免疫學(xué)技術(shù)-放射免疫技術(shù)（臨床免疫檢驗(yàn)課件）

放射免疫分析1959年，Yalow和Berson在研究胰島素和胰島素抗體的免疫反應(yīng)時(shí)，以放射性碘標(biāo)記胰島素來測(cè)定糖尿病患者血漿胰島素的含量，由此創(chuàng)立了放射免疫分析，并于1977年獲得諾貝爾獎(jiǎng)前言放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)是將放射性核素高敏感的示蹤特點(diǎn)和抗原抗體反應(yīng)的高特異性特點(diǎn)相結(jié)合的一種體外測(cè)定超微量物質(zhì)的技術(shù)。根據(jù)檢測(cè)原理不同分為放射免疫分析（RIA）和免疫放射分析（IRMA）放射免疫技術(shù)放射性核素γ放射性核素（目前常用）如125I、

131I等，以125I最常用，用γ計(jì)數(shù)器測(cè)定

β放射性核素有3H、

14C等以3H最常用，用液體閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)定放射性核素在發(fā)生衰變過程中會(huì)釋放出射線，衰變方式有α、β、γ三類用于放射性標(biāo)記的有β和γ兩類放射性核素放射免疫分析放射免疫分析（RIA）是以放射性核素標(biāo)記的抗原（Ag*）與未標(biāo)記抗原（Ag）競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特異抗體（Ab）來對(duì)待檢樣品中的抗原進(jìn)行定量測(cè)定的一種技術(shù)放射免疫分析檢測(cè)原理其基本原理是利用標(biāo)記的抗原（Ag*）和待測(cè)抗原（Ag）對(duì)限量特異性抗體（Ab）的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抑制作用RIA屬于競(jìng)爭(zhēng)性分析方法類型標(biāo)記抗原、標(biāo)準(zhǔn)品抗原（或待檢樣本）特異性抗體同時(shí)加入反應(yīng)體系中平衡法標(biāo)準(zhǔn)品抗原（或待檢樣本）和特異性抗體優(yōu)先使非標(biāo)記抗原與特異性抗體達(dá)到平衡然后再加入標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合非平衡法關(guān)鍵技術(shù)——抗原抗體反應(yīng)Ag*Ag反應(yīng)條件體積溫度時(shí)間pHAb(標(biāo)準(zhǔn)Ag/樣品Ag)牢固的抗原抗體復(fù)合物關(guān)鍵技術(shù)——分離結(jié)合標(biāo)記物活性炭吸附法PEG沉淀法PR試劑法雙抗體沉淀法分離徹底、迅速分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡分離效果不受反應(yīng)介質(zhì)的干擾操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好經(jīng)濟(jì)關(guān)鍵技術(shù)——數(shù)據(jù)處理參數(shù)cpmB/T(%)F/T(%)B/F(%)B/B0(%)注：T即是B與F的總和標(biāo)準(zhǔn)曲線晶體閃爍計(jì)數(shù)器包括了NaI閃爍晶體、光電倍增管以及計(jì)數(shù)器測(cè)量的放射性信號(hào)是儀器輸出的電脈沖數(shù)：每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)方法評(píng)價(jià)RIA敏感度高、特異性強(qiáng)精密度高、重復(fù)性好用血量少、可測(cè)定小分子量和大分子量物質(zhì)等放射性核素的放射性對(duì)人體會(huì)產(chǎn)生一定的危害性，且其廢物的儲(chǔ)存和銷毀會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染方法評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)臨床應(yīng)用激素其他腫瘤標(biāo)志物藥物濃度檢測(cè)癌胚抗原、甲胎蛋白CA-125、CA-199等甲狀腺激素、促甲狀腺激素胰島素、C肽等地高辛、嗎啡、苯巴比妥苯妥英鈉等微生物抗原或抗體檢測(cè)血液系統(tǒng)疾病檢測(cè)等01020304放射免疫分析的方法類型放射免疫分析的關(guān)鍵技術(shù)放射免疫分析的臨床應(yīng)用

小結(jié)放射免疫分析的檢測(cè)原理思考題放射免疫分析的原理是什么？你怎樣評(píng)價(jià)該技術(shù)？免疫放射分析1968年，Miles和Heles將放射性核素標(biāo)記抗胰島素抗體上，并采用固相吸附的方式除去游離標(biāo)記抗體，進(jìn)而檢測(cè)牛血清中胰島素獲得成功，為區(qū)別經(jīng)典的RIA,將該方法命名為免疫放射分析或免疫放射度量分析前言放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)是將放射性核素高敏感的示蹤特點(diǎn)和抗原抗體反應(yīng)的高特異性特點(diǎn)相結(jié)合的一種體外測(cè)定超微量物質(zhì)的技術(shù)。根據(jù)檢測(cè)原理不同分為放射免疫分析（RIA）和免疫放射分析（IRMA）放射免疫技術(shù)免疫放射分析從放射免疫分析（RIA）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核素標(biāo)記免疫測(cè)定，其特點(diǎn)為用核素標(biāo)記的抗體直接與待檢抗原反應(yīng)，并用固相免疫吸附劑作為B或F的分離手段免疫放射分析檢測(cè)原理基本檢測(cè)原理是將放射性核素（125I）標(biāo)記在抗體上，使用過量的標(biāo)記抗體（Ab*）與待測(cè)抗原（Ag）反應(yīng)，待測(cè)Ag量越多，所結(jié)合的Ab*就越多，產(chǎn)生的標(biāo)記Ag-Ab*也就越多，待測(cè)Ag的量與放射性強(qiáng)度成正比IRMA屬于非競(jìng)爭(zhēng)性免疫結(jié)合反應(yīng)Ag+Ab*Ag-Ab*+Ab*方法類型直接IRMA雙抗體夾心法IRMA標(biāo)記抗抗體法雙標(biāo)記液相IRMA關(guān)鍵技術(shù)——抗原抗體反應(yīng)AgAb固相抗原抗體復(fù)合物*牢固的抗原抗體復(fù)合物Ab*關(guān)鍵技術(shù)——分離技術(shù)固相吸附分離技術(shù)：一般采用聚苯乙烯管作為反應(yīng)器和固相吸附材料固相吸附分離技術(shù)關(guān)鍵技術(shù)——數(shù)據(jù)處理參數(shù)cpmB/T(%)F/T(%)B/F(%)B/B0(%)注：T即是B與F的總和晶體閃爍計(jì)數(shù)器包括了NaI閃爍晶體、光電倍增管以及計(jì)數(shù)器測(cè)量的放射性信號(hào)是儀器輸出的電脈沖數(shù)：每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)方法評(píng)價(jià)效率高、操作簡(jiǎn)便靈敏度高，特異性強(qiáng)穩(wěn)定性好抗體用量較多抗體的純化較難方法評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)臨床應(yīng)用抗體適用于大分子蛋白質(zhì)和多肽類激素的檢測(cè)分析，如CA153，人血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH等以及某些難以標(biāo)記的病毒抗原IRMA的測(cè)定對(duì)象主要