PCR實(shí)驗(yàn)室可開(kāi)展項(xiàng)目

PCR第一篇：PCR試驗(yàn)室可開(kāi)展工程基因擴(kuò)增試驗(yàn)又稱(chēng)PCR試驗(yàn)，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物學(xué)爭(zhēng)論和試驗(yàn)的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，如：檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病，癌基因的檢測(cè)和診斷，DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒別及法醫(yī)物證，動(dòng)、植物檢疫，動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè)，動(dòng)物飼料、扮裝品、食品衛(wèi)生檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等?；驍U(kuò)增試驗(yàn)室又稱(chēng)PCR試驗(yàn)室，試驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域，前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。試驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑預(yù)備區(qū)→樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流淌。試驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流淌。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間，工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室，并有明顯的標(biāo)志，各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間假設(shè)是嚴(yán)密相連，需安裝物品傳遞窗。每個(gè)工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈，紫外燈254nm20m240W試驗(yàn)室較為抱負(fù)的布局模式為有一個(gè)專(zhuān)用走廊，試劑預(yù)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很標(biāo)準(zhǔn)地排列在一起，前三個(gè)區(qū)各有一個(gè)緩沖間，可供換工作服和工作鞋使用，頂上可裝一紫外燈。內(nèi)試驗(yàn)區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài)，緩沖間內(nèi)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)〔可上設(shè)一抽風(fēng)裝置〕，使這三個(gè)區(qū)的空氣流向?yàn)橛稍囼?yàn)區(qū)域內(nèi)向外，緩沖間內(nèi)通向內(nèi)試驗(yàn)室和走廊的門(mén)可安裝一種連鎖裝置，當(dāng)一個(gè)門(mén)翻開(kāi)時(shí)，另一門(mén)必需處于關(guān)閉狀態(tài)，防止消滅兩個(gè)門(mén)同時(shí)翻開(kāi)的狀況。產(chǎn)物分析區(qū)可不設(shè)緩沖間，但應(yīng)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)〔裝一個(gè)排風(fēng)扇即可〕，使空氣流向由外向內(nèi)，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物的隨空氣流出。每一區(qū)域都須有明確的標(biāo)記，工作按試劑預(yù)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)至產(chǎn)物分析區(qū)單一流向進(jìn)展，各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋、試驗(yàn)記錄本和筆等都必需專(zhuān)用。假設(shè)無(wú)法作到以上模式，以下根本要求必需做到：1、四個(gè)區(qū)域必需是相互獨(dú)立的；2、各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必需是專(zhuān)用的；3、各區(qū)完全獨(dú)立，緩沖間可有可無(wú)。如為一個(gè)區(qū)套一個(gè)區(qū)的模式，區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作服及鞋子用，并保證兩個(gè)區(qū)域間始終處于完全的分隔狀態(tài)；4、產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風(fēng)扇或其它抽風(fēng)裝置，維持負(fù)壓。試驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力把握各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的試驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避開(kāi)試驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)試驗(yàn)過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。PCR試驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避開(kāi)各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域間穿插污染的可能性，宜承受全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格把握送、排風(fēng)的比例以保證各試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。試驗(yàn)室裝修試驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)構(gòu)造結(jié)實(shí)、氣密性好；全部陰角宜承受圓弧形線條過(guò)渡；墻體內(nèi)壁光滑、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿(mǎn)足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光滑、耐腐蝕的要求。其次篇：PCR試驗(yàn)室簡(jiǎn)介Pcr試驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增試驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒错?PolymeraseChainReaction放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特別DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)，能快速把握患者體內(nèi)的病毒含量，其準(zhǔn)確度高達(dá)納米級(jí)別，準(zhǔn)確檢測(cè)乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否特別轉(zhuǎn)變能準(zhǔn)時(shí)推斷病人最適合使用哪類(lèi)抗病毒藥物、推斷藥物療效如何、給臨床治療提供了牢靠的檢驗(yàn)依據(jù)條件1PCR熒光試驗(yàn)室;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996AppliedBiosystems公司推出由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用。本文試就其定量原理、方法及參照問(wèn)題作一介紹2、檢測(cè)設(shè)備必需符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光試驗(yàn)室設(shè)置要求;熒光定量PCR儀+實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA3、必需通過(guò)國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心的驗(yàn)收和認(rèn)證;4、檢測(cè)人員必需通過(guò)國(guó)家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書(shū);PCR試驗(yàn)室內(nèi)工作人員必需參與由國(guó)家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗(yàn)中心舉辦的臨床基因擴(kuò)增培訓(xùn)班，并持證上崗。PCR試驗(yàn)室通過(guò)驗(yàn)收，試驗(yàn)室至少必需應(yīng)有兩個(gè)以上持有“臨床基因檢測(cè)上崗證”。PCR試驗(yàn)室必需建立嚴(yán)格的試驗(yàn)室治理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序〔SOP〕、建立系列質(zhì)量治理文件等，確保試驗(yàn)室日常運(yùn)行符合國(guó)家衛(wèi)生部的要求，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、確保試驗(yàn)室衛(wèi)生安全，確保試驗(yàn)室長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行5、必需在無(wú)菌無(wú)塵環(huán)境下進(jìn)展操作功能能夠?qū)颊卟∏檫M(jìn)展科學(xué)、準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)的掌控，并結(jié)合抗HBV與T細(xì)胞免疫來(lái)打破免疫耐受，阻斷肝病病毒復(fù)制的療法、有效的分解肝炎病毒，解決了乙肝病毒易變異、耐藥，病毒復(fù)制模板難以治療，人體免疫耐受狀態(tài)不易打破等醫(yī)學(xué)難題，能快速消退臨床病癥，而且有效抑制乙肝病毒復(fù)制，明顯加快e抗原、抗體的血清轉(zhuǎn)換速度，殺滅血液及肝細(xì)胞內(nèi)的病毒，為防止再感染供給了長(zhǎng)期保護(hù)，有效阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化、肝硬化進(jìn)程。建立方法1、建立樣品預(yù)備區(qū)這個(gè)區(qū)域特地用作樣品的預(yù)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)當(dāng)實(shí)行預(yù)防措施：⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。⑵組織培育物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品預(yù)備間處理，以依據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作一般分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應(yīng)當(dāng)用有特地的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)當(dāng)用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。⑹管子翻開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以削減氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開(kāi)，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。⑺任何時(shí)候都應(yīng)當(dāng)穿試驗(yàn)服和帶手套，手套要常常更換，尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。試驗(yàn)服要特地用于樣品預(yù)備間，常常清洗。2、樣品預(yù)備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的時(shí)機(jī)。為了避開(kāi)這一問(wèn)題，反轉(zhuǎn)錄RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。3PCR該去特地用于預(yù)備各種反響，這個(gè)區(qū)域必需保持干凈，而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品預(yù)備的污染。前PCR區(qū)必需要有試劑和預(yù)備，特別是PCR4、PCR⑴所用的全部溶液都應(yīng)當(dāng)沒(méi)有核酸和〔或〕核酸酶〔 DNase和RNase〕污染。⑵全部PCR試劑中使用的水都應(yīng)當(dāng)是高質(zhì)量的－穎蒸餾的去離子水，用0.22μm過(guò)濾的，并且是高壓滅菌。⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類(lèi)的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中參與0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反響。⑷所用試劑都應(yīng)當(dāng)以大體積配制，試驗(yàn)一下看試劑是否滿(mǎn)足，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)展貯存。⑸全部試劑和樣品預(yù)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。⑹配制的試劑在用于預(yù)備的標(biāo)本之前應(yīng)當(dāng)加以檢驗(yàn)。⑺樣品預(yù)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)當(dāng)留神保存。5PCRPCR⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在試驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。⑵假設(shè)你的試驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括全部試劑的單一反響混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個(gè)規(guī)章，應(yīng)當(dāng)保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性比照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和干凈程度。而且，你也期望通過(guò)使用一個(gè)的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性比照顧當(dāng)包括核酸以外的全部試劑。⑸當(dāng)做陽(yáng)性比照時(shí)，有兩個(gè)理由打算了應(yīng)當(dāng)使用最少數(shù)量的核酸。⑹由于必需有比照反響，比照模板的特點(diǎn)應(yīng)當(dāng)予以考慮。6、把握污染的方法。已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消退一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消退由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種把握污染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消退污染問(wèn)題，但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。7、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)當(dāng)留出一個(gè)特地用于反響后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必需是特地用于這一目的，決不能把試驗(yàn)室PCR第三篇：PCR試驗(yàn)室高端PCR試驗(yàn)室把握設(shè)計(jì)說(shuō)明PCR試驗(yàn)室即分子生物學(xué)試驗(yàn)室，在醫(yī)療、科研、生物技術(shù)方面得到廣泛的應(yīng)用。因其在不同行業(yè)的應(yīng)用各有區(qū)分，在具體設(shè)計(jì)時(shí)也有不同之處，就醫(yī)療機(jī)構(gòu)的應(yīng)用而言，主要使用三區(qū)或四區(qū)設(shè)計(jì)，即試劑預(yù)備區(qū)、樣品提取區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)；此類(lèi)三區(qū)設(shè)計(jì)時(shí)候應(yīng)用于類(lèi)似熒光定量型或同類(lèi)PCR分析設(shè)備，及擴(kuò)增與分析過(guò)程在設(shè)備內(nèi)一次完成。而四區(qū)設(shè)計(jì)在三區(qū)的根底上講擴(kuò)增分析區(qū)拆分為擴(kuò)增區(qū)與分析pcr在PCR試驗(yàn)的設(shè)計(jì)上，經(jīng)過(guò)多年的閱歷累積，已經(jīng)在一些關(guān)鍵技PCRDNA與RNA片段過(guò)于微小，以至于可以穿透高效過(guò)濾器，所以在試驗(yàn)室設(shè)計(jì)上已經(jīng)不在強(qiáng)制要求設(shè)計(jì)高效凈化系統(tǒng)，但是為了提高試驗(yàn)環(huán)境水平及保護(hù)試驗(yàn)室內(nèi)的敖貴設(shè)備方面，假設(shè)在具備條件的狀況下可考慮追加高效空氣凈化PCRDNARNA污染是始終以來(lái)PCR試驗(yàn)的重點(diǎn)問(wèn)題。此類(lèi)污染主要至上次試驗(yàn)中所產(chǎn)生的基因片段對(duì)下次試驗(yàn)產(chǎn)生的污染，而且一旦試驗(yàn)環(huán)境中的污染形成后很難處理。由于消毒等傳統(tǒng)方式對(duì)于基因污染沒(méi)有很良好的效果。所以在PCR試驗(yàn)室設(shè)計(jì)中一般將整套試驗(yàn)室設(shè)計(jì)為全風(fēng)型試驗(yàn)室，這樣而已通過(guò)有效的換氣次數(shù)來(lái)到達(dá)凈化室內(nèi)污染的作用。而在把握方面也有很多不同之處，由于各單位對(duì)PCR試驗(yàn)的重視程度各有不同，所以在設(shè)計(jì)上也有不同，主要的把握設(shè)計(jì)有定送定排式壓力控制系統(tǒng)、變送定排式壓力把握系統(tǒng)變送變排式壓力把握系統(tǒng)。在把握設(shè)備方面也有很多區(qū)分如壓力無(wú)關(guān)型把握系統(tǒng)、壓力有關(guān)型把握系統(tǒng)。依據(jù)業(yè)主要求，本PCR試驗(yàn)室為三區(qū)設(shè)計(jì)，各區(qū)可獨(dú)立使用，不設(shè)置高效過(guò)濾系統(tǒng)等相關(guān)要求，依據(jù)業(yè)主以上要求，我方給出的設(shè)計(jì)方案為壓力無(wú)關(guān)型變送變排壓力把握系統(tǒng)。本系統(tǒng)的特點(diǎn)是，設(shè)備啟動(dòng)后可依據(jù)試驗(yàn)室內(nèi)使用節(jié)點(diǎn)調(diào)整送風(fēng)量及排風(fēng)量來(lái)把握各房間狀態(tài)，系統(tǒng)說(shuō)明見(jiàn)以以下圖每個(gè)房間可分別把握，使用時(shí)通過(guò)房間開(kāi)關(guān)輸出啟動(dòng)信號(hào)，當(dāng)設(shè)備接到啟動(dòng)信號(hào)時(shí)設(shè)備運(yùn)行，運(yùn)行中依據(jù)管道壓力反響打算變頻器大小，房間內(nèi)送排風(fēng)量由壓力無(wú)關(guān)型風(fēng)量調(diào)整閥把握。當(dāng)有多個(gè)房間開(kāi)啟或關(guān)閉時(shí)，設(shè)備更加管道壓力反響，調(diào)整設(shè)備變頻器增加或減少送排風(fēng)量來(lái)穩(wěn)定管道壓力。各房間內(nèi)壓力又房間內(nèi)的壓力無(wú)關(guān)型定風(fēng)量閥進(jìn)展把握。當(dāng)BSC〔生物安全柜，B2全排〕開(kāi)啟時(shí)BSC專(zhuān)用供風(fēng)機(jī)組運(yùn)行，BSC-供風(fēng)機(jī)-排風(fēng)機(jī)連鎖運(yùn)轉(zhuǎn)。當(dāng)BSC做變風(fēng)量調(diào)整時(shí)，依據(jù)房間內(nèi)壓力變化，BSC專(zhuān)用供風(fēng)機(jī)組前安裝的壓力無(wú)關(guān)型變風(fēng)量調(diào)整閥依據(jù)壓力變化增減送風(fēng)量，確保房間壓力執(zhí)行在可控范圍內(nèi)。當(dāng)房間不適用時(shí)，房間與緩沖間均關(guān)閉電動(dòng)密閉閥，確保房間處在密閉狀態(tài)避開(kāi)布朗運(yùn)動(dòng)造成的可能污染風(fēng)險(xiǎn)。房間換氣次數(shù)均依據(jù)確定凈化標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)，當(dāng)室內(nèi)污染發(fā)生時(shí)，通過(guò)確定時(shí)間的換氣處理后，污染問(wèn)題可以根本解決。本系統(tǒng)假設(shè)業(yè)主需要，可在室內(nèi)送風(fēng)口末端加裝高效過(guò)濾設(shè)備，房間可升級(jí)為凈化型試驗(yàn)室。壓力無(wú)關(guān)型風(fēng)閥簡(jiǎn)介：壓力無(wú)關(guān)型風(fēng)閥的特點(diǎn)是不會(huì)依據(jù)管道壓力的變化而影響風(fēng)閥內(nèi)部的送風(fēng)量，在確定管道壓力區(qū)間內(nèi)能夠自行調(diào)整閥體阻力，來(lái)穩(wěn)定送風(fēng)量，是高端試驗(yàn)室必備的關(guān)鍵部件，目前此類(lèi)閥體技術(shù)均有國(guó)外生產(chǎn)廠家把握，目前國(guó)內(nèi)主用使用的產(chǎn)品有妥思、文丘里、西門(mén)子等品牌。第四篇：PCR試驗(yàn)室說(shuō)明PCRPCR試驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域，進(jìn)入各工作區(qū)域必需嚴(yán)格依據(jù)單一方向進(jìn)展，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服〔例如不同的顏色〕。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出，四區(qū)域分別為：1.試劑配制區(qū)n2n3.n4n如使用全自動(dòng)，區(qū)域可適當(dāng)合并,三四區(qū)可合并為擴(kuò)增產(chǎn)物分析。各區(qū)的功能是：1.1.1試劑預(yù)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。1.1.2樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。 1.1.3擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定、結(jié)果分析、登記及報(bào)告。1.2擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)，須使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔。1.3使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)展少量試劑配制。在滿(mǎn)足以下操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑預(yù)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：1.4.1在生物安全柜內(nèi)操作。1.4.2每個(gè)試驗(yàn)人員、試驗(yàn)組分別使用各自的試劑及耗材。1.4.3盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。1.4.4用有效的方法對(duì)操作區(qū)域和共享器具在試驗(yàn)前后進(jìn)展清潔及消毒。設(shè)計(jì)要求：PCR試驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式,現(xiàn)要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR試驗(yàn)，通常應(yīng)經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個(gè)試驗(yàn)過(guò)程，假設(shè)試驗(yàn)工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過(guò)程。一、分散形式PCR試驗(yàn)室所謂分散形式PCR試驗(yàn)室，是指完成上述試驗(yàn)過(guò)程的試驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。對(duì)于這種布置形式的PCR試驗(yàn)室，由于各個(gè)試驗(yàn)之間不易相互干擾，因此無(wú)需特別條件要求。二、組合形式PCR試驗(yàn)室所謂組合形式PCR試驗(yàn)室,是指完成PCR四個(gè)試驗(yàn)過(guò)程的試驗(yàn)用房相鄰布置，組成獨(dú)立試驗(yàn)區(qū)域的形式。對(duì)于組合形式PCR試驗(yàn)室，由于各個(gè)試驗(yàn)間集中布置，簡(jiǎn)潔造成相互干擾，因此，對(duì)總體布局以及屏障系統(tǒng)具有確定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間，以削減室內(nèi)外空氣交換。試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染,可以通過(guò)把握進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量到達(dá)正壓效果。核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓，以防含核酸的氣溶膠集中出去污染試劑與樣品，可以通過(guò)把握排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量到達(dá)負(fù)壓效果。在抱負(fù)狀況下，PCR試驗(yàn)室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。PCR試驗(yàn)室進(jìn)風(fēng)由原有中心空調(diào)把握，要求將中心空調(diào)風(fēng)口安裝2600mm假設(shè)使用熒光PCR儀，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并。假設(shè)房間進(jìn)深允許，可設(shè)PCR內(nèi)部專(zhuān)用走廊。需要指出的是在削減室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專(zhuān)用走廊更有意義。各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的試驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避開(kāi)試驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)試驗(yàn)過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。試驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)構(gòu)造結(jié)實(shí)、氣密性好；全部陰角宜承受圓弧形線條過(guò)渡；墻體內(nèi)壁光滑、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿(mǎn)足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光滑、耐腐蝕的要求。假設(shè)使用熒光PCR儀，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并。假設(shè)房間進(jìn)深允許，可設(shè)PCR內(nèi)部專(zhuān)用走廊。需要指出的是在削減室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專(zhuān)用走廊更有意義。各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的試驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避開(kāi)試驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)試驗(yàn)過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。試驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)構(gòu)造結(jié)實(shí)、氣密性好；全部陰角宜承受圓弧形線條過(guò)渡；墻體內(nèi)壁光滑、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿(mǎn)足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光滑、耐腐蝕的要求。主要設(shè)備試劑預(yù)備區(qū)儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺(tái)、加樣器、混勻器、天平和離心機(jī)等，加樣器、天平除了要專(zhuān)用外，還應(yīng)有定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈臺(tái)中進(jìn)展擴(kuò)增反響混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級(jí)的，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測(cè)試劑的擴(kuò)增效果。標(biāo)本制備區(qū)儀器設(shè)備主要有生物安全柜、加樣器、離心機(jī)、溫育儀、混勻器等擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超凈臺(tái)、微量加樣器、離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈。擴(kuò)增儀需進(jìn)展校準(zhǔn)。并配備UPS電源，以防止由于電壓的波動(dòng)，停電對(duì)擴(kuò)增效果的影響。分析區(qū)本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等干凈試驗(yàn)區(qū)的緩沖間局部面積不能超過(guò)主試驗(yàn)室的八分之一,這是有規(guī)定的.1、主體構(gòu)造：主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)全部陰角、陽(yáng)角均承受鋁合金50內(nèi)圓角鋁，從而解決簡(jiǎn)潔污染、積塵、不易清掃等問(wèn)題。構(gòu)造結(jié)實(shí)，線條簡(jiǎn)明，美觀大方，密封性好。2、標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)整：將PCR過(guò)程分成試劑預(yù)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物分析四個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)區(qū)。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時(shí)各區(qū)通過(guò)氣壓調(diào)整，使整個(gè)PCR試驗(yàn)過(guò)程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染?？煞_(kāi)緩沖區(qū)Ⅰ，緩沖區(qū)Ⅱ和PCR擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣，在試驗(yàn)區(qū)的外墻上和各扇門(mén)上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過(guò)回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。3、消毒：在三個(gè)試驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑預(yù)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外線燈，對(duì)試驗(yàn)桌進(jìn)展局部消毒。4、不銹鋼傳遞窗：試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖不銹鋼〔不建議使用電子連鎖方式〕傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染〔人物分流〕。5、地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進(jìn)展清掃，耐腐蝕。6、照明燈具要選用凈化燈具，能到達(dá)便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。在建設(shè)的過(guò)程中應(yīng)留意：●標(biāo)準(zhǔn)的安裝流程和全面的效勞流程?！駠?yán)格依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程?！癜惭b前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進(jìn)線位置，網(wǎng)絡(luò)線進(jìn)線位置，進(jìn)水水壓，最小安裝空間，地面平坦度，通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管的位置等，抱負(fù)狀態(tài)三、工作區(qū)域及設(shè)備要求〔一〕試劑儲(chǔ)存和預(yù)備區(qū)1、2-8C和-15C冰箱2、混勻器3、微量加樣器〔1-1000ul〕4、移動(dòng)紫外燈〔近工作臺(tái)面〕5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭〔帶濾心〕6、專(zhuān)用工作服和工作鞋7、專(zhuān)用辦公用品〔二〕標(biāo)本制備區(qū)1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)3、混允器4、水浴箱或加熱模塊5、微量加樣器〔1-1000ul〕6、可移動(dòng)紫外燈〔近工作臺(tái)面〕7、生物安全柜8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭〔帶濾心〕9、專(zhuān)用工作服和工作鞋10、專(zhuān)用辦公用品如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀?！踩硵U(kuò)增反響混合物配制和擴(kuò)增區(qū)1、核酸擴(kuò)增儀2、微量加樣器〔1-1000ul〕3、可移動(dòng)紫外燈〔近工作臺(tái)面〕4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭〔帶濾心〕5、專(zhuān)用工作服和工作鞋6、專(zhuān)用辦公用品(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗(yàn)方法不同而定。根本儀器設(shè)備如下：1、微量加樣器〔1-1000ul〕2、可移動(dòng)紫外燈〔近工作臺(tái)面〕3、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭〔帶濾心〕4、專(zhuān)用工作服和工作鞋5、專(zhuān)用辦公用品5.人員和樣品的安全是由生物安全柜和定向氣流共同來(lái)保證。PCR試驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)程中規(guī)定人員和樣品必需單向流淌。即從“試劑預(yù)備區(qū)到樣品制備區(qū)，再?gòu)臉悠分苽渥呦驍U(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)”，確定不能反向流淌，以辟免穿插污染。氣流方向只規(guī)定試劑預(yù)備區(qū)為微正壓或常壓，樣品制備區(qū)為常壓或負(fù)壓，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)為負(fù)壓，壓力梯度是從試劑預(yù)備到產(chǎn)物分析區(qū)，是高到低的。規(guī)程并沒(méi)有規(guī)定要做成全風(fēng)系統(tǒng)，但是為降低穿插污染的風(fēng)險(xiǎn)，建議做成全風(fēng)系統(tǒng)。概述臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)又稱(chēng)PCR試驗(yàn)，是特地用來(lái)檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測(cè)手段。它可以通過(guò)將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)展擴(kuò)增的方法，測(cè)出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測(cè)方法可以測(cè)出一般檢驗(yàn)難以檢測(cè)出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對(duì)樣品要求低等優(yōu)點(diǎn)，因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測(cè)部門(mén)的禽疫病診斷。但是，這種試驗(yàn)需要有能保證確定安全、配置合理的試驗(yàn)室和格外標(biāo)準(zhǔn)的操作為前提。近年來(lái)對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的建設(shè)越來(lái)越得到重視，由于它對(duì)檢測(cè)結(jié)果的牢靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。本文主要從臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的平面布局，空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣流把握和污染的防制幾個(gè)方面對(duì)試驗(yàn)室設(shè)計(jì)中的主要特點(diǎn)進(jìn)展了闡述。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避開(kāi)污染。因此，試驗(yàn)室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣流把握等都是圍繞這個(gè)核心問(wèn)題進(jìn)展的。下面就對(duì)這幾個(gè)方面分別進(jìn)說(shuō)明。2PCR試驗(yàn)室平面布局臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和預(yù)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反響混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免穿插污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必需嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)展，即只能從試劑貯存和預(yù)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反響混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各試驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)展。PCR1所示。圖1PCR試驗(yàn)室平面布置示意圖3試驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力把握PCR試驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避開(kāi)各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域間穿插污染的可能性，宜承受全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格把握送、排風(fēng)的比例以保證各試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。3.1試劑貯存和預(yù)備區(qū)該試驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)展的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反響混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必需貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對(duì)與氣流壓3.2標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)展的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其參與至擴(kuò)增反響管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员荛_(kāi)從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避開(kāi)在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。3.3擴(kuò)增反響混合物配制和擴(kuò)增區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)展的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的參與和主反響混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反響混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)展。在巢式PCR測(cè)定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必需翻開(kāi)反響管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危急性，其次次加樣必需在本區(qū)內(nèi)進(jìn)展。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避開(kāi)氣溶膠從本區(qū)漏出。為避開(kāi)氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量削減在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)展。3.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)展的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。如使用全自動(dòng)封閉器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避開(kāi)擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)集中至其它區(qū)域。4污染的預(yù)防與把握PCR試驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避開(kāi)污染。在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；自然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，試驗(yàn)就必需停頓，直到找到污染源為止，而且試驗(yàn)結(jié)果必需作廢，需重進(jìn)展實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再?lài)@試驗(yàn)室來(lái)查找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，鋪張人力物力。因此要避開(kāi)污染，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排解。4.1工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分〔1〕各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域設(shè)置合理；〔2〕各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記〔如醒目的門(mén)牌或不同的地面顏色等〕，以避開(kāi)各個(gè)不同試驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2合理的系統(tǒng)設(shè)置〔1〕合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量承受全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；〔2〕嚴(yán)格的氣流壓力把握，保證不同的試驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。4.3標(biāo)準(zhǔn)的操作〔1〕臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室的技術(shù)人員必需進(jìn)展上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作；〔2〕在試驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必需戴手套，并常常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施；〔3〕清潔工作準(zhǔn)時(shí)、正確。試驗(yàn)工作完畢后，必需馬上對(duì)本區(qū)進(jìn)展清潔。除常規(guī)的消毒液體對(duì)外表進(jìn)展擦拭消毒或紫外線燈的照耀消毒外，對(duì)一些試驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)展高壓消毒處理。4.4嚴(yán)格的治理〔1〕嚴(yán)格把握進(jìn)出試驗(yàn)室的人員。與試驗(yàn)無(wú)關(guān)的人員不得任憑進(jìn)出試驗(yàn)室，有條件的狀況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)試驗(yàn)區(qū)的門(mén)；〔2〕在各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域使用帶有明顯區(qū)分標(biāo)志的工作服〔如不同顏色〕，當(dāng)工作人員離開(kāi)時(shí)不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域；〔3〕盡量削減在試驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以削減穿插污染的可能性?！?〕擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，廢液不能在試驗(yàn)室中傾倒，必需經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離試驗(yàn)室的地方棄掉，用過(guò)的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如燃燒等；〔5〕擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，4.5完備的試驗(yàn)室配套設(shè)施完備的試驗(yàn)室配套設(shè)施是保證明驗(yàn)工作的必要條件，應(yīng)依據(jù)各個(gè)試驗(yàn)室試驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、加樣器等。PCR試驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避開(kāi)各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域間穿插污染的可能性，宜承受全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格把握送、排風(fēng)的比例以保證各試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。3.1試劑貯存和預(yù)備區(qū)該試驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)展的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反響混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必需貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對(duì)與氣流壓力的把握，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。3.2標(biāo)本制備區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)展的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸 (RNA、DNA)提取、貯存及其參與至擴(kuò)增反響管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避開(kāi)從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能