血液學(xué)一般檢查概論課件

血液學(xué)一般檢查概論ppt課件第一章血液學(xué)一般檢驗(yàn)龔曉華第一章血液學(xué)一般檢驗(yàn)龔曉華第一節(jié)概論學(xué)習(xí)目標(biāo)1.了解血液的組成、理化性質(zhì)及功能2.掌握血液標(biāo)本的采集及注意事項(xiàng)3.熟悉血液標(biāo)本的送檢、保存與處理4.掌握常用抗凝劑的作用原理及適用范圍5.掌握血涂片的制備及血細(xì)胞染色常用方法和評價(jià)第一節(jié)概論學(xué)習(xí)目標(biāo)一、血液生理概要

（一）血液的組成血液=血細(xì)胞（紅細(xì)胞+白細(xì)胞+血小板）+血漿血清：離體后的血清自然凝固，分離出來的淡黃色透明液體。血漿：血液加抗凝劑后分離出來的淡黃色液體。區(qū)別：血清缺少某些凝血因子，主要是纖維蛋白原。一、血液生理概要

（一）血液的組成血清血漿全血血清血漿全血（二）血液理化性質(zhì)1.血量

血漿量與血細(xì)胞量的總和，成人約4～5L，約占體重的6%～8%，其中血漿占55%,血細(xì)胞占45%。2.顏色紅色，來自紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白

動脈血：鮮紅色

靜脈血：暗紅色

嚴(yán)重貧血者：血液紅色變淺

嚴(yán)重CO或氰化物中毒：櫻紅色

高脂膳食后：血漿呈乳白色

溶血患者：不同程度的紅色（二）血液理化性質(zhì)1.血量3.紅細(xì)胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性循環(huán)血液中的紅細(xì)胞呈均勻混懸狀態(tài)。原因（1）紅細(xì)胞膜表面的唾液酸根帶負(fù)電荷，形成Zeta電位。（2）正常血漿成分，血漿粘度及血流動力學(xué)等的影響。4.粘滯性

取決于血細(xì)胞比容和血漿粘度全血粘度為生理鹽水的4～5倍，

血漿粘度為生理鹽水的1.6倍左右3.紅細(xì)胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性5.比密和滲透濃度比密：血液與同體積水重量之比全血比密：主要取決于所含紅細(xì)胞的百分比和血紅蛋白的量

正常男性:1.055~1.063

正常女性：1.051～1.060血漿比密：1.025～1.030和血漿中的蛋白濃度有關(guān)血細(xì)胞比密：1.090血漿滲透壓：290～310Osm/（Kg.H2O)6.酸堿度正常血液PH值7.35～7.457.凝固性是凝血因子激活的結(jié)果5.比密和滲透濃度（三）血液生理功能1.運(yùn)輸功能2.協(xié)調(diào)功能3.維護(hù)機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定4.防御功能（三）血液生理功能1.運(yùn)輸功能二、血液標(biāo)本的采集、送檢、保存與處理（一）血液標(biāo)本的采集1.靜脈采血法普通采血法真空采血法2.毛細(xì)血管采血法3.動脈采血法動脈血主要用于血?dú)夥治龆?、血液?biāo)本的采集、送檢、保存與處理（一）血液標(biāo)本的采集多采用位于體表的淺靜脈，肘部靜脈——最常用手背靜脈內(nèi)踝靜脈股靜脈小兒可采集頸外靜脈采血部位靜脈采血法多采用位于體表的淺靜脈，采血部位靜脈采血法壓脈帶真空采血裝置真空采血管銳器盒墊巾采血所需耗材消毒液棉棒一次性手套套筒式頭皮靜脈式壓脈帶真空采血裝置真空采血管銳器盒墊巾采血所需耗材消毒液棉棒普通靜脈采血操作方法1.患者取坐位或臥位，準(zhǔn)備合適數(shù)量和規(guī)格的試管備用2.檢查注射器注射器針頭斜面對準(zhǔn)針筒刻度3.選擇靜脈肘部靜脈4.扎壓脈帶采血部位上端捆扎時(shí)間不應(yīng)超過1min握拳5.消毒30g/L碘酊和75%乙醇

從內(nèi)向外、順時(shí)針方向6.穿刺針頭斜面和針筒刻度向上，沿靜脈走向使針頭與皮膚呈30。角斜行快速刺入皮膚，然后以5。角向前穿破靜脈壁進(jìn)入靜脈腔7.抽血緩慢抽動，迅速拔出8.放血與混勻注意要取下注射針頭普通靜脈采血操作方法1.患者取坐位或臥位，準(zhǔn)備合適數(shù)量和規(guī)格普通靜脈采血示意圖普通靜脈采血示意圖真空采血法

又稱負(fù)壓采血法，是將有頭蓋膠塞的采血試管預(yù)先抽成不同的真空度，利用其負(fù)壓自動定量采集靜脈血樣。真空采血裝置有頭皮靜脈式和套筒式兩種優(yōu)點(diǎn)：定位準(zhǔn)確、傳送方便、封閉無菌、標(biāo)識醒目、刻度清晰、容易保存真空采血法

又稱負(fù)壓采血法，是將有頭蓋膠塞的采血凝血檢查血沉血常規(guī)血型化學(xué)檢查葡萄糖耐糖量化學(xué)檢查化學(xué)檢查化學(xué)血型常用彩色真空采血管容器的用途凝血檢查血沉血常規(guī)血型化學(xué)檢查葡萄糖化學(xué)檢查真空采血真空采血毛細(xì)血管采血法1.適用于：需血微量的檢查2.采血部位：耳垂（檢查結(jié)果不夠恒定）或手指

左手中指或無名指指端內(nèi)側(cè)為宜嬰幼兒可選用大趾及足底內(nèi)外側(cè)緣3.采血器材帶刃的三棱針或?qū)Ｓ貌裳?.穿刺深度2～2.5mm毛細(xì)血管采血法1.適用于：需血微量的檢查一次性專用采血針三棱針一次性微量采血吸管微量采血管一次性專用采血針三棱針一次性微量采血吸管微量采血管5.采血順序血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血型鑒定等6.優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：方便快捷缺點(diǎn)：末梢循環(huán)受多種因素影響標(biāo)本混有組織液采血量受限疼痛明顯5.采血順序血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定、白7、注意：①穿刺部位消毒酒精干后方可穿刺②燒傷病人應(yīng)選擇皮膚完整處采血③一人一針7、注意：激光采血儀激光采血儀1、適用：用于血?dú)夥治?、部位：股動脈等3、器材：專用采血器4、注意：采血后立即封閉針頭，避免與空氣接觸，及時(shí)送檢，最好在30分鐘內(nèi)檢測（三）動脈采血法1、適用：用于血?dú)夥治觯ㄈ﹦用}采血法采血質(zhì)量控制要注意影響標(biāo)本質(zhì)量的因素1、患者情況①年齡、性別、種族②活動情況及精神狀態(tài)③采血時(shí)間及體位④服藥或吸煙采血質(zhì)量控制要注意影響標(biāo)本質(zhì)量的因素①操作規(guī)范②勿擠壓皮膚③壓脈帶使用時(shí)間盡量短2、采血壓脈帶使用時(shí)間應(yīng)少于1分鐘建議在針頭穿刺進(jìn)入血管后即可放松壓脈帶①操作規(guī)范2、采血壓脈帶使用時(shí)間應(yīng)少于1分鐘3.避免溶血溶血：指紅細(xì)胞破裂，使血紅蛋白從細(xì)胞內(nèi)溢出的現(xiàn)象3.避免溶血造成溶血的原因▲采血后將血從注射器注入試管，血細(xì)胞受外力而溶血▲采血時(shí)定位或進(jìn)針不準(zhǔn)，針尖在靜脈中探來探去，造成血腫而溶血▲混勻含添加劑的試管時(shí)用力過猛或運(yùn)輸時(shí)動作過大▲從已有血腫的靜脈采血，血樣可能含有已溶血的細(xì)胞；造成溶血的原因▲用壓脈帶時(shí)間過長，引起血管內(nèi)溶血▲血液和抗凝劑比例失調(diào)(血量不足)，由于滲透壓的改變發(fā)生溶血▲靜脈穿刺處用酒精消毒，酒精未干即開始采血▲注射器或盛血容器帶水或容器污染▲注射器和針頭連接不緊，采血時(shí)空氣進(jìn)入，產(chǎn)生泡沫，發(fā)生溶血。▲用壓脈帶時(shí)間過長，引起血管內(nèi)溶血若一側(cè)手臂靜脈輸液時(shí)應(yīng)從對側(cè)手臂取血，以免血液被稀釋或輸入的液體對測定結(jié)果的影響。若二側(cè)手臂同時(shí)進(jìn)行靜脈輸液，應(yīng)選擇輸液穿刺點(diǎn)的遠(yuǎn)心端取血，且避免采血部位距輸液處太近。4.輸液時(shí)采血部位的選擇若一側(cè)手臂靜脈輸液時(shí)應(yīng)從對側(cè)手臂取血，以免血液被稀釋或輸入的（二）血液標(biāo)本的送檢

1.唯一標(biāo)識原則條形碼系統(tǒng)2.生物安全原則專用容器運(yùn)送3.盡快運(yùn)送原則4.接收和拒收標(biāo)本原則（二）血液標(biāo)本的送檢

1.唯一標(biāo)識原則條形碼系統(tǒng)（三）血液標(biāo)本的保存1.血液標(biāo)本的保存CBC應(yīng)在室溫保存需做鏡檢下分類者應(yīng)及早推制血片，因?yàn)?小時(shí)后粒細(xì)胞形態(tài)即有改變，4℃可延長血液貯存期，但會影響PLT和MPV值2.檢測后標(biāo)本的保存根據(jù)標(biāo)本性質(zhì)和要求保存3.標(biāo)本信息的保存（三）血液標(biāo)本的保存1.血液標(biāo)本的保存CBC應(yīng)在室溫（四）檢驗(yàn)后血液標(biāo)本的處理檢驗(yàn)后廢棄的標(biāo)本應(yīng)由專人負(fù)責(zé)處理，用專用的容器或袋子包裝，由專人送到指定的消毒地點(diǎn)集中，一般專門機(jī)構(gòu)采用焚燒的方法處理。（四）檢驗(yàn)后血液標(biāo)本的處理檢驗(yàn)后廢棄的標(biāo)本應(yīng)由專人負(fù)責(zé)處理，三、血液標(biāo)本的抗凝

抗凝：用物理或化學(xué)的方法，除去或抑制血液中某些凝血因子以阻止血液凝固的方法?？鼓齽耗茏柚寡耗痰幕瘜W(xué)試劑三、血液標(biāo)本的抗凝

抗凝：用物理或化學(xué)的方法，除去或抑制血液常用化學(xué)抗凝劑1.枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）濃度：109mmol/L(32g/L)抗凝原理：與血液中的鈣離子形成可溶性螯合物，阻止血液凝固適用于：血栓與止血檢驗(yàn)（1：9）可穩(wěn)定Ⅴ因子和Ⅷ因子；血沉測定（1：4）；因其毒性小，也用于配制血液保存液常用化學(xué)抗凝劑1.枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）2.乙二胺四乙酸鹽（EDTA）EDTA有鈉鹽和鉀鹽，鈉鹽溶解度低于鉀鹽，一般用鉀鹽濃度：1.4～1.6mg/mL血抗凝原理：與血液中的鈣離子形成可溶性螯合物，阻止血液凝固適用于：全血細(xì)胞分析（CBC），血小板計(jì)數(shù)禁忌于：凝血因子與血小板功能檢查2.乙二胺四乙酸鹽（EDTA）3.肝素抗凝原理：抗凝機(jī)制復(fù)雜（1）加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ作用，抑制凝血活酶的形成，（2）抑制血小板聚集與釋放反應(yīng)，從而阻止血液凝固（3）滅活氨基酸蛋白酶，抑制凝血酶的形成適用于：血細(xì)胞比容測定和臨床生化多項(xiàng)檢查禁忌于：凝血功能檢查；

白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)檢查，因?yàn)樗墒拱准?xì)胞聚集并使血涂片染色后產(chǎn)生藍(lán)色背景3.肝素4.草酸鈉與血液中的鈣離子形成草酸鈣沉淀，阻止血液凝固對凝血因子Ⅴ保護(hù)作用差，不適于凝血檢查5.雙草酸鹽抗凝劑草酸鉀使紅細(xì)胞體積縮小，草酸銨是紅細(xì)胞體積增大，兩者以適當(dāng)比例混合，恰好不影響紅細(xì)胞體積和形態(tài)，可用于血細(xì)胞比容、CBC、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等項(xiàng)目檢查。4.草酸鈉四、血涂片的制備一張良好的血涂片，其標(biāo)準(zhǔn)是厚薄適宜、頭體尾分明、細(xì)胞分布均勻、邊緣整齊、兩邊留有空隙四、血涂片的制備一張良好的血涂片，其標(biāo)準(zhǔn)是厚薄適宜、頭體尾分1.載玻片的清潔新購置的載玻片必須用濃度約1mol/LHCL浸泡24h后，再用清水徹底沖洗，干燥后備用。使用載玻片時(shí)，切勿用手觸及表面，以保持玻片清潔、干燥、中性、無油漬1.載玻片的清潔2.血涂片的制備

2.血涂片的制備

影響因素涂片的厚薄與血滴的大小、推片與載片之間的角度、推片時(shí)的速度及血細(xì)胞比容有關(guān)血滴大、角度大、速度快則血膜越厚，反之則血膜越薄血膜分布不均：推片邊緣不齊、用力不均和載玻片不清潔所致血細(xì)胞比容高于正常時(shí)，血液粘度較高，保持小的角度可得到滿意結(jié)果，反之，應(yīng)保持大的角度影響因素涂片的厚薄與血滴的大小、推片與載片之間的角度、推片時(shí)五、血細(xì)胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法1.瑞氏染液的組成酸性染料伊紅（E-）+堿性染料亞甲藍(lán)（M+）

+甲醇伊紅為鈉鹽，染色部分為陰離子；亞甲藍(lán)是氯鹽，染色部分是陽離子。甲醇的作用：（1）溶解伊紅和亞甲藍(lán)（2）固定細(xì)胞形態(tài)優(yōu)點(diǎn)：固定和染色合并在一起，操作簡便，染色時(shí)間短，對白細(xì)胞特異性顆粒著色較好缺點(diǎn)：對細(xì)胞核的著色略差五、血細(xì)胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法2.細(xì)胞的著色原理

是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程。

化學(xué)的親和作用+物理的吸附作用嗜酸性物質(zhì)：細(xì)胞中的堿性物質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合染成

紅色，如：血紅蛋白和嗜酸性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的嗜酸性顆粒嗜堿性物質(zhì)：細(xì)胞中的酸性物質(zhì)，與堿性染料亞甲藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色，如淋巴細(xì)胞胞質(zhì)和嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的嗜堿性顆粒中性物質(zhì)：中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅亞甲藍(lán)均可結(jié)合，染

淡紫紅色細(xì)胞核蛋白染成紫紅色2.細(xì)胞的著色原理是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過紅細(xì)胞的染色原始紅細(xì)胞和早幼紅細(xì)胞：胞質(zhì)和核仁中含有較多的酸性物質(zhì)，故染成濃厚的藍(lán)色中幼紅細(xì)胞：既含有酸性物質(zhì)，又含有堿性物質(zhì)，故染成紅藍(lán)色或灰紅色成熟紅細(xì)胞：只含有堿性物質(zhì)，則被染成粉紅色紅細(xì)胞的染色3.PH對細(xì)胞染色的影響使用PH6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液如環(huán)境PH<PI(PI為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)），則該蛋白質(zhì)帶正電荷，即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易與酸性伊紅結(jié)合，染色偏紅PH>PI:在堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易于亞甲藍(lán)結(jié)合染色偏藍(lán)緩沖液偏酸（PH<6.4):正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，紅細(xì)胞和嗜酸性顆粒偏紅，白細(xì)胞核呈淡藍(lán)色或不著色緩沖液偏堿（PH>6.8)：所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色，顆粒呈深暗；嗜酸性粒細(xì)胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或藍(lán)色；中性顆粒偏粗，染成紫黑色。3.PH對細(xì)胞染色的影響4.瑞氏染液的質(zhì)量評價(jià)（1）血涂片實(shí)際染色評價(jià)（2）吸光度比值（RA）

瑞氏染色的成熟指數(shù)以RA=1.3±0.1為宜新配制的瑞氏染液往往偏堿，染色效果較差，須存放一定時(shí)間，待染液成熟，染液成熟的過程主要是亞甲藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆的過程。在密封條件下，貯存時(shí)間越久，轉(zhuǎn)化的天青B越多，染色效果越好。4.瑞氏染液的質(zhì)量評價(jià)5.染色效果分析（1）血膜外觀呈淡紫紅色