一株對(duì)烷基苯磺酸鈉降解菌的分離鑒定及其降解特性

一株對(duì)烷基苯磺酸鈉降解菌的分離鑒定及其降解特性

直鏈烷基苯磺酸鈉（las）是一種具有良好耐清洗性、潤(rùn)濕性、乳化性和增溶性的陰離子表面活性劑。隨著las的使用范圍和使用量的增加，環(huán)境問題變得越來越受到重視。las可以通過各種方式進(jìn)入天然水域和土壤，造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，對(duì)人類健康和生物產(chǎn)生一定的毒性影響。因此,有關(guān)LAS污染的防治和處理方法的研究成為環(huán)保工作者關(guān)注的焦點(diǎn).目前處理LAS廢水常用的方法有生物法、氧化分解法、泡抹分離法等;其中生物法降解LAS是目前研究最多的一種方法1材料和方法1.11.1.1生物染色劑.所用試劑均為分析純,染色劑為生物染色劑.1.1.2“三自”結(jié)構(gòu)的應(yīng)用MgSO1.1.3培養(yǎng)基和培養(yǎng)基0.3,瓊脂12.0,其它同液體培養(yǎng)基.1.21.2.1LAS采用莧菜紅兩相滴定法1.2.2碳源生長(zhǎng)菌株的分離純化向采自天津市某洗滌劑生產(chǎn)廠的污泥中加入一定量的LAS,反復(fù)馴化幾次,然后在固體培養(yǎng)基平板上劃線分離,挑取生長(zhǎng)旺盛的菌落,經(jīng)過純化,獲得能以LAS為唯一碳源生長(zhǎng)的菌株.1.2.3微生物鑒定儀檢測(cè)根據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》對(duì)細(xì)菌的生理、生化特性進(jìn)行鑒定;送天津市衛(wèi)生防疫站通過VITEK微生物自動(dòng)鑒定儀進(jìn)行鑒定;分子生物學(xué)鑒定則利用細(xì)菌的16SrDNA基因進(jìn)行同源性鑒定1.2.4laslas250mL三角燒瓶中加入適量(除溶解氧實(shí)驗(yàn)外均為50mL)的液體培養(yǎng)基,其中含有一定濃度的LAS(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定),高溫滅菌后接種一定量的LAS1,置于30℃的恒溫?fù)u床中100r/min培養(yǎng),定時(shí)采取水樣考察LAS的降解效果.2結(jié)果與討論2.1試驗(yàn)菌株的選擇分離結(jié)果見圖1.可以看出,對(duì)于所選擇的5個(gè)菌株,菌株LAS1降解LAS的能力相對(duì)較強(qiáng),因此選擇LAS1為試驗(yàn)菌株.2.2las1對(duì)las1生長(zhǎng)的影響根據(jù)細(xì)菌的生理、生化特性及利用VITEK微生物自動(dòng)鑒定儀,鑒定該菌為放射形土壤桿菌(LAS1的生長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果見圖2.LAS濃度為63.9mg/L對(duì)LAS1的生長(zhǎng)比較有利,此時(shí)LAS的降解效率也比較高,濃度過低或過高都不利于LAS1的生長(zhǎng),且濃度過高會(huì)抑制LAS1的生長(zhǎng),這與許多文獻(xiàn)報(bào)道LAS會(huì)對(duì)生物生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制是相一致的.2.3las12.3.1生長(zhǎng)溫度的確定在不同溫度(20℃、30℃、35℃和40℃)下100r/min將接種一定量LAS1的液體培養(yǎng)基恒溫培養(yǎng)24h,然后定量測(cè)定LAS的降解濃度.結(jié)果見圖3-A,LAS1的最佳生長(zhǎng)溫度為30℃.2.3.2las降解濃度測(cè)定在pH值分別為3.0、5.2、6.0、7.1、8.1和10.0的液體培養(yǎng)基中分別接種等量的LAS1,30℃100r/min培養(yǎng)24h,然后定量測(cè)定LAS的降解濃度.結(jié)果見圖3-B.2.3.3培養(yǎng)基體積對(duì)las降解效果的影響氧含量對(duì)LAS1降解LAS能力的影響主要是通過調(diào)節(jié)在250mL三角燒瓶中液體培養(yǎng)基的體積來實(shí)現(xiàn)的,并控制相同的搖速.結(jié)果見圖3-C.在所研究的培養(yǎng)基體積范圍內(nèi),LAS降解效果的變化并不明顯,同時(shí)進(jìn)行的靜止培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)也證明存在一定程度的LAS降解,這表明LAS1降解LAS需要氧,但并不是非常苛刻.2.3.4各氮源對(duì)las降解的影響主要是考察不同濃度的無機(jī)氮(氯化銨)和有機(jī)氮(蛋白胨)對(duì)LAS1降解LAS能力的影響.結(jié)果見圖3-D和3-E.對(duì)比圖3-D與3-E的結(jié)果,無機(jī)氮可以促進(jìn)LAS的降解,而有機(jī)氮?jiǎng)t對(duì)LAS的降解產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用,這主要是因?yàn)橛袡C(jī)氮在提供氮源的同時(shí)也提供了較LAS更容易同化的碳源,對(duì)LAS的降解產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用.2.3.5las液體培養(yǎng)基對(duì)las1降解能力的影響LAS會(huì)對(duì)水生生物的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用,因此進(jìn)行LAS1對(duì)LAS的耐受能力的研究是非常必要的.配制一系列的含不同濃度的LAS液體培養(yǎng)基,接種相同量的LAS1,觀察LAS的降解效果.結(jié)果見圖3-F.LAS對(duì)LAS1降解能力的影響是非常明顯的,當(dāng)LAS濃度達(dá)到300mg/L時(shí)幾乎完全受到抑制,但通過逐步的誘導(dǎo)、馴化,可以使其耐受能力有一定程度的提高.2.3.6降解曲對(duì)動(dòng)力學(xué)曲線擬合的測(cè)定配制一系列濃度完全一致的LAS液體培養(yǎng)基,接種相同量的LAS1進(jìn)行培養(yǎng),一定時(shí)間間隔取出樣品測(cè)定LAS的濃度,并繪制降解曲對(duì)動(dòng)力學(xué)曲線線性擬合:1/=0.9893las對(duì)土壤桿菌的影響