是歡樂(lè)，悲哀永遠(yuǎn)保存著一縷希望。但自1810年后，心靈的均衡喪失了。目光變得異樣。最清楚的思想，也看來(lái)似水氣一般在升華：忽而四散，忽而凝聚，它們的又凄涼又古怪的騷動(dòng)，罩住了心；往往樂(lè)思在薄霧之中浮沉了一兩次以后，完全消失了，淹沒了，直到曲終才在一陣狂飆中重新出現(xiàn)，即是快樂(lè)本身也蒙上苦澀與獷野的性質(zhì)。所有的情操里都混合著一種熱病、一種毒素。貝多芬1810年5月2日致韋格勒書中有言：“噢，人生多美，但我是永遠(yuǎn)受著毒害……”黃昏來(lái)臨，雷雨也隨著醞釀。爾后是沉重的云，飽蓄著閃電，把黑夜染成烏黑，夾帶著大風(fēng)雨，那是《第九交響樂(lè)》的開始?！蝗?，當(dāng)風(fēng)狂雨驟之際，黑暗裂了縫，夜在天空被趕走，由于意志之力，白日的清明重又還給了我們。⑤什么勝利可和這場(chǎng)勝利相比，波拿巴的哪一場(chǎng)戰(zhàn)爭(zhēng)，奧斯特利茨(系拿破侖1805年12月大獲勝利之地)哪一天的陽(yáng)光？曾經(jīng)達(dá)到這種超人的努力的光榮？曾經(jīng)獲得這種心靈從未獲得的凱旋？一個(gè)不幸的人，貧窮，殘廢，孤獨(dú)，由痛苦造成的人，世界不給他歡樂(lè)，他用他的苦難來(lái)鑄成歡樂(lè)，好似他的那句豪語(yǔ)所說(shuō)的——那是可以總結(jié)他一生、可以成為一切英勇心靈的箴言——“用痛苦換來(lái)歡樂(lè)”。(選自《貝多芬傳》，傅雷譯，譯林出版社2000年版)1.文章開篇寫了貝多芬去世時(shí)天氣的惡劣和“陌生的手替他闔上了眼睛”這一細(xì)節(jié)，有何作用？請(qǐng)分別說(shuō)明。答：_______________________________________________答案①描寫貝多芬去世時(shí)天氣惡劣，象征貝多芬一生遭受的苦難(或：渲染沉痛悲傷的氛圍)。②暗示貝多芬不認(rèn)識(shí)的人也對(duì)他無(wú)比崇敬，表現(xiàn)貝多芬的偉大。2.這篇評(píng)傳中，作者多處引用貝多芬書信中的原話和他人的評(píng)語(yǔ)，簡(jiǎn)要分析這樣引用的作用。答：______________________________________________答案①引用傳主的原話，直接展示傳主的精神，增強(qiáng)了感染力，也為作者的評(píng)述提供了依據(jù)。②引用他人的話，使文章對(duì)人物的評(píng)述更加全面、客觀、真實(shí)可信，也能從側(cè)面塑造傳主的性格。③二者與作者的評(píng)述相結(jié)合，有助于讀者全面而深刻地了解傳主的精神和影響(提升了傳記的閱讀價(jià)值)。BYFAITHIMEANAVISIONOFGOODONECHERISHESANDTHEENTHUSIASMTHATPUSHESONETOSEEKITSFULFILLMENTREGARDLESSOFOBSTACLES.BYFAITHIBYFAITH謝謝觀看/歡迎下載腎上腺素受體激動(dòng)藥(adrenoceptoragonists)*又稱為:擬腎上腺素藥(adrenomimeticdrugs)擬交感胺類藥物(sympathomimeticamines)一、構(gòu)效關(guān)系*腎上腺素受體激動(dòng)藥的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)為-苯乙胺，-苯乙胺由三部分組成：苯環(huán)、碳鏈、氨基。2023/7/241.兒茶酚胺(catecholamines)屬兒茶酚胺的藥物有：腎上腺素、去甲上腺素、異丙腎上腺素、多巴胺。2.非兒茶酚胺屬非兒茶酚胺的藥物有：間羥胺、麻黃堿、甲氧明、苯腎上腺素(新福林）。1532023/7/243.兒茶酚胺的結(jié)構(gòu)與藥物作用強(qiáng)、弱及時(shí)間長(zhǎng)、短有關(guān)。兒茶酚胺藥物作用強(qiáng)，維持時(shí)間短，易被COMT滅活；非兒茶酚胺藥物作用弱，維持時(shí)間長(zhǎng)，不易被COMT滅活。COMT:兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶4.碳原子上的氫被-CH3取代后，不被MAO滅活，作用時(shí)間長(zhǎng)，易被神經(jīng)末梢攝取，并促進(jìn)遞質(zhì)釋放。如間羥胺、麻黃堿。MAO：?jiǎn)伟费趸?542023/7/245.胺基上的氫被不同基團(tuán)取代后，藥物對(duì)、受體選擇性產(chǎn)生改變。如H原子被-CH3取代后，為腎上腺素，對(duì)1受體有活性。H原子被異丙基取代后，為異丙腎上腺素，對(duì)1、2受體有活性，對(duì)受體無(wú)活性。155受體激動(dòng)藥腎上腺素受體激動(dòng)藥，受體激動(dòng)藥受體激動(dòng)藥2023/7/24二、分類1562023/7/24

受體激動(dòng)藥去甲腎上腺素(noradrenaline,NA;norepinephrine,NE)[體內(nèi)過(guò)程]本品口服不吸收，在堿性腸液中易破壞；不宜皮下及肌肉注射；也不宜靜脈注射，一般采用靜脈滴注給藥。1572023/7/24[藥理作用]作用機(jī)制：對(duì)受體具有強(qiáng)大的激動(dòng)作用對(duì)1受體激動(dòng)作用較弱對(duì)2受體無(wú)作用激動(dòng)突觸前膜2受體，負(fù)反饋抑制NA的釋放。1582023/7/241.血管激動(dòng)血管1受體,使血管收縮,主要是小動(dòng)脈、小靜脈血管收縮。血管收縮強(qiáng)度順序：皮膚、粘膜血管腎臟血管腦、肝、腸系膜血管骨骼肌血管1592023/7/24冠狀血管舒張，血流量增加:(1)心臟興奮，心肌代謝產(chǎn)物腺苷增加，腺苷具有很強(qiáng)的冠狀血管舒張作用。這是由于心臟興奮后，代謝加速，局部組織O2分壓降低，心肌細(xì)胞內(nèi)的ATP分解成ADP和AMP5`-核苷酸酶腺苷。(2)血壓升高，提高了冠脈灌注壓力。(3)激動(dòng)突觸前膜2受體。1602023/7/242.心臟激動(dòng)心臟1受體，心肌收縮力加強(qiáng)，心率加快，傳導(dǎo)加快，心輸出量增加。大劑量可引起心率失常。3.血壓小劑量NA興奮心臟，收縮壓升高，血管收縮不明顯，舒張壓不變，脈壓差變大。大劑量收縮壓和舒張壓升高，脈壓差變小。1612023/7/24[臨床應(yīng)用]1.休克2.藥物中毒性低血壓，如氯丙嗪引起的體位性低血壓。3.上消化道出血[不良反應(yīng)]1.局部組織缺血壞死2.急性腎功能衰竭1622023/7/24

間羥胺

(metaraminol;阿拉明,aramine)為人工合成品作用機(jī)制：1.直接作用于1受體和1受體。1受體作用較弱。2.間羥胺可被腎上腺素能神經(jīng)末梢攝取，進(jìn)入囊泡，置換囊泡中的NA，促進(jìn)NA釋放。1632023/7/24作用特點(diǎn)：1.間羥胺收縮血管作用及升高血壓作用比NA弱，因不被MAO滅活，故升壓作用持久。為NA的代用品，用于各種休克的早期。2.1受體興奮作用較弱，不引起心率失常。3.本品化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，因收縮血管作用較弱，可肌注，不引起局部組織缺血壞死。1642023/7/244.對(duì)腎血管無(wú)明顯收縮作用，不引起急性腎功能衰竭。5.快速耐受性，因囊泡內(nèi)NA的釋放量逐漸減少，效應(yīng)也逐漸減弱。1652023/7/24

去氧腎上腺素

(苯氧腎上腺素，新福林)(Phenylephrine,neosynephrine)

甲氧明(methoxamine)作用機(jī)制與間羥胺相似，不易被MAO滅活，與NA比較，升血壓作用弱而持久，可用于抗休克治療。靜脈點(diǎn)滴、肌注均可。腎血管收縮及腎血流量減少比NA更明顯1662023/7/24[臨床應(yīng)用]1.防治腰麻、硬膜外麻及全身麻醉的低血壓。2.陣發(fā)性室上性心動(dòng)過(guò)速，升壓時(shí)通過(guò)迷