生化試劑參數(shù)

在特定的溫度下，一般是37度，待測物質(zhì)直接或是間接或試劑中的底物發(fā)生反應(yīng)，使整個(gè)液體環(huán)境的吸光度或是顏色發(fā)生變化，這個(gè)變化可能是變深或變淡，根據(jù)朗伯比爾定律，然后我們用數(shù)字光電設(shè)備去監(jiān)測發(fā)生的變化，把顏色轉(zhuǎn)化成電信號(hào)再轉(zhuǎn)化成數(shù)字，電腦再加以計(jì)算，套入我們預(yù)先設(shè)定好的公式，這樣就有結(jié)果了。*朗伯比爾定律又稱比爾定律，是光吸收的基本定律，適用于所有的電磁輻射和所有的吸光物質(zhì)，包括氣體、固體、液體、分子、原子和離子。光被吸收的量正比于光程中產(chǎn)生光吸收的分子數(shù)目，在我們生化分析上通俗的說就是光通過顏色均勻的液體光被吸收的多少或是顏色的變化和液體中物質(zhì)的濃度成線性關(guān)系。mnadh:吸光光nWavelength(nm)240280320360400NADH(340nm)mnadh:吸光光nWavelength(nm)240280320360400NADH(340nm)NADVNADH的^挨可以耦合340nm吸光度燮化:NAD+NAD+NADH\例如AST和GLU的檢測原理：L-天門冬氨酸+a-酮戊二酸-AST-草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+[NADH|+H+-MDH-L-蘋果酸+NAD++H2ONADH在340nm有吸收峰，所以NADH的減少速度就可以反應(yīng)出AST的含量0.6-0.58-0.56-0,54-0.52-0,5-0.48-0.46-0.44—0,42-0,4-0.38-0.36-0.34一0.32-0.3—葡萄糖+H2O+O2—葡萄糖氧化酶—H2O2+葡萄糖酸2H2O2+4-氨基安替比林+酚-過氧化物酶-醌亞胺（紅色）+4H2O生成紅色的醌亞胺在500nm波長就可以檢測到。

0,9一、分析方法的選擇：常見的分析方法有:終點(diǎn)法，速率法。:一般分一點(diǎn)終點(diǎn)法和兩點(diǎn)終點(diǎn)法，一點(diǎn)法其原理是經(jīng)過一定反應(yīng)時(shí)間后，反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)進(jìn)行的一點(diǎn)分析。例如：漠甲酚綠法測定白蛋白均用該法。對(duì)于反應(yīng)快的物質(zhì)選用一點(diǎn)終點(diǎn)分析法。二點(diǎn)終點(diǎn)法，是用二點(diǎn)的吸光度之差進(jìn)行計(jì)算。2速率法：也叫速度法或連續(xù)監(jiān)測法，多數(shù)用于酶活力的測定。所有酶活力測定均選用速率法。其原理是根據(jù)酶所催化反應(yīng)的速率來測定酶活力的大小，實(shí)際操作時(shí)要注意反應(yīng)的方向，正反應(yīng)和負(fù)反應(yīng)。二、雙波長測定中輔波長的選擇:雙波長的應(yīng)用是為了消除樣品中對(duì)測定有干擾的物質(zhì)的影響，而實(shí)際應(yīng)用中選擇第二波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸等的干擾。例如：鉬酸銨法測定無機(jī)磷,其測定波長為340nm,對(duì)于溶血樣品，血紅蛋白在340nm有較強(qiáng)吸收，其吸光度同380nm處吸光度相同，選用380nm作輔助波長，可消除溶血對(duì)測定的干擾。三、 測定時(shí)間的選擇：對(duì)于終點(diǎn)分析，測定時(shí)間的選擇應(yīng)充分考慮到干擾的問題。例如：漠甲酚綠法測定白蛋白選用終點(diǎn)法，白蛋白同漠甲酚綠反應(yīng)快，在一分鐘內(nèi)基本上反應(yīng)完全，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長，a球蛋白同漠甲酚綠反應(yīng)形成干擾，因而漠甲酚綠法測定白蛋白，其測定時(shí)間應(yīng)定于1分鐘。對(duì)于速率法，一般用于酶的測定，而酶活力的大小是用反應(yīng)速度來表示，因而要求在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)測定反應(yīng)速率，此時(shí)的反應(yīng)速率不受底物濃度的影響，僅同酶活力大小有關(guān)。因此，測定時(shí)間應(yīng)選在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)。對(duì)于一種物質(zhì)的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其測定時(shí)間也隨之變化，因而對(duì)于特定的試劑和分析方法，應(yīng)先做出反應(yīng)進(jìn)程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時(shí)間。四、 樣品量和試劑量的選擇：對(duì)于不同的全自動(dòng)生化分析儀，其測定所需的反應(yīng)液總量不同。而試劑廠商給出了樣品量和試劑量的最佳比例，根據(jù)比例同時(shí)縮小或增加用量，同時(shí)滿足最小的反應(yīng)液總量。五、 校正點(diǎn)的設(shè)置：對(duì)于多數(shù)項(xiàng)目的測定，其濃度同吸光度變化基本上成線性關(guān)系，選擇低、中、高三個(gè)校正點(diǎn)可獲得滿意的準(zhǔn)確度。如果只設(shè)置一個(gè)校正點(diǎn)，盡量選擇一個(gè)中值校正點(diǎn)。對(duì)于有些物質(zhì)，例如比濁法測定免疫球蛋白，其濃度同吸光度不成線性，因而需要盡可能多設(shè)置不同濃度的校正點(diǎn)。全自動(dòng)生化分析儀的應(yīng)用，提高了檢驗(yàn)質(zhì)量和速度，為臨床作出診斷、決定治療方案、判斷療效和預(yù)后提供了可靠依據(jù)，為了使用好全自動(dòng)生化分析儀，最重要是恰當(dāng)設(shè)置各種分析參數(shù)。隨著分析方法的提高及試劑的更新，分析參數(shù)也隨之變化。六、吸光度限制的設(shè)置：試劑吸光度上下限有的生化儀要求設(shè)置試劑吸光度上下限，主要是用來監(jiān)測試劑的質(zhì)量的，我們?cè)趯?shí)際工作中就遇到酶活力測定的試劑空白數(shù)據(jù)在規(guī)定限值內(nèi)，但質(zhì)控物測定結(jié)果連續(xù)偏低，病人結(jié)果因每天標(biāo)本少而難以判斷，最后發(fā)現(xiàn)是試劑質(zhì)量下降。目前主流的全自動(dòng)生化儀有貝克曼Beckm