臨床生物化學(xué)-血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)課件

第五章

血漿脂蛋白代謝紊亂的

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2020年10月2日1KEYPOINTSClassificationandfunctionsofthemainlipids,lipoproteinsandapolipoproteinsintheblood.Characteristicsandfunctionsofthemainreceptors,lipid-bindingproteinsandenzymesrelatedtothelipoproteinmetabolism.Definitionandtypesofhyperlipidemia.Relationshipbetweentheabnormityoflipoproteinmetabolismandatherosclerosis.Evaluation,comparisonandclinicalsignificanceoflipiddeterminations.2020年10月2日2MajorObjectives了解脂蛋白代謝紊亂和動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系。熟悉脂蛋白的特征、脂代謝有關(guān)酶類的特點(diǎn)和生理功能、高脂蛋白血癥分型及其特征。掌握血漿脂類組成及脂蛋白的分類、主要載脂蛋白和脂蛋白受體的特征與功能、血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)。

重點(diǎn)血漿脂蛋白的分類和特征、血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)。

難點(diǎn)血漿載脂蛋白和脂蛋白受體的特征與功能。2020年10月2日3BriefContents第一節(jié)血漿脂蛋白及其代謝第二節(jié)脂蛋白代謝紊亂第三節(jié)脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)2020年10月2日4第一節(jié)血漿脂蛋白及其代謝一、血漿脂蛋白的分類二、血漿脂蛋白的組成和特征三、載脂蛋白的組成和特征四、脂蛋白受體和脂蛋白結(jié)合蛋白五、血漿脂蛋白的代謝2020年10月2日5一、血漿脂蛋白的分類血漿脂質(zhì)總量為4.0～7.0g/L。包括：1.膽固醇(totalcholesterol，TC)

游離膽固醇(freecholesterol，F(xiàn)C)

膽固醇酯(cholesterolester，CE)2.磷脂(Phospholipid，PL)3.甘油三酯(triacylglycerol/triglyceride，TG)4.游離脂肪酸(freefattyacid，F(xiàn)FA)2020年10月2日6血漿脂蛋白結(jié)構(gòu)脂蛋白一般以不溶于水的TG和CE為核心，表面覆蓋有少量蛋白質(zhì)和極性的PL、FFA，從而使脂蛋白顆粒能穩(wěn)定地分散在血漿中。

2020年10月2日7(一)超速離心法根據(jù)各種脂蛋白在一定密度的介質(zhì)中進(jìn)行離心時(shí)，因漂浮速率不同而進(jìn)行分離的方法。←乳糜微粒(chylomicron，CM)←極低密度脂蛋白(verylowdensitylipoprotein，VLDL)←低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)←高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)※中密度脂蛋白(intermediatedensitylipoprotein,IDL)2020年10月2日8（二）電泳法根據(jù)血漿脂蛋白表面電荷量大小不同，在電場(chǎng)中，其遷移速率也不同，分為：☆乳糜微?！瞀?脂蛋白☆前β-脂蛋白☆α-脂蛋白2020年10月2日9超速離心法與電泳法分離血漿脂蛋白的相應(yīng)關(guān)系2020年10月2日10二、血漿脂蛋白的組成和特征2020年10月2日11三、載脂蛋白的組成和特征

脂蛋白中的蛋白部分稱為載脂蛋白(apolipoprotein，apoprotein，Apo)

。載脂蛋白在脂蛋白代謝中的生理功能：（1）構(gòu)成并穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)。（2）修飾并影響與脂蛋白代謝有關(guān)的酶的活性。（3）作為脂蛋白受體的配體，參與脂蛋白與細(xì)胞表面脂蛋白受體的結(jié)合及其代謝過(guò)程。2020年10月2日12載脂蛋白的特征及生理功能2020年10月2日13四、脂蛋白受體和脂蛋白結(jié)合蛋白

Brown和Goldstein于1974年研究家族性高膽固醇血癥(familialhypercholesterolemia，F(xiàn)H)患者代謝缺陷時(shí)，在成纖維細(xì)胞膜上發(fā)現(xiàn)了LDL受體(LDLreceptor，LDLR)的存在。以后相繼發(fā)現(xiàn)有VLDL受體和清道夫受體等。2020年10月2日14（一）低密度脂蛋白受體受體結(jié)構(gòu)

由836個(gè)氨基酸殘基組成36面體結(jié)構(gòu)蛋白，分子量約115kD，由五種不同的區(qū)域構(gòu)成2020年10月2日15LDL受體基因結(jié)構(gòu)及功能

人LDL受體基因長(zhǎng)度45kD，由18個(gè)外顯子和17個(gè)內(nèi)含子組成。受體親和性含ApoB100的脂蛋白可與LDL受體以高親和力結(jié)合。

LDL受體廣泛分布于肝、動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。2020年10月2日16LDL受體途徑（LDLreceptorpathway）若胞內(nèi)游離膽固醇濃度升高，則：①抑制HMGCoA還原酶，以減少自身的膽固醇合成；②抑制LDL受體基因的表達(dá)，減少LDL受體的合成，從而減少LDL的攝取；③激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ACAT，使游離膽固醇在胞質(zhì)內(nèi)酯化成膽固醇酯貯存，以供細(xì)胞的需要。2020年10月2日17（二）極低密度脂蛋白受體

結(jié)構(gòu)與LDL受體類似。僅對(duì)含ApoE的脂蛋白VLDL、VLDL殘粒有高親和性結(jié)合，對(duì)LDL為顯著的低親和性。在肝內(nèi)幾乎未發(fā)現(xiàn)，廣泛分布在代謝活躍的心肌，骨骼肌、脂肪組織等細(xì)胞.VLDL受體不受細(xì)胞內(nèi)膽固醇負(fù)反饋抑制。2020年10月2日18（三）清道夫受體

(scavengerreceptor，SR)

◆清道夫受體結(jié)構(gòu)

SRs分為SR-A、SR-B、SR-C、SR-D、SR-E和SRF六大類?！羟宓婪蚴荏w配體

均為多陰離子化合物。①乙酰化或氧化等修飾的LDL；②多聚次黃嘌呤核苷酸，多聚鳥(niǎo)嘌呤核苷酸；③多糖如硫酸右旋糖酐；④細(xì)菌脂多糖，如內(nèi)毒素等。◆清道夫受體功能1.巨噬細(xì)胞通過(guò)清道夫受體清除細(xì)胞外液中的修飾LDL，尤其是氧化LDL，是機(jī)體的一種防御功能。2.具有清除血管過(guò)多脂質(zhì)和病菌毒素等。2020年10月2日19（四）LDL受體相關(guān)蛋白（LRP）LRP體內(nèi)分布：廣泛，在肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等均有表達(dá)，以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中含量最豐富。LRP功能：能識(shí)別多種配體（蛋白酶一蛋白酶抑制劑、毒素的受體、某些病毒、乳鐵蛋白等）并在體內(nèi)清除之。LRP是含ApoE的CM殘粒、VLDL殘粒的受體，使富含ApoE的CM殘粒、VLDL殘粒能從血漿中快速清除。LRP與動(dòng)脈粥樣硬化（AS）的形成有密切關(guān)系。①LRP參與了LDL的氧化過(guò)程，與血管損傷有關(guān)。②LRP與泡沫細(xì)胞的生成有關(guān)。2020年10月2日20（五）HDL受體和HDL結(jié)合蛋白在不同細(xì)胞的表面及細(xì)胞內(nèi)已分離出了多種可與HDL結(jié)合的蛋白質(zhì)。某些蛋白質(zhì)可特異性識(shí)別并以高親和力與HDL結(jié)合，引發(fā)下游的生物學(xué)效應(yīng)，稱之為HDL-R。有些蛋白質(zhì)也可與HDL結(jié)合，但不產(chǎn)生或只產(chǎn)生較弱的效應(yīng)，則稱之為HDL結(jié)合蛋白（HBP）。

2020年10月2日21（六）膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CETP）屬于脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（lipidtransferprotein，LTP），是由肝、小腸、腎上腺、脾、脂肪組織及巨噬細(xì)胞合成的一種疏水性糖蛋白。cDNA編碼的CETP含476氨基酸殘基，分子量為53kD；成熟CETP含4個(gè)天冬酰N-糖鏈，分子量為74kD。

2020年10月2日22CETP對(duì)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程2020年10月2日23五、血漿脂蛋白的代謝

（一）血漿脂蛋白代謝密切相關(guān)的酶類參與脂質(zhì)代謝的酶有：脂蛋白脂肪酶（lipoproteinlipase，LPL）肝脂酶（hepatictriglyceridelipase，HTGL）LCAT等。

2020年10月2日241．LPLLPL是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白，分子量為60kD。ApoCⅡ?yàn)槠浔匦璧妮o因子。作用是分解脂蛋白核心成分的甘油三酯，并促使脂蛋白之間轉(zhuǎn)移膽固醇、磷脂及載脂蛋白?；钚訪PL以同源二聚體形式存在，通過(guò)靜電引力與毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的多聚糖結(jié)合，肝素可以使此結(jié)合形式的LPL釋放入血，并提高其活性。

2020年10月2日252．HTGLHTGL亦稱為肝性LPL（hepaticLPL）其特點(diǎn)：HTGL活性不需要ApoCⅡ作為激活劑；SDS可抑制HTGL活性，而不受高鹽濃度及魚(yú)精蛋白的抑制；主要作用于小顆粒脂蛋白如VLDL殘粒、CM殘粒及HDL，調(diào)節(jié)膽固醇從周?chē)M織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝，使肝內(nèi)的VLDL轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)DL。2020年10月2日263．LCATLCAT由416個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為6.3kD，屬于糖蛋白。LCAT由肝臟合成釋放入血液，以游離或與脂蛋白結(jié)合的形式存在。作用是將HDL中的卵磷脂的C2位不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)移給游離膽固醇，生成溶血卵磷脂和膽固醇酯，使HDL變成成熟的HDL球狀顆粒。2020年10月2日27（二）血漿脂蛋白代謝外源性代謝途徑：飲食攝入的膽固醇和TG在小腸中合成CM及其代謝過(guò)程。內(nèi)源性代謝途徑：包括①由肝臟合成VLDL，VLDL轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL，LDL被肝臟或其它器官代謝的過(guò)程。②HDL的代謝過(guò)程。

2020年10月2日281．CM代謝從食物中攝取的脂質(zhì)(主要是TG)，在腸內(nèi)被胰腺分泌的脂酶水解成脂肪酸和甘油一酯（MG），由腸粘膜吸收進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)再重新合成TG及磷脂。新合成的TG與少量的膽固醇、磷酯、ApoB48、ApoAI構(gòu)成CM，經(jīng)淋巴管至胸導(dǎo)管進(jìn)入血液循環(huán)。CM在血液中從HDL轉(zhuǎn)移獲得ApoC和ApoE而變化成熟型CM。接著CM中的TG被LPL水解產(chǎn)生甘油一酯及脂肪酸，后者被細(xì)胞攝取利用或貯存。剩下的殘留物被稱為CM殘粒(CMremnant)，隨血液進(jìn)入肝臟迅速被代謝。

2020年10月2日29CM代謝2020年10月2日302．VLDL、IDL、LDL代謝體內(nèi)合成的內(nèi)源性TG與ApoB100、C、E等在肝臟合成VLDL釋放入血液。TG經(jīng)血管壁的LPL水解生成脂肪酸被末梢組織利用。失去TG之后的VLDL轉(zhuǎn)變成VLDL殘粒（IDL）。IDL有兩條代謝途徑：一是直接經(jīng)肝臟ApoE受體結(jié)合攝取進(jìn)入肝細(xì)胞代謝；二是經(jīng)HTGL作用轉(zhuǎn)變成以ApoB100和游離膽固醇為主要成份的LDL，經(jīng)末梢組織的LDL-R結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行代謝。

2020年10月2日31VLDL、IDL、LDL代謝2020年10月2日323．HDL代謝在肝臟和小腸合成時(shí)屬于未成形的HDL（nascentHDL，HDLn）。HDLn獲取CM、VLDL表層的磷脂和ApoAⅠ而變成園盤(pán)狀的新生HDL。新生HDL從末梢組織細(xì)胞膜獲得游離膽固醇，經(jīng)LCAT作用生成CE進(jìn)入HDL內(nèi)部，形成成熟型HDL3和球型HDL2。HDL3在CETP介導(dǎo)下，與VLDL、LDL進(jìn)行CE/TG交換，使末梢組織的FC輸送到肝臟。HDL2中的TG經(jīng)肝臟的HTGL作用，可以再變成HDL3，使HDL在逆轉(zhuǎn)運(yùn)中再利用，從而防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。

2020年10月2日33第二節(jié)脂蛋白代謝紊亂一、高脂蛋白血癥二、低脂蛋白血癥2020年10月2日34一、高脂蛋白血癥高脂血癥（hyperlipidemia）是指血漿中膽固醇和/或TG水平升高。由于血脂在血中以脂蛋白形式運(yùn)輸，因而實(shí)際上高脂血癥就是高脂蛋白血癥（hyperlipoproteinemia，HLP）。

2020年10月2日35（一）高脂蛋白血癥的分型2020年10月2日36（二）原發(fā)性高脂蛋白血癥家族性多基因性高膽固醇血癥家族性高膽固醇血癥家族性異常β-脂蛋白血癥家族性乳糜微粒血癥家族性高甘油三酯血癥其他家族性高脂血癥2020年10月2日37（三）繼發(fā)性脂蛋白血癥糖尿病甲狀腺功能減退腎臟疾患肥胖癥酗酒藥物2020年10月2日38（四）高HDL血癥血漿HDL-膽固醇（HDL-C）含量超過(guò)2.6mmol/L，定義為高HDL血癥。CETP及HTGL活性降低是引起高HDL血癥的主要原因。若CETP缺陷，HDL內(nèi)的CE蓄積，使HDL增多；若HTGL活性降低，HDL被肝細(xì)胞攝取減少并使HDL2→HDL3轉(zhuǎn)換過(guò)程減慢而停留在血液中，并使其濃度增加，出現(xiàn)高HDL血癥。高HDL血癥分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類。原發(fā)性高HDL血癥的病因有：①CETP缺損；②HTGL活性降低；③其他。繼發(fā)性高HDL血癥病因有：①運(yùn)動(dòng)失調(diào)；③飲酒過(guò)量；④原發(fā)性膽汁性肝硬化；⑤治療高脂血癥的藥物引起；⑥其他。

2020年10月2日39二、低脂蛋白血癥低脂蛋白血癥的診斷血清TC在3.3mmol/L以下，或TG在0.45mmol/L以下，或LDL-C在2.1mmol/L以下者，屬于低脂蛋白血癥。TC和TG同時(shí)降低者多見(jiàn)，脂蛋白中多見(jiàn)HDL、LDL和VLDL降低。病因原發(fā)性低脂蛋白血癥的原因有ApoAⅠ缺乏或變異、LCAT缺乏癥、無(wú)α-脂蛋白血癥（Tangier?。?、無(wú)β-脂蛋白血癥、低β-脂蛋白血癥等。

2020年10月2日40三種無(wú)脂蛋白血癥的主要特點(diǎn)2020年10月2日41第三節(jié)

脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)一、血漿脂質(zhì)測(cè)定二、血漿脂蛋白測(cè)定三、血漿載脂蛋白測(cè)定四、血漿脂代謝相關(guān)酶的測(cè)定五、脂質(zhì)相關(guān)蛋白基因突變分析六、血脂和脂蛋白檢測(cè)的臨床應(yīng)用

2020年10月2日42一、血漿脂質(zhì)測(cè)定（一）TG測(cè)定1．化學(xué)法2．酶法測(cè)定（二）TC測(cè)定1．化學(xué)法2．酶法測(cè)定（三）FFA測(cè)定（四）磷脂測(cè)定2020年10月2日43（一）甘油三酯測(cè)定

1．化學(xué)法

基本操作步驟包括：①TG的抽提分離（有機(jī)溶劑），去除干擾物—PL、FG等（吸附劑）或分溶抽提；②皂化使TG水解生成甘油；氧化甘油成甲醛（過(guò)碘酸）；④顯色定量甲醛。A.甲醛與變色酸在硫酸溶液中加熱產(chǎn)生紫紅色（Eegriwe反應(yīng)），570nm測(cè)定吸光度。B.甲醛與乙酰丙酮在銨離子存在下加熱生成黃色的產(chǎn)物（Hantgsch反應(yīng)），412nm測(cè)定吸光度。2020年10月2日442．甘油三酯酶法測(cè)定評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，并能在自動(dòng)化生物化學(xué)分析儀上進(jìn)行批量測(cè)定。

所測(cè)結(jié)果包括了血清中FG，如何解決？2020年10月2日45TG參考范圍與臨床意義血清TG參考范圍：成人0.45~1.69mmol/L（40~150mg/dl）。目前我國(guó)的血脂異常防治建議提出，成年人的合適TG水平≤1.69mmol/L（150mg/dl）；＞1.69mmol/L為T(mén)G升高。TG升高可見(jiàn)于家族性高TG血癥、家族性混合性高脂血癥、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、腎病綜合癥、甲狀腺功能減退、膽道梗塞、糖原累積癥、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。

2020年10月2日46（二）總膽固醇測(cè)定血清中膽固醇：CE占70％；FC占30％。測(cè)定方法分為化學(xué)法和酶法兩大類。2020年10月2日471．化學(xué)比色法一般包括：①抽提；②皂化；②毛地黃皂苷沉淀純化；④顯色比色四個(gè)階段。顏色反應(yīng)有三類：（1）膽固醇與醋酐-硫酸試劑產(chǎn)生藍(lán)綠色。如L-B法、Abell法。（2）膽固醇與高鐵硫酸試劑產(chǎn)生紫紅色，如硫磷鐵法。（3）膽固醇與鄰苯二甲醛硫酸生成紫紅色，如鄰苯二甲醛法。代表性的方法：（1）硫磷鐵法（Bowman法）：用無(wú)水乙醇提取膽固醇，沉淀蛋白質(zhì)，提取液中加硫磷鐵試劑顯色。（2）Abell法：血清中加入氫氧化鈉乙醇溶液，使CE皂化為FC；加入正己烷-水提取后，F(xiàn)C進(jìn)入正己烷相，以醋酐-硫酸試劑顯色定量。2020年10月2日482.總膽固醇酶法測(cè)定（1）CE在膽固醇酯酶(cholesterolesterase，CHE)作用下水解成FC和FFA；（2）FC再經(jīng)膽固醇氧化酶(cholesteroloxidase，COD)氧化成△4膽甾烯酮和H2O2；（3）再分別定量O2的消耗或者H2O2的生成量，或者△4膽甾烯酮生成量，以作為FC的定量依據(jù)。A.測(cè)定△4膽甾烯酮法240nmB.定量O2的消耗電位測(cè)量C.測(cè)定H2O2的生成量2020年10月2日49TC參考范圍與臨床意義血清TC參考范圍：成人2.85~5.69mmol/L（110~220mg/dl）。目前我國(guó)的血脂異常防治建議中以≤5.17mmol/L（200mg/dl）為合適水平，5.20~5.66mmol/L（201~219mg/dl）為臨界范圍或邊緣升高，≥5.69mmol/L（220mg/dl）為升高。高膽固醇血癥和AS的發(fā)生有密切關(guān)系。TC升高見(jiàn)于各種高脂蛋白血癥、梗阻性黃疸、腎病綜合征、甲狀腺功能低下、慢性腎功能衰竭、糖尿病等。此外，吸煙、飲酒、緊張、血液濃縮等也可使TC升高。TC降低見(jiàn)于各種脂蛋白缺陷狀態(tài)、肝硬化、惡性腫瘤、營(yíng)養(yǎng)不良、巨細(xì)胞性貧血等。

2020年10月2日50（三）游離脂肪酸測(cè)定FFA在血中濃度很低，成人0.4～0.9mmol/L；兒童和肥胖成人稍高。其含量水平受脂代謝、糖代謝和內(nèi)分泌功能等因素影響。血中FFA半壽期為1～2min，極短。血清中的FFA是與清蛋白結(jié)合進(jìn)行運(yùn)輸。

FFA測(cè)定標(biāo)本：一定要注意在4℃條件下分離血清并進(jìn)行測(cè)定。因?yàn)檠杏懈鞣N脂肪酶存在，易使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中FFA值上升。貯存的標(biāo)本僅限于24h內(nèi)。血清FFA測(cè)定方法：1．非酶法測(cè)定非酶法測(cè)定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相層析法。前三種方法準(zhǔn)確性差，高效液相層析法儀器太昂貴，不便于批量操作。2．酶測(cè)定法血清中主要用脂肪酶測(cè)定?？煞謩e測(cè)定產(chǎn)物乙酰CoA、AMP或輔酶A(CoA)，進(jìn)行定量。酶法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠快速，易于批量檢測(cè)。2020年10月2日51（四）磷脂測(cè)定血清中PL包括：①卵磷脂(60％)和溶血卵磷脂(2％～10％)；②磷脂酰乙醇胺等(2％)；鞘磷脂(20％)。血清PL定量方法:1．化學(xué)測(cè)定法①抽提分離；②灰化；顯色、比色。2．酶測(cè)定法可分別利用磷脂酶A、B、C、D等4種酶作用，加水分解，測(cè)定其產(chǎn)物，對(duì)PL進(jìn)行定量，一般多采用磷脂酶D(PL-D)。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含膽堿的磷脂，這三種磷脂約占血清總磷脂的95％。該法快速準(zhǔn)確，便于自動(dòng)化儀器進(jìn)行批量檢測(cè)。2020年10月2日52二、血漿脂蛋白測(cè)定（一）電泳法（二）超速離心法（三）脂蛋白膽固醇測(cè)定1．沉淀分離法2．均相測(cè)定法3．間接法（四）Lp(a)測(cè)定2020年10月2日53二、血漿脂蛋白測(cè)定

（一）電泳分離法原理：不同脂蛋白因蛋白質(zhì)含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進(jìn)行分離，并根據(jù)血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認(rèn)。方法：（1）預(yù)染、電泳:血漿脂蛋白用親脂染料如蘇丹黑B等進(jìn)行預(yù)染再電泳；（2）掃描、計(jì)算：置于光密度計(jì)內(nèi)進(jìn)行掃描，計(jì)算出各種脂蛋白的百分比，該數(shù)值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠。2020年10月2日54（二）超速離心分離純化法超速離心法：根據(jù)血漿中各種脂蛋白的比重(密度)的差異，在強(qiáng)大離心力作用下進(jìn)行分離純化的一種方法。一般操作方法：將血漿置于已準(zhǔn)備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質(zhì)中，在強(qiáng)大離心力作用下，各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于離心管中的密度梯度溶媒層，達(dá)到分離純化的目的。超速離心法是分離純化脂蛋白的有效技術(shù),目前廣泛應(yīng)用于脂蛋白、載脂蛋白代謝的研究中。第一課件網(wǎng)網(wǎng)站

2020年10月2日55（三）血漿脂蛋白膽固醇測(cè)定脂蛋白中膽固醇含量較為穩(wěn)定，因此目前以測(cè)定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)。高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)極低密度脂蛋白-膽固醇(VLDL-C)2020年10月2日561.沉淀分離法原理：脂蛋白的組成及理化性質(zhì)不同，在不同的聚陰離子、2價(jià)金屬離子(Mn2+，Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)及不同pH值條件下，使脂蛋白與聚陰離子結(jié)合形成復(fù)合物沉淀，以達(dá)到分離定量各種脂蛋白的目的。方法：（1）肝素-錳沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL-C量，即為血漿HDL的量。（2）聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL，離心去上清液留沉淀。再定量沉淀其中的LDL-C，即血漿的LDL量。評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)單，無(wú)需昂貴的儀器，是臨床應(yīng)用的檢測(cè)方法。2020年10月2日572．勻相測(cè)定法

（1）血漿高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定

原理：CM、VLDL、LDL在多聚陰離子存在下與試劑Ⅰ發(fā)生凝集形成遮避圈，抑制其表面的游離膽固醇反應(yīng)或試劑Ⅰ與CM、VLDL、LDL中的膽固醇反應(yīng)生成H2O2，并將H2O2清除；試劑Ⅱ與HDL形成可溶性復(fù)合體，使HDL中的膽固醇直接與酶試劑反應(yīng)。

2020年10月2日58SPD法測(cè)定HDL-C在血清中加入試劑Ⅰ，在反應(yīng)促進(jìn)劑（合成的多聚物/表面活性劑）的作用下，血清中CM、VLDL及LDL與試劑形成可溶性復(fù)合物，其表層的FC在CHOD的催化下反應(yīng)生成H2O2，H2O2在POD的作用下被清除。加入試劑Ⅱ，與HDL顆粒成為可溶性復(fù)合物，HDL中的膽固醇與膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶反應(yīng)，生成H2O2，并作用于色原體產(chǎn)生顏色反應(yīng)，其顏色的深淺與HDL-C的含量成正比。

2020年10月2日59HDL-C參考范圍與臨床意義血清HDL-C參考范圍：成年男性1.16~1.42mmol/L（45~55mg/dl）女性1.29~1.55mmol/L（50~60mg/dl）HDL-C與冠心病的發(fā)展成負(fù)相關(guān)。HDL-C降低見(jiàn)于急性感染、糖尿病、慢性腎功能衰竭、腎病綜合征等。HDL-C含量過(guò)高（如超過(guò)2.6mmol/L），也屬于病理狀態(tài)，為高HDL血癥。高HDL血癥可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類。2020年10月2日60（2）血漿LDL-C測(cè)定——SUR法SUR法檢測(cè)原理：試劑Ⅰ中的表面活性劑1能改變LDL以外的脂蛋白（HDL、CM和VLDL等）結(jié)構(gòu)并解離，所釋放出來(lái)的微?；懝檀挤肿优c膽固醇酶試劑反應(yīng)，產(chǎn)生的H2O2在缺乏偶聯(lián)劑時(shí)被消耗而不顯色；加試劑Ⅱ，表面活性劑2使LDL顆粒解離釋放膽固醇，參與Trinder反應(yīng)而顯色，色澤深淺與LDL-C量呈比例。

2020年10月2日61LDL-C參考范圍與臨床意義血清LDL-C參考范圍：成人2.07~3.11mmol/L（80~120mg/dl）LDL是AS的主要危險(xiǎn)因素之一，血清LDL-C水平越高，AS的危險(xiǎn)性越大。血清LDL-C水平隨年齡增加而升高。高脂、高熱量飲食、運(yùn)動(dòng)少和精神緊張等可使LDL-C水平升高。臨床上LDL-C升高可見(jiàn)于家族性高膽固醇血癥、家族性apoB缺陷癥、混合性高脂血癥、糖尿病、甲狀腺功能低下、腎病綜合征、梗阻性黃疸、慢性腎功能衰竭、Cushing’s綜合征、妊娠、多發(fā)性肌瘤、某些藥物的使用等。LDL-C降低見(jiàn)于家族性無(wú)β或低β-脂蛋白血癥、營(yíng)養(yǎng)不良、甲狀腺功能亢進(jìn)、消化吸收不良、肝硬化、慢性消耗性疾病、惡性腫瘤等。

2020年10月2日623．間接法利用血清中TC、TG和HDL-C含量，按公式推算出LDL-C的量。Friedewald于1972年發(fā)明的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)式：LDL-C=TCHDL-CTG/2.2（以mmol/L計(jì)）或LDL-C=TCHDL-CTG/5（以mg/dl計(jì)）。應(yīng)注意運(yùn)用這一公式有如下條件：①空腹血清不含CM②TG濃度在4.60mmol/L以下③Ⅲ型高脂血癥除外

2020年10月2日63（四）Lp(a)測(cè)定法目前主要采用免疫透射比濁法（ITA）、免疫散射比濁法(INA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、發(fā)射免疫測(cè)定法（RIA）和免疫擴(kuò)散法（RID）。免疫透射比濁法使用最為廣泛，其原理是利用Apo(a)的單克隆抗體，采用多點(diǎn)定標(biāo)（5～7點(diǎn)），用log-logit多元回歸方程進(jìn)行曲線擬合運(yùn)算，該法靈敏度高，便于自動(dòng)化批量檢測(cè)。Lp(a)-C測(cè)定法：避免或減少因?yàn)榭乖瑼po(a)多態(tài)性不同所造成的Lp(a)定量的準(zhǔn)確性。測(cè)定方法有超速離心法、麥胚血凝素法和瓊脂糖凝膠電泳法，后兩種方法在臨床應(yīng)用較廣。參考值：30mg/L以下2020年10月2日64三、載脂蛋白測(cè)定血清載脂蛋白(Apo)包括ApoAI、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E和(a)，已屬常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。血清中載脂蛋白均結(jié)合于脂蛋白中，測(cè)定時(shí)要加用解鏈劑，使脂蛋白中Apo暴露再進(jìn)行測(cè)定。目前測(cè)定血清中載脂蛋白的含量的方法是利用相應(yīng)特異抗體試劑進(jìn)行測(cè)定?，F(xiàn)有羊抗人ApoAI、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E和(a)等抗體試劑。測(cè)定原理是將某一特異抗體加到待測(cè)人血清中，即與血清中相應(yīng)抗原形成抗原抗體復(fù)合物，根據(jù)復(fù)合物的量，即可測(cè)出血清中某一Apo含量。2020年10月2日65ApoAⅠ參考范圍與臨床意義血清ApoAⅠ參考范圍：成人1.20~1.60g/LApoAⅠ的含量不一定與HDL-C成比例，同時(shí)測(cè)定ApoAⅠ與HDL-C對(duì)病理發(fā)生狀態(tài)的分析更有幫助。ApoAⅠ降低主要見(jiàn)于Ⅰ型和Ⅱa型高脂蛋白血癥、冠心病、腦血管病、感染、血液透析、慢性腎炎、吸煙、糖尿病、藥物治療、膽汁郁積阻塞、慢性肝炎、肝硬化等。ApoAⅠ升高主要見(jiàn)于妊娠、雌激素療法、鍛煉、飲酒等。

2020年10月2日66ApoB參考范圍與臨床意義血清ApoB參考范圍：成人0.80~1.20g/L。流行病學(xué)與臨床研究已確認(rèn)，ApoB增高是冠心病危險(xiǎn)因素。一般情況下，血清ApoB主要代表LDL水平，它與LDL-C成顯著正相關(guān)。ApoB與LDL-C同時(shí)測(cè)定有利于臨床判斷。ApoB升高主要見(jiàn)于冠心病、Ⅱa和Ⅱb型高脂蛋白血癥、腦血管病、糖尿病、妊娠、膽汁梗阻、脂肪肝、吸煙、血液透析、腎病綜合癥、慢性腎炎等。ApoB降低主要見(jiàn)于Ⅰ型高脂血癥、雌激素療法、肝硬化、藥物療法及感染等。

2020年10月2日67四、血漿脂代謝相關(guān)酶的測(cè)定脂蛋白脂肪酶按每公斤體重10單位的肝素量靜脈注射，10分鐘后采集靜脈血，再測(cè)定LPL活性。LPL測(cè)定方法有：①酶法，將血漿用SDS或抗體抑制HTGL活性，以LPL催化的基質(zhì)減少量進(jìn)行定量；②LPL單克隆抗體的酶免疫分析法。LPL成人參考值：在150mg/L以上；低于40mg/L，屬于LPL純合子缺乏者；40～150mg/L屬雜合子缺乏者。卵磷脂膽固醇酯?；D(zhuǎn)移酶LCAT是肝臟合成和分泌