中藥制劑的檢查

第四章中藥制劑的檢查教學(xué)要求

1、掌握重金屬、砷鹽的檢查原理和方法。2、熟悉《中國藥典》現(xiàn)行版制劑通則的檢查項目及特殊雜質(zhì)的檢查原理。3、了解農(nóng)藥殘留量的檢查原理和方法。4、了解黃曲霉毒素的檢查方法制劑通則檢查

一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查微生物限度檢查主要內(nèi)容第一節(jié)中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的物質(zhì)一、雜質(zhì)的來源及種類雜質(zhì)分類一般雜質(zhì)特殊雜質(zhì)必須根據(jù)雜質(zhì)對人體危害性和作用要求，對中藥制劑雜質(zhì)及其限量，做必要檢查和規(guī)定。在自然界中分布較廣泛，在多種藥材的采集、收購、加工以及制劑的生產(chǎn)或貯存過程中容易引入的雜質(zhì)，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽等在該制劑的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)其來源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì).一般雜質(zhì)特殊雜質(zhì)①由中藥材原料中帶入；②在生產(chǎn)制備過程中引入；③貯存過程中受外界條件的影響而使中藥制劑的理化性質(zhì)改變而產(chǎn)生。雜質(zhì)來源途徑二、雜質(zhì)的限量檢查1.雜質(zhì)限量藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用百分之幾或百萬分之幾來表示。2.限量檢查規(guī)定一定限度，要求所檢樣品中某組分含量不超過此限度如規(guī)定黃連上清丸含重金屬不得過百萬分之二十五。三、雜質(zhì)限量計算方法1.雜質(zhì)限量檢查方法1.對照法：取一定量的被檢雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和一定量供試品溶液，在相同條件下處理，比較反應(yīng)結(jié)果，已確定雜質(zhì)含量是否超過限量。2.靈敏度法：在供試品溶液中加入一定量的試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)。該法不需要雜質(zhì)對照品溶液。如乳酸中枸櫞酸，草酸，磷酸或酒石酸的檢查。2.雜質(zhì)限量計算方法例1阿膠砷鹽檢查

取本品2.0g，加氫氧化鈣1g，混合，加少量水，攪勻，干燥后先用小火燒灼使炭化，再在500～600℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸3ml與適量的水使溶解成30ml，分取溶液10ml，加鹽酸4ml與水14ml，依法檢查（中國藥典2005版附錄ⅣF）。如果標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1μgAs/ml）取用量為2ml，求雜質(zhì)限量。例2、黃連上清丸中重金屬檢查

取本品5丸，切碎，過二號篩，取適量，稱定重量，照熾灼殘渣檢查法（中國藥典2005版附錄ⅣJ）熾灼至完全灰化。取遺留的殘渣，依法檢查（中國藥典2000版附錄ⅣE第二法），含重金屬不得過百萬分之二十五。如果標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10μgAs/ml）取用量為2ml，求供試品取樣量。一般雜質(zhì)檢查方法2.弱酸性條件下（pH=3～3.5）能與硫代乙酰胺生成不溶性硫化物而顯色的金屬離子有：Ag+、As3+、As5+、Bi3+、Cu2+、Cd2+、Co2+、Hg2+、Ni2+、Pb2+、Sb2+、Sn2+、Sn4+等；一、重金屬檢查法1.重金屬：在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。3.在堿性溶液中能與硫化鈉作用生成不溶性硫化物而顯色的有：Bi2+、Cd2+、Cu2+、Co2+、Fe3+、Hg2+、Ni2+、Pb2+、Zn2+等金屬離子。4.在藥品生產(chǎn)中遇到鉛的機會較多，而且鉛易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表。

①弱酸性條件下：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S↑Pb2++H2S→PbS↓+2H+

②堿性條件下：

Pb2++S2-→PbS↓（一）基本原理（二）檢查方法：中國藥典2010版規(guī)定重金屬檢查方法有三種。第一法：適用于供試品不經(jīng)有機破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。

甲管乙管標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液+醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml+水或各藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml供試品溶液25ml硫代乙酰胺試液各2ml搖勻放置2min同置白紙上,自上向下透視

乙管中顯出的顏色不得比甲管更深第二法

適于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，經(jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限檢查。放冷置水浴上蒸干微熱溶解微熱溶解取熾灼殘渣項下遺留的殘渣蒸干至氧化氮蒸汽除盡加硝酸0.5ml加水15ml加鹽酸2ml移置納氏比色管中滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml加水稀釋成25ml另取配制供試品溶液的試劑置瓷皿中蒸干加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml加水15ml移置納氏比色管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量用水稀釋成25ml以上兩管溶液，照上述第一法檢查第三法

適用于檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬檢查。

置納氏比色管中＋硫化鈉試液5滴，搖勻

甲管乙管標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液適量＋氫氧化鈉試液5ml＋水20ml供試品適量＋氫氧化鈉試液5ml＋水20ml溶解乙管中顯出的顏色不得比甲管更深（1）方法靈敏度標(biāo)準(zhǔn)鉛液的用量以20μg（相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml）時加硫代乙酰胺試液后所顯顏色最適合于目視法觀察。（2）反應(yīng)條件硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺試液加入量以2ml時呈色最深，最佳顯色時間為2分鐘。（3）供試液有顏色時的處理供試品在加硫代乙酰胺試液以前如帶色，可用稀焦糖液或加常用的指示劑調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)溶液，使兩者顏色一致。三、注意事項（4）其他離子的干擾①供試品中含有高鐵鹽，可加入抗壞血酸②使用鹽酸超過1.0ml或使用氨試液超過2ml③供試品為鐵鹽（5）中藥制劑中重金屬檢查的前處理將藥品灼燒破壞，熾灼溫度必須控制在500～600℃。③如需過濾，可加入對酚酞呈微堿性的飽和醋酸銨溶液，溫?zé)岷笥弥睆捷^小的定量濾紙濾過，或者選用玻砂漏斗過濾。④如供試品本身能生成不溶性硫化物時，影響重金屬的檢查，可加入適當(dāng)?shù)难诒蝿＃?）其他①標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液臨用前新配以防止硝酸鉛水解；配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃儀器，均不得含有鉛。②硫化鈉試液應(yīng)采用分析純的硫化鈉配制，貯存在棕色瓶中可保存1～2個月。二、砷鹽檢查法

砷鹽檢查法系指用于藥品中微量砷（以As計算）限量檢查的方法。中國藥典中規(guī)定的方法是古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag-DDC).1.基本原理：AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2OAsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黃色)AsH3+3HgBr2→3HBr3+As(HgBr)3(棕色)AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+（一）古蔡法4I-+Zn2+→[ZnI4]2-

Sn2++Zn→Sn+Zn2+2.檢查方法：A為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶B為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞C為導(dǎo)氣管,全長約180mmD為具孔的有機玻璃旋塞

E為中央具有圓孔的有機玻璃旋塞蓋古蔡法裝置中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為60～80mm）

頂端平面上放一片溴化汞試紙蓋上旋塞E并旋緊樣品溶液3.注意事項（1）

方法靈敏度

：0.75μg（以As計），2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液；（2）

反應(yīng)液的酸度及各種試液用量：2mol/L的鹽酸液，含KI濃度為2.5%，SnC12濃度為0.3%，加入鋅粒以2g為宜；（3）

反應(yīng)溫度和時間：25～40℃，45分；

（4）鋅粒的影響：2mm左右粒徑；（5）汞試紙的選擇：中速定量濾紙，新鮮制備；（6）醋酸鉛棉花的作用：除去H2S；（7）中藥制劑中砷鹽檢查的前處理：①酸破壞法，②堿破壞法，③直接炭化法；（8）干擾物質(zhì)：（9）其他：①關(guān)于所用儀器和試液，②關(guān)于同一套儀器，③關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)砷溶液，④關(guān)于酸性氯化亞錫試液。

（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag-DDC法）1.基本原理：二乙基二硫代氨基甲酸銀二乙基二硫代氨基甲酸（簡稱Ag-DDC）（簡稱HDDC）2.檢查方法：按《中國藥典》2010年版23.注意事項：（1）有機堿液的選擇：三乙胺（2）反應(yīng)的溫度和時間：25～40℃，45分鐘三、干燥失重測定法1、藥品的干燥失重：系指藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的重量，主要是指水分、結(jié)晶水，但也包括其他揮發(fā)性的物質(zhì)如乙醇等。

2、水分：又可分為必要的水分，即結(jié)晶水或組成水分；不必要的水分，即附著水分或吸留的水分。3、進行干燥失重或水分測定的必要性藥品中含有較大量的水分或其他揮發(fā)性物質(zhì)時：

使藥品的含量降低，影響使用劑量；引起藥品水解或發(fā)霉變質(zhì)，而使藥品失效；含水量還可反映出制劑的生產(chǎn)工藝是否穩(wěn)定，包裝及貯存條件是否適宜等。故需進行干燥失重或水分測定。方法適用范圍檢查方法常壓恒溫干燥法適用于受熱較穩(wěn)定的中藥制劑的測定將供試品置于烘箱中，在規(guī)定溫度下進行干燥，干燥溫度一般為105℃，干燥時間一般在達到指定溫度±2℃干燥2~4小時，再稱至恒重為止。干燥劑干燥法①硅膠干燥法②P2O5干燥法③硫酸干燥法適用于受熱易分解或揮發(fā)性供試品檢查將供試品置于干燥器內(nèi)，利用干燥器內(nèi)貯放的干燥劑，吸收供試品中的水分，干燥至恒重減壓干燥法適用于熔點低，受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品檢查將供試品置于減壓干燥器中進行干燥，壓力應(yīng)在2.67kPa（20mmHg）以下。常用干燥失重測定法4、檢查方法5、注意事項

（1）供試品的顆粒大小一般將顆?？刂圃?mm以下，若供試品為較大結(jié)晶，為了避免在研磨過程中水分等損失，應(yīng)先迅速搗碎成2mm以下的小粒。

（2）供試品用量除另有規(guī)定外，一般取供試品約1g。

（3）鋪設(shè)的厚度應(yīng)將供試品平鋪在扁形稱量瓶中，厚度不可超過5mm，如為疏松物質(zhì)，厚度不可超過10mm。

（4）瓶蓋的放置將稱量瓶放入烘箱或干燥器中時，應(yīng)將瓶蓋取下，置稱量瓶旁或?qū)⑵可w半開進行干燥。取出時須將瓶蓋蓋好。在每次干燥后應(yīng)先置干燥器內(nèi)放冷至室溫，然后稱定重量。

（5）如供試品未達到規(guī)定的干燥溫度即融化時，應(yīng)先將供試品置較低的溫度下干燥至大部分水分除去后，再按規(guī)定條件干燥。（6）減壓時需注意壓力變化，如真空度較高時，干燥器易爆炸！初次使用新干燥器時，宜用較厚的布包在外部，以防玻璃飛濺而引起傷害。（7）恒重系指供試品連續(xù)2次干燥后的重量差異在0.3mg以下，干燥至恒重的第2次及以后各次的稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1h后進行。

四、水分測定法烘干法-----不含或含少量揮發(fā)性成分的供試品甲苯法-----含揮發(fā)性成分的供試品減壓干燥--含揮發(fā)性成分的貴重藥品干燥劑：P2O5

氣相色譜法-散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型中藥制劑中微量水分的測定

快速水分測定儀甲苯法裝置注意事項

1.測定用的供試品，一般先破碎成直徑不超過3mm的顆?；蛩槠ㄆ扑闀r不得使用高速粉碎機）。直徑和長度在3mm以下者可不破碎。如使用減壓干燥法需先經(jīng)二號篩。

2.甲苯法中，為減少因甲苯與微量水混溶引起水分測定結(jié)果偏低，在測定前，甲苯需先加少量水，充分振搖使達飽和后放置，將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后方可使用。

3.進行減壓干燥時，減壓操作宜逐漸進行，不可驟然大幅度減壓。4.采用氣相色譜法時需注意①無水乙醇含水量約3%，標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液的配制需用同一批號試劑。無水乙醇中的含水量需要扣除。②含水量的計算采用外標(biāo)法。五、熾灼殘渣檢查法

熾灼殘渣（英國藥典稱為硫酸灰分）：

中藥多由有機化合物組成，有機物經(jīng)熾灼炭化，再加硫酸濕潤,加熱使硫酸蒸氣除盡后，于高溫（700～800℃）熾灼至完全灰化，使有機質(zhì)破壞分解變?yōu)閾]發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)（多為金屬的氧化物或無機鹽類）成為硫酸鹽,稱為熾灼殘渣。取供試品1.0～2.0或各藥品項下規(guī)定的重量，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；除另有規(guī)定外，加硫酸0.5～1ml使?jié)駶櫍蜏丶訜嶂亮蛩嵴魵獬M后，在700～800℃熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在700～800℃熾灼至恒重，即可。如需將殘渣留作重金屬檢查，則熾灼溫度必須控制在500～600℃。

檢查方法（1）取樣量：一般為1～2g左右。（2）生藥的灰化可以加一定量已恒重的純砂或混以乙醇、甘油，使灰化完全。（3）如需將殘渣留作重金屬檢查，則熾灼溫度必須控制在500～600℃。（4）具有揮發(fā)性的無機成分中藥受熱揮發(fā)或分解后殘留非揮發(fā)性雜質(zhì)，也可用熾灼殘渣法檢查。注意事項六、灰分測定法

1.總灰分：中藥經(jīng)粉碎后加熱，高溫?zé)胱浦粱一瑒t其細胞組織及其內(nèi)含物成為灰燼而殘留，由此所得灰分為“生理灰分”即總灰分。2.酸不溶性灰分：中藥經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨欲}酸處理，得到不溶于鹽酸的灰分，稱為酸不溶性灰分。3.檢查方法：《中國藥典》2010年版附錄。（1）供試品需粉碎使其能通過2號篩。（2）供試品不易灰化時可加熱水或10%硝酸銨溶液處理。注意事項第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查方法特殊雜質(zhì)：指在該藥品的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)其來源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì)。1.西洋參中摻有人參（西洋參中人參皂苷Rb1含量高；后者人參皂苷Rg1高）2.烏頭酯型生物堿的檢查(毒性較大)

（①制川烏、制草烏、制附子藥材含有烏頭堿不得高于0.15%；②附子理中丸）3.大黃流浸膏中土大黃苷的檢查（取本品適量，加甲醇2ml，溫浸10分鐘，放冷，取上清液10μl，點于濾紙上，以45%乙醇展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外燈（365nm）下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。）

大黃素土大黃苷常見農(nóng)藥的種類:

（1）有機氯類：DDT、六六六等；（2）有機磷類：敵敵畏、樂果等；（3）苯氧羧酸類除草劑：2，4-D；2，4，5-T等；按化學(xué)結(jié)構(gòu)

（4）氨基甲酸酯類：西維因（甲萘威）等；（5）二硫代氨基甲酸酯類：福美鐵、福美鋅等；（6）無機農(nóng)藥：磷化鋁、砷酸鈣等；（7）植物性農(nóng)藥：煙葉和尼古丁等；（8）其他：溴螨酯、氯化苦等。其中有機氯和有機磷類農(nóng)藥是長期殘留的，故應(yīng)測定其含量。第四節(jié)農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定（1）殘留農(nóng)藥的提取

①有機氯類農(nóng)藥：常用正己烷（或石油醚）、乙腈、丙酮、苯等，混合溶劑常用正己烷提取溶劑（或石油醚）-丙酮、乙腈-水等。②有機磷類農(nóng)藥：根據(jù)其極性采用相應(yīng)極性的溶劑進行提取。提取方法：①索氏提取法②振蕩提取法。（2）樣品純化

①液-液分配（LLP）：常用溶劑體系有二氯甲烷-丙酮/水、二氯甲烷-甲醇/水、乙腈-石油醚、乙腈-石油醚/水、二氯甲烷-乙腈/水等。②柱層析分離：常用吸附劑有弗羅里硅土（Florisil）Celite-Nuchar、硅膠、氧化鋁，活性炭等。（3）

檢測方法：以色譜分離方法為主，常用薄層色譜法氣相色譜法。

薄層色譜法

a.層析系統(tǒng)有機氯農(nóng)藥：吸附劑：硅膠G、氧化鋁、GF254等；展開劑：己烷、庚烷等；有機磷農(nóng)藥：吸附劑：硅膠G、氧化鋁、硅藻土、纖維素粉和聚酰胺等，展開劑：丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)己烷等。b.顯色劑

有機氯農(nóng)藥：硝酸銀。有機磷農(nóng)藥：剛果紅、4-（對硝基芐基）吡啶（NBP）等。a.層析柱常用玻璃柱（柱長以1～2米為宜）或彈性毛細管柱。b.檢測器常用電子捕獲檢測器。有機氯農(nóng)藥：常用DC-200、OV-17、QF-1、SE-30、OV-210等。配比一般為1.5-10%。c.固定液及其配比有機磷農(nóng)藥：常用10%DC-200、10%DC-200+15%QF-1、2%DEGS等。d.擔(dān)體chromosorbWAWDMCS，目數(shù)一般用80-100目。有機氯農(nóng)藥：一般使用180-220℃，視農(nóng)藥而異，其中以200℃最常用e.柱溫有機磷農(nóng)藥：測定對象不同，柱溫變化較大。f.載氣

常使用高純氮（含氮99.99%）為載氣，流速為50～150毫升/分鐘。氣相色譜法一、為何需對中藥材及中藥制劑中黃曲霉毒素含量進行控制？

干燥不夠、貯存不當(dāng)、制備和加工過程中處理不善，→污染→產(chǎn)生黃曲霉毒素黃曲霉毒素具有極強的毒性和致癌性。二、黃曲霉毒素的基本結(jié)構(gòu)