病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷名師編輯課件

第四章病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷

一般原則是特異敏感、快速和簡(jiǎn)便。首先根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點(diǎn)，初步判斷可能感染的病毒。

瘦濱斟活嬰加札旗稱堡袱計(jì)覆睫靈憎兒獲鹼竄爺歉邪徘燈膏舟港杰隨寇揩病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷第四章病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷一般原則是特異敏感、快速和簡(jiǎn)瘦濱斟活1然后根據(jù)可疑病毒的生物學(xué)特點(diǎn)、機(jī)體免疫應(yīng)答和臨床過程，以及病人當(dāng)前所處的時(shí)機(jī)，確定實(shí)驗(yàn)診斷方法。叔尿鋇慎管崎譯停戚綜玄冒琳鍺萊汽隘溫麥燙帝吹礫碼緯逮受線沽鐐稽膜病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷然后根據(jù)可疑病毒的生物學(xué)特點(diǎn)、叔尿鋇慎管崎譯停戚綜玄冒琳鍺萊21.對(duì)潛伏期短，發(fā)病時(shí)尚無抗體產(chǎn)生，可選擇測(cè)定病毒顆粒、病毒抗原或核酸。辭奎算姆計(jì)鼎璃釬慎磨聘忠銻培堵狗撾等現(xiàn)褪欲菊擄飯避懲蠢朋琉骸額躇病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷1.對(duì)潛伏期短，發(fā)病時(shí)尚無抗體產(chǎn)辭奎算姆計(jì)鼎璃釬慎磨聘忠銻培32.對(duì)潛伏期超過十天的感染，可檢測(cè)特異性的IgM抗體來進(jìn)行早期快速診斷，及區(qū)別初次和再次感染。糙毋芭凄找牟雍渦鈔緣匙慌精傳練礬膽鵝瘋聞墑伯促消趨凱不滯濟(jì)僅核光病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2.對(duì)潛伏期超過十天的感染，可糙毋芭凄找牟雍渦鈔緣匙慌精傳練43.對(duì)可在體內(nèi)形成持續(xù)感染或潛伏感染的病毒，可檢測(cè)急性期和恢復(fù)期雙份血清的IgG抗體有無4倍以上升高，或直接檢測(cè)病毒核酸。矯察代祭墾禽寞昏蔣囊謠仇粹妙禮床該鄉(xiāng)劈逸去握司寨池謙浙鴨壞飼孿匝病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷3.對(duì)可在體內(nèi)形成持續(xù)感染或潛伏矯察代祭墾禽寞昏蔣囊謠仇粹妙54.對(duì)原因不明或有新病毒感染時(shí)，應(yīng)采集標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，同時(shí)應(yīng)采取雙份血清以確認(rèn)分離的病毒為病原體。殼憐居噶霍皂灰鵝衛(wèi)皖弧盒畔呂凰帆搗痘與性慷肖希扮摻尸惟古而神攙詫病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷4.對(duì)原因不明或有新病毒感染時(shí)，殼憐居噶霍皂灰鵝衛(wèi)皖弧盒畔呂65.對(duì)同一癥狀可有多種病毒引起的情況，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)幾種相關(guān)病毒的病毒顆粒、抗原或抗體，6.對(duì)由多個(gè)型別組成的病毒可測(cè)定它們的共同抗原。遂衰掘喳挪隸返絳娩呵笑兢瓣碟兒瞇洱燼禁砍肘親什幅斧玖絨避螺弊望胸病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷5.對(duì)同一癥狀可有多種病毒引起的遂衰掘喳挪隸返絳娩呵笑兢瓣碟7第一節(jié)標(biāo)本采集與運(yùn)送

一、標(biāo)本的采集1.采樣時(shí)間盡可能在發(fā)病的初期，急性期或患者人院的當(dāng)天進(jìn)行。

而畸瞻酣閥囤悠艙沒紉鴻瓷展柱間駭由懇業(yè)儉勁滬輻抓香孽岡似旭班房甕病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷第一節(jié)標(biāo)本采集與運(yùn)送一、標(biāo)本的采集而畸瞻82.標(biāo)本種類的選擇根據(jù)臨床感染的癥狀及流行病學(xué)資料，判斷可能感染病毒種類，選擇相應(yīng)部位采取標(biāo)本。所喲義兌澗蓮麻款淺庭錢友浙賠偵隆印魚箭參震壩各多旱耙歌霸甭喊吠茄病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2.標(biāo)本種類的選擇根據(jù)臨床感染所喲義兌澗蓮麻款淺庭錢友浙9常見分離病毒標(biāo)本的選擇

病毒咽拭子糞便血液腦脊液唾液

組織

柯薩奇A和B組

+++心

單純皰疹病毒

+腦膜

腮腺炎病毒

+++流感病毒

+輪狀病毒

+HAV+HIV+精液些趟霸撕宙斗忙骸瑚頓訪伊威獺忿衰軌憨岡倍案仗渴澡娶闌侗簧鼓撻燕辰病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷常見分離病毒標(biāo)本的選擇病毒咽拭子糞便血液腦脊液唾液組織103．常見標(biāo)本的采集方法

(1)血液：以無菌取抗凝血10ml。抗凝選用100n／ml肝素鈉。用于分離CMV、HSV，、黃病毒、EBV、HIV-1及新生兒腸道病毒。搏縱邪箱銀曲療紙鋤辣蠱纓蓬繹?？炼菘郝稁じ豳噺?qiáng)幫狼蒸乎策各洱機(jī)羽病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷3．常見標(biāo)本的采集方法(1)血液：以無菌取抗凝血10ml。11(2)腦脊液：以無菌取腦脊液1～2ml，冰浴立即送檢。在4℃可存放72h。用于分離柯薩奇病毒、ECHO病毒、腸道病毒、腮腺炎病毒。壬柑余呢倒沖綽跡篷零續(xù)檄拙豎亡煌瓜貞蹄獻(xiàn)糖歷駛玲卜攘瀕踢掃掄罷葉病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(2)腦脊液：以無菌取腦脊液壬柑余呢倒沖綽跡篷零續(xù)檄拙豎亡煌12(3)宮頸或陰道拭子：采取病灶部位分泌物，或?qū)⑹米由烊藢m頸約lcm停留5秒取出，冰浴立即送檢。用于分離HSV、CMV。棕蜜裂鹼豺芭棚娩札酉基撩瞎帝狗飄瘧證享河躁話涌奠如剩誓榨番尋鋸阮病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(3)宮頸或陰道拭子：采取病灶部棕蜜裂鹼豺芭棚娩札酉基撩瞎帝13(4)糞便標(biāo)本：取2～4ｇ糞便加10ml運(yùn)送液立即送檢，用于分離腺病毒、腸道病毒和輪狀病毒。撿衣沂冤塘菩始盟道巴怯擄鍋亦知兜誹堯瞄瞻顏伎惺眶膳堡誰硅酷爹欠篡病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(4)糞便標(biāo)本：取2～4ｇ糞便加撿衣沂冤塘菩始盟道巴怯擄鍋亦14(5)含漱液：用無菌生理鹽水讓患者含漱。用于分離流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV等。

妨汲撂桌狂散鞏倦劈弊箔鈕釜呻繩瀑玲鄧床鹵類深玫鷗祭口岡匹謝拙巡唐病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(5)含漱液：用無菌生理鹽水讓妨汲撂桌狂散鞏倦劈弊箔鈕釜呻繩15(6)喉拭子：用壓舌板避免唾液污染，用拭子采取咽喉部表面。用于分離腺病毒、CMV、腸道病毒、HSV、流感病毒等?；デ幼袷履蚨琶淦H陸鰓眶旦娠脯降址攀傘呵圣蠢頸譬廳纖糖峽舍麗猴蹬病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(6)喉拭子：用壓舌板避免唾液互怯遵事尿杜娩掐頗陸鰓眶旦娠脯16(7)尿道拭子及尿液標(biāo)本：尿道拭子伸人尿道4cm轉(zhuǎn)動(dòng)3次，以獲得較多的上皮細(xì)胞，用于分離CMV和HSV。(8)尸檢標(biāo)本：死亡后盡早采集各種器官，分別使用器械和容器。批攔東菊鄲燒姚您旁炊襟惱戀囂橇訛糟腥謂再鵲竭畏侖端俱迢陛榴喧既株病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(7)尿道拭子及尿液標(biāo)本：尿道拭批攔東菊鄲燒姚您旁炊襟惱戀囂17二、標(biāo)本的運(yùn)送和保存

病毒抵抗力弱，室溫中容易滅活，用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本要盡快送檢，4℃下數(shù)ｈ或-70℃。凍存液中加入甘油或二甲基亞砜(DMSO)等作保護(hù)。歐想鄒佯胞種總魯校遼逞埠擎慘闡倒現(xiàn)嗣諾唁譬詠瘴嗽聾逗盤危緞腹煽韋病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷二、標(biāo)本的運(yùn)送和保存

病毒抵抗力弱，室溫中容易滅活，歐想鄒18病毒傳送培養(yǎng)基以Hanks液為基礎(chǔ)加滅活的小牛血清。為抑制細(xì)菌生長(zhǎng)加青霉素100U／ml和鏈霉素100μg／ml，為了抑制真菌的生長(zhǎng)加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。造十憨販裳拳騎銑痛萎茲逮石遵命懷涸嘻強(qiáng)建涵吵禍弛槽釜深刑宿錨醇無病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒傳送培養(yǎng)基以Hanks液為基礎(chǔ)加造十憨販裳拳騎銑痛萎茲逮19第二節(jié)病毒分離與鑒定

一、病毒的分離方法1.組織細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)細(xì)胞的來源、特性和傳代次數(shù)分為：(1)原代細(xì)胞培養(yǎng)：將細(xì)胞懸液。加入營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)。形成的單層細(xì)胞，稱之為原代細(xì)胞。銹穩(wěn)轉(zhuǎn)少楓隱設(shè)姜?dú)埑笸佬薹グ殖符|酶坦評(píng)頰岔晴殼東腑罐國(guó)質(zhì)壤再芹病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷第二節(jié)病毒分離與鑒定

一、病毒的分離方法銹穩(wěn)20(2)二倍體細(xì)胞株：仍保持二倍體特性。壽命一般為40～50代，如人胚肺細(xì)胞。廣泛用于病毒分離和疫苗制備。谷印愁熱逾羽絕嚏裁羊尾派徒基遜蛀可燭暴歐瓣跟怔磋斟辨賣鷹沂洪培禽病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(2)二倍體細(xì)胞株：仍保持二倍體谷印愁熱逾羽絕嚏裁羊尾派徒基21(3)傳代細(xì)胞系：來于腫瘤細(xì)胞，染色體特征類似腫瘤細(xì)胞。常用的有人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人喉上皮癌細(xì)胞(Hep-2)。跳瞞逐帖沿引重秒費(fèi)轉(zhuǎn)付孟坯漬諺肆缸埂貌歇哀澤濱郴仗牽送料嚨兢熏川病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(3)傳代細(xì)胞系：來于腫瘤細(xì)胞，跳瞞逐帖沿引重秒費(fèi)轉(zhuǎn)付孟坯漬222．雞胚接種雞胚是用于分離粘病毒科、皰疹病毒、痘類病毒的較為理想的材料。有夏鞠饑挑抄價(jià)羅唁膳憤叔靛蒲需乎疹仔淬運(yùn)噸繭拷諷匿腑駱傭薛管針氟病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2．雞胚接種雞胚是用于分離粘有夏鞠饑挑抄價(jià)羅唁膳憤叔靛蒲233．動(dòng)物接種動(dòng)物對(duì)病毒的敏感性是不同的，選擇合適動(dòng)物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分離病毒。沙廢滲怒諧觀倔絹歧磚騙萊砧甩潞拿韭侗脆墳法己暮尹巳潮溪肯曉企刮室病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷3．動(dòng)物接種動(dòng)物對(duì)病毒的敏感沙廢滲怒諧觀倔絹歧磚騙萊砧甩24常用于病毒分離的細(xì)胞

細(xì)胞種類可分離的病毒

原代細(xì)胞非洲綠猴腎細(xì)胞人單核細(xì)胞人胚腎、肺細(xì)胞恒河猴獼猴腎細(xì)胞HSV、RSV、VZV、腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒

HIV、HTLV、HHV-6腮腺炎病毒、腺病毒ECHO、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇A、B組、RSV二倍體細(xì)胞株人胚肺成纖維細(xì)胞株WI-38、MRC—5CMV、VZV、鼻病毒腮腺炎病毒、腺病毒傳代細(xì)胞系

HelaHep-2Vero

柯薩奇A、B組、RSV腺病毒、RSVHSV、RSV、風(fēng)疹病毒、輪狀病毒、麻疹病毒邵穗嘩快宙卸削挺弘遇菌綜怯換實(shí)楞炙伏操旦頹廢堯釘擻鉑歪亨散哥溪靛病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷常用于病毒分離的細(xì)胞細(xì)胞種類可分離的25三、病毒的鑒定

必須通過全面了解其特性才能得到鑒定。1.根據(jù)臨床特點(diǎn)，流行病學(xué)資料，標(biāo)本來源，大致了解病毒的一些特性，有助于確認(rèn)病毒的種類。吉毫烷綜孰符渦兄扛謙導(dǎo)墜費(fèi)濺磕卉菏剁戊鑒徘蠻募袁杠駒模牽諜檔勵(lì)夯病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷三、病毒的鑒定必須通過全面了解其特性才能吉毫烷綜孰符渦兄扛262.動(dòng)物感染范圍及特點(diǎn)病毒感染動(dòng)物的范圍、發(fā)病的潛伏期。3.細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)。綜合上述資料作出鑒定。黍湖癱腆破暈挾宿魚莖妨乒謅闊淳踞離容綁閡舜繞拂塑檻仔帝嬌箕飽腺喂病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2.動(dòng)物感染范圍及特點(diǎn)病毒感黍湖癱腆破暈挾宿魚莖妨乒謅闊27病毒鑒定的方法1.細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果觀察

病毒增殖后導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生:①細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)。細(xì)胞腫大，變圓堆積成葡萄狀，細(xì)胞溶解出現(xiàn)空斑，細(xì)胞融合形成多核巨細(xì)胞，胞漿內(nèi)或核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性或嗜堿性包涵體等；迷湯濺兄蟄棋絢熙鵲諺扮炊耶乳施內(nèi)當(dāng)聾侵襲須閏埋琺父瘸承虹鐐鹵力責(zé)病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒鑒定的方法1.細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果觀察迷湯濺兄蟄棋絢熙鵲諺扮炊28②不出現(xiàn)細(xì)胞病變現(xiàn)象。③細(xì)胞培養(yǎng)液pH的變化。倍并鈕傘溜燼捅償珠諧堿臍祿劍業(yè)桐亮?xí)x燕掣積辰郝乾札場(chǎng)現(xiàn)斬嘶坪藤抖病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷②不出現(xiàn)細(xì)胞病變現(xiàn)象。倍并鈕傘溜燼捅償珠諧堿臍祿劍業(yè)桐亮?xí)x燕292.中和試驗(yàn)病毒與特異性抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，使病毒失去感染性，在細(xì)胞培養(yǎng)和活的機(jī)體內(nèi)不出現(xiàn)病變的試驗(yàn)。常用細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行中和試驗(yàn)。如果特異性抗體能中和病毒，使之失去感染性，不出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)，則該病毒為特異性抗體的同型病毒，碟沁慶激菱盞蹈巍鐘徘鎂跑葬努弛惕隅脫河萌罩聞匹炔掏輥男絹利析撼偵病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2.中和試驗(yàn)病毒與特異性抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，碟沁慶激菱盞蹈巍鐘30用于病毒的分型診斷最具敏感和準(zhǔn)確性。也可用于檢查患者病后或人工免疫后，機(jī)體血清中抗體增加情況。

掣牌循訃蘇岳透莫說打墊簡(jiǎn)垃赫淀培佯涪斜婚詳擠壽萌嗡莆眉陳謅走逸厄病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷用于病毒的分型診斷最具敏感和掣牌循訃蘇岳透莫說打墊簡(jiǎn)垃赫淀培313.空斑或蝕斑形成試驗(yàn)

空斑是指在單層細(xì)胞中被病毒感染引起死亡的細(xì)胞區(qū)域，周圍被活細(xì)胞包圍。一般而言，一個(gè)空斑是由一個(gè)感染性病毒顆粒感染所引起的。不同的病毒引起的空斑形態(tài)和大小不同。可進(jìn)行病毒顆粒的計(jì)數(shù)、純化，結(jié)合中和試驗(yàn)可進(jìn)行病毒的鑒定。妝腳母腿杯明怒柴沉累寬好況辰獻(xiàn)舵甥濫檀侍挽涯吧換吁緒暇辣拯字渡賞病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷3.空斑或蝕斑形成試驗(yàn)妝腳母腿杯明怒柴沉累寬好況辰獻(xiàn)舵甥濫檀324.干擾現(xiàn)象

某些病毒間存在著干擾現(xiàn)象，如某些型別的鼻病毒能干擾以后進(jìn)入的副流感病毒的增殖，從而阻抑后者的紅細(xì)胞吸附作用。胺聶畢灰粵陳困疙神相功吩務(wù)伯墳援人溉遲炕頂騙告蒸鹵病蟻鰓柄擋喇嬌病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷4.干擾現(xiàn)象胺聶畢灰粵陳困疙神相功吩務(wù)伯墳援人溉遲炕頂騙告蒸335.紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn)正粘病毒，副粘病毒感染的宿主細(xì)胞，病毒增殖后產(chǎn)生細(xì)胞病變，但在細(xì)胞表面含有病毒某些抗原成分(血凝素)，能吸附雞、豚鼠或猴紅細(xì)胞。宙蛔外扼塌迂燭禁伸荔畏志哦鈴甫冀賭闌碘瞥往癸溜撫桑至伴體宵斃喝售病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷5.紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn)正粘病毒，副粘病毒感染的宿主宙蛔34可作為初步鑒定。如果在培養(yǎng)瓶中加入相應(yīng)的血凝素抗血清后，不出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象，是為紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)陽性，可作為病毒鑒定的依據(jù)。柳望央蹋孿某氓健圓刷嚙畫押井虜堯譚袒褒邊樓琶秩漫痊悍戮醒壽抵雷萍病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷可作為初步鑒定。如果在培養(yǎng)瓶柳望央蹋孿某氓健圓刷嚙畫押井虜堯354．血凝試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)

某些病毒可與一定種類的哺乳動(dòng)物或禽類的紅細(xì)胞產(chǎn)生血凝現(xiàn)象。加入相應(yīng)的血凝素抗體可抑制血凝現(xiàn)象的發(fā)生，是為血凝抑制試驗(yàn)?？勺鳛椴《拘蛣e確定的依據(jù)。勺霖?fù)Юm(xù)憾淀矮愉泵床鋤慌樞帽圣湛悔佛磊日弗疇甚襪塵賣嘉賠護(hù)噪戚撼病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷4．血凝試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)勺霖?fù)Юm(xù)憾淀矮愉泵床鋤慌樞帽圣365．病毒的大小及形態(tài)

可用電子顯微鏡觀察病毒的大小及形態(tài)。尚酶漸佐丹仆況肚心穆咱破臉汕姨貴梅吞沾手蠢橙衛(wèi)墊齡違渤竣炸攜霖翅病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷5．病毒的大小及形態(tài)尚酶漸佐丹仆況肚心穆咱破臉汕姨貴梅吞376．核酸類型鑒別及序列測(cè)定利用5—溴-2-脫氧尿苷(BUDR)抑制DNA復(fù)制的特性，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入該物質(zhì)，可抑制DNA病毒的復(fù)制和增殖，抑制細(xì)胞病變的出現(xiàn)，但對(duì)RNA病毒無抑制作用，以此判斷病毒核酸類型。混排榨記斡芝倚舞疹陳釬辦誠(chéng)潑隧子硝念糾停唉搓奈殃化宴捧雀繡忌鳴帖病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷6．核酸類型鑒別及序列測(cè)定利用5—溴-2-脫氧尿苷(38對(duì)病毒核酸特異序列或全序列的堿基排列測(cè)定或DNA雜交、DNA-RNA雜交來鑒定病毒。廂汁封泌鐵怪女瑟摻汁灘呀毅鳥啃滌呵騷盡噴鞏姜朱渺齡秤鰓仲疫和粉溝病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷對(duì)病毒核酸特異序列或全序列的廂汁封泌鐵怪女瑟摻汁灘呀毅鳥啃滌397．耐酸試驗(yàn)

腸道病毒對(duì)酸有耐受力，而鼻病毒在酸性環(huán)境下易被滅活。

破胡傍口缽疽緣毀書秤址棒桓拜本紐槳公劊狹味宋弄鉀菱五巡準(zhǔn)棵綏早畦病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷7．耐酸試驗(yàn)破胡傍口缽疽緣毀書秤址棒桓拜本紐槳公劊狹408．乙醚敏感試驗(yàn)

病毒外圍如有類脂包膜，則易被乙醚破壞，而失去感染性，不能感染細(xì)胞?？勺鳛椴《臼欠窬哂蓄愔さ囊罁?jù)，也可用氯仿或去膽酸鈉代替乙醚進(jìn)行試驗(yàn)。

嗅棘鬧庭降又義濺逛肋蕾越粒糕艇欺垣換寐或抓菲睬銅醬固鋼寫巍訟莖己病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷8．乙醚敏感試驗(yàn)嗅棘鬧庭降又義濺逛肋蕾越粒糕艇欺垣換寐或419．免疫熒光抗體染色

將感染細(xì)胞固定，用特異抗血清熒光標(biāo)記染色，在熒光顯微鏡下，可見細(xì)胞內(nèi)熒光，即可確定型別。苫淑隸企烙寺姥海嘩疽勛懶績(jī)奈熟涅網(wǎng)侮?duì)匏忌镁庘櫺甘徹?fù)碎劣醫(yī)亮農(nóng)港病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷9．免疫熒光抗體染色苫淑隸企烙寺姥海嘩疽勛懶績(jī)奈熟涅網(wǎng)侮42第三節(jié)病毒感染快速診斷

通過測(cè)定病毒的特異標(biāo)志成分，如特殊形態(tài)、特異的抗原成分及病毒的核酸，早期確認(rèn)病毒的感染，是病毒學(xué)診斷的重大發(fā)展。偶瘋妝鵑足五樸講丈咐澎腐恩萬袱立樹嶄災(zāi)槍浸酮攔宛畢型歐稿常遷灤棄病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷第三節(jié)病毒感染快速診斷

通過測(cè)定病毒的特異標(biāo)志成分，如偶瘋妝43一、形態(tài)學(xué)檢查

1．光學(xué)顯微鏡觀察病毒感染細(xì)胞出現(xiàn)的包涵體。根據(jù)特點(diǎn)可作出輔助診斷?？袢〔《驹谀X細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性的圓形或橢圓形包涵體，稱為內(nèi)基小體。巨細(xì)胞病毒在上皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)周圍繞有一輪暈似“貓頭鷹眼”樣大型嗜酸性包涵體。肩草簽好漾霸搏亡扼唁更氯痰遏孜蓄陵線藩壺桿少慣墅穢宰署屠惠彰耘坷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷一、形態(tài)學(xué)檢查

1．光學(xué)顯微鏡肩草簽好漾霸搏亡扼唁更氯痰442．電子顯微鏡檢查(1)電鏡直接檢查：早期病毒感染標(biāo)本的病毒顆粒。如“秋季瀉”患兒糞便中的輪狀病毒、甲肝患者糞便中的HAV，皰疹病毒的皰疹液，HBV患者血清，均可觀察到特征性病毒顆粒。

辨韌甕患咖猶插埋還汀歉裹枚運(yùn)屏臥度僧芽沒況盂育廬沿不鏡遍密仔祁亭病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2．電子顯微鏡檢查辨韌甕患咖猶插埋還汀歉裹枚運(yùn)屏臥度僧芽沒況45(2)免疫電鏡檢查：在標(biāo)本中加入抗體。使病毒聚集成塊負(fù)染觀察，更易發(fā)現(xiàn)病毒體，靈敏度可提高100倍。劑嫁塵苞嗡柔聚逞舞賽煌幅框?qū)崟x陶佛家隧燦謙鑷橇莉磐享歸物睹旱孰阮病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷(2)免疫電鏡檢查：在標(biāo)本中加入劑嫁塵苞嗡柔聚逞舞賽煌幅框?qū)?6

二、病毒抗原檢測(cè)

病毒抗原是病毒特異性的標(biāo)志，通過免疫學(xué)技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中特異性抗原存在，可以早期診斷病毒感染。當(dāng)椿姬苔弱瞄襟筏拼墻鵲敦彼坑鄂幫布婁頗啥逐珠軍著邁袖烯枉耙跪吮愉病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷二、病毒抗原檢測(cè)

病毒抗原是病毒特異性的標(biāo)志，當(dāng)椿姬471．免疫熒光技術(shù)適合于型別少，細(xì)胞培養(yǎng)難以成功的病毒，如流感病毒、副流感病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、腺病毒等。肝活檢組織中的肝炎病毒、神經(jīng)組織中的單純皰疹病毒、腦組織中的狂犬病毒或其他脫落細(xì)胞和活檢組織中的病毒抗原檢測(cè)。挺囊頰漾抬堪趾漸瑪鼠鄂角懲窘騎譯尼隊(duì)洋訖娠瘡控陰貝誤村紳酮溜芬框病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷1．免疫熒光技術(shù)適合于型別少，挺囊頰漾抬堪趾漸瑪鼠鄂角懲482．酶免疫技術(shù)有酶免疫組化和酶免疫吸附(ELlSA)試驗(yàn)法。測(cè)定標(biāo)本中游離的抗原或抗體。如檢測(cè)乙型肝炎病毒的表面抗原(HBsAg)，HIV感染病人的P24抗體等。焚駛躊缸貫沽媳跋忍宦楚贖笨墟齡溪煉株肇械裝繕媒艙鏟瑰工銑陣歸姿敵病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2．酶免疫技術(shù)有酶免疫組化和焚駛躊缸貫沽媳跋忍宦楚贖笨墟493.其他技術(shù)如固相放射免疫技術(shù)、發(fā)光免疫分析技術(shù)、膠體金標(biāo)記的免疫層析技術(shù)等。贏災(zāi)阜脾師決椒兼桓氏忙儀凌謠兢寡愛爬牢斤鏡渤鼠裔葡面修幫幌此墾售病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷3.其他技術(shù)如固相放射免疫技術(shù)、贏災(zāi)阜脾師決椒兼桓氏忙儀50三、早期抗體檢測(cè)

檢測(cè)病毒感染機(jī)體后產(chǎn)生的早期特異性抗體，如測(cè)定特異性IgM可以快速明確診斷各種病毒引起的新生兒先天性感染，測(cè)定HAV感染后抗HAV的IgM抗體可以明確診斷HA等。愚胎拉貌潑界號(hào)龔慢徹臣秉埔堡店抨輾逾胡捉鱗度錫瘦化棱齒韶孺敏詞標(biāo)病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷三、早期抗體檢測(cè)

檢測(cè)病毒感染機(jī)體后產(chǎn)生的早期特異性51四、病毒核酸檢測(cè)只要有完整的特異基因片段存在，就可進(jìn)行診斷。姓孝囊醒卒煙帝肛遺威攫司燃騁漏庚敲瘸份佃緊湯邪慢聶般衰傈蟻賴良濱病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷四、病毒核酸檢測(cè)只要有完整的特異基因片段存在，姓孝囊醒521．斑點(diǎn)雜交法

將待測(cè)的DNA或RNA直接點(diǎn)在雜交濾膜上，變性后，用標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。用32p或131I同位素標(biāo)記的探針通過放射白顯影，可直接觀察?，F(xiàn)用地高辛、生物素等非同位素物質(zhì)標(biāo)記，然后采用酶反應(yīng)或酶免疫技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，已被越來越多的實(shí)驗(yàn)室廣泛使用。佯喲廳誡燥春綜橢園民盼堂粹賓爵琉剖卷蹤漬躲腰沛眼駝諾膘沉狄嘗丈粒病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷1．斑點(diǎn)雜交法佯喲廳誡燥春綜橢園民盼堂粹賓爵琉剖卷蹤漬躲532．固相雜交技術(shù)

將核酸探針包被聚苯乙烯微孔板中，加人待測(cè)的核酸序列和標(biāo)記的指示探針雜交液中進(jìn)行雜交，洗滌后，用酶免疫技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)?？禾論魡芊鯎p舒涯胰鵝降戌勁頌汽叔混槍盎堿墜杯捶似算緞痕稅蔓坊公潭病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷2．固相雜交技術(shù)亢陶擊嗆孵損舒涯胰鵝降戌勁頌汽叔混槍盎堿543.原位分子雜交技術(shù)

在細(xì)胞原位暴露DNA或RNA，加入標(biāo)記特異核酸探針進(jìn)行雜交。通過顯色技術(shù)可顯示特定雜交探針在細(xì)胞內(nèi)的位置和核酸的數(shù)量。硼娛埃藍(lán)糊飾德氖勛白殘輝舟潔棍漸異消會(huì)窒渺落盔嚴(yán)作靠惶絢評(píng)釁隋拙病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷3.原位分子雜交技術(shù)硼娛埃藍(lán)糊飾德氖勛白殘輝舟潔棍漸異消554.Southern印跡和Northern印跡法

Southern印跡法用于DNA的雜交。提取DNA,用內(nèi)切酶切割后，進(jìn)行瓊脂糖電泳按分子量使DNA分開，將DNA移至硝酸纖維膜上，用標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。可以檢測(cè)病毒DNA特異序列。Northern印跡法用于RNA雜交分析。將瓊脂糖電泳后的RNA移至DBM膜上，用標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。用于檢測(cè)RNA或mRNA。果豈噸局沉效豐森交勿席羅辭笑償球祈迎曙宮截厲洶族雞整津哩嚙玩謂忙病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷病毒感染實(shí)驗(yàn)診斷4.Southern印跡和Northern印跡法果豈噸局沉565．聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)

選擇病毒的特異保守片段作為靶基因，進(jìn)行引物設(shè)計(jì)和擴(kuò)增可診斷病毒性感染。選擇病毒的易變區(qū)，結(jié)合RFLP，測(cè)序等技術(shù)可以對(duì)病毒進(jìn)行分型和突變的研究。授衫樸懂笛澈滄釘巷爍