越鞠丸醇提物對產(chǎn)后抑郁模型小鼠的快速抗抑郁作用

越鞠丸醇提物對產(chǎn)后抑郁模型小鼠的快速抗抑郁作用

產(chǎn)后抑郁（ppd）是產(chǎn)睡期精神綜合征中最常見的一種。它以分娩后的抑郁和抑郁為主要癥狀。臨床癥狀包括抑郁、悲傷、哭泣、容易生氣、躁動，甚至幻覺，以及自殺和孩子。PPD嚴重危害產(chǎn)婦及嬰兒身心健康,給家庭和社會也帶來嚴重影響。PPD被認為是難治性抑郁越鞠丸出自《丹溪心法》,功能行氣解郁,是治療抑郁癥的經(jīng)典方劑,臨床上常用于抑郁癥的治療PPD的產(chǎn)生與多種因素相關(guān),既往的應(yīng)激性生活事件被認為是PPD發(fā)病的重要風險因素1實驗用藥材、藥物和試劑清潔級健康成年雌性BALB/c小鼠40只,體質(zhì)量18-24g,軍事醫(yī)學科學院提供,動物合格證號:2007000581303。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實驗。動物房室溫25℃、濕度為45%,明暗交替時間為12h,動物可以自由飲食進水。實驗用中藥材購于南京中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂門診,經(jīng)本校藥學院專家鑒定,為中國藥典收載品種。取蒼術(shù)、神曲、香附、梔子、川芎5種藥材粉碎,過100目篩,按等分重量混合后浸泡在95%乙醇中(6倍體積)48h,期間不停攪拌。靜置后取上清,同樣過程重復兩次,收集3次的上清液后過濾,減壓濃縮至無乙醇。加入Tween-80作為乳化劑(終濃度為0.5%),配制為實驗所需濃度-20℃保存?zhèn)溆?。將濃縮后的YJ進行高效液相色譜(HPLC)分析,按照實驗室之前確立的方法鹽酸氯胺酮(ketamine,Ket)注射液為福建古田制藥廠生產(chǎn)(批號:20140301)。臨用前用生理鹽水配成30mg/ml的藥液。鹽酸氟西汀(Fluox-etine,Flx)為美國Sigma公司產(chǎn)品,根據(jù)Dulawa方法1.4分組及給藥小鼠隨機分為2組:空白對照組(n=8)和孕前應(yīng)激組(n=32),空白對照組不予任何應(yīng)激,孕前應(yīng)激組小鼠每天給予6h束縛應(yīng)激刺激(11∶00-17∶00)。3周后將孕前應(yīng)激組以一雌一雄分籠交配飼養(yǎng)。大約4周后,母鼠分娩,被定義為PPD模型組(Mod)。將模型組母鼠隨機分為Mod組(n=8),YJ組(n=8),Ket組(n=8),Flx組(n=8)。Flx組自產(chǎn)后第1天始每日腹腔注射Flx注射液每10g體重0.1ml(相當于每克小鼠給予氟西汀0.018mg),持續(xù)21d。產(chǎn)后第20天,根據(jù)薛文達等1.4.2小鼠的單位時間攝食量的測定根據(jù)Dulawa方法將小鼠分別放入玻璃燒杯中,水溫保持在24-26℃。讓小鼠在其中游泳2min后,立刻開始觀察記錄接下來的4min內(nèi)小鼠總的不動時間:即小鼠在水中停止掙扎,或呈漂浮狀態(tài),僅有細小的肢體運動。采用上海吉量軟件公司的懸尾測試視頻分析系統(tǒng),用膠帶將小鼠懸掛于距臺面30cm的支架邊緣上,膠帶tt粘貼位置在距小鼠尾尖1cm處。每只小鼠共懸掛5min,記錄其在最后4min的不動時間。小鼠禁食24h后,被放置在一個新的鼠籠內(nèi),底部鋪上厚約1cm的墊料,中心放置已經(jīng)稱重的糧食。放入后,檢測小鼠開始吃食的潛伏時間。以吃食的潛伏期和消耗食物的重量為觀測指標。如果小鼠5min內(nèi)沒有吃食則定義為潛伏時間是5min。小鼠單位時間攝食量(g)=5min內(nèi)消耗糧食重量(g)/小鼠體質(zhì)量(g)。測量結(jié)果以ue0af±s表示,應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件對多組間數(shù)據(jù)進行單因素方差分析,posthoctest選用LSD方法,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。2對小鼠強迫游泳、懸尾的不動時間和攝食刑期的影響結(jié)果顯示,模型母鼠蔗糖消耗百分比較空白對照組顯著減少(P<0.01);YJ組和Ket組母鼠的蔗糖消耗百分比較模型組均明顯增多(P<0.01,P<0.01),YJ組與Ket組無顯著性差異。與模型組比較,Flx組無顯著性差異。結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示,模型母鼠強迫游泳及懸尾測試的不動時間明顯增加,與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01,P<0.01);YJ組和Ket組母鼠的不動時間較模型組均顯著降低(P<0.01,P<0.01),YJ組與Ket組無顯著性差異。與模型組比較,Flx組無顯著性差異。結(jié)果見圖2、圖3。結(jié)果顯示,模型母鼠在陌生環(huán)境中攝食中潛伏期顯著延長(P<0.01,見圖4A),單位時間攝食量明顯減少(P<0.01,見圖4B);給予YJ及Ket干預(yù)后,均能明顯縮短攝食潛伏期(P<0.01,P<0.01),增加單位時間攝食量(P<0.01,P<0.01)。YJ組與Ket組無顯著性差異。與模型組比較,Flx組無顯著性差異。結(jié)果見圖4。3ppd治療難治性抑郁癥的常用藥物產(chǎn)后抑郁的病因復雜,與生物、社會、心理等因素密切相關(guān)。有學者發(fā)現(xiàn)PPD與多個風險因子有明顯的關(guān)系,包括心理社會應(yīng)激,不良生活事件,既往和家庭心境障礙史等多方面因素本實驗中,我們采用慢性孕前應(yīng)激對適齡BALB/c雌鼠造模,通過對產(chǎn)后3周母鼠的蔗糖偏好試驗、強迫游泳測試、懸尾測試及陌生環(huán)境攝食測試評估該PPD模型,發(fā)現(xiàn)該模型小鼠出現(xiàn)了快感缺失,興趣下降,行為絕望以及伴有焦慮現(xiàn)象,這與PPD患者的臨床癥狀極為相似,因此模型的建立是成功的。常規(guī)的PPD西醫(yī)治療主要包括心理治療和抗抑郁藥物治療。選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(Se-lectiveSerotoninReuptakeInhibitor,SSRIs)類是目前抗抑郁治療中應(yīng)用較多的一線抗抑郁藥物。氟西汀是SSRIs類代表藥物,但其臨床上存在起效緩慢、影響哺乳等不良反應(yīng),且有三分之一的病人對其無治療反應(yīng)NMDAR(N-methyl-D-aspartateReceptor)的拮抗劑氯胺酮目前被公認為是可用于治療難治性抑郁、具有快速抗抑郁作用的藥物近代中醫(yī)認為產(chǎn)后抑郁癥可歸屬于中醫(yī)“郁病”范疇。產(chǎn)后抑郁病因復雜,幾種病因又相兼為病,虛實夾雜,以郁為主。同時現(xiàn)代女性由于受家庭、生活等方面的壓力,郁證尤多,出現(xiàn)“六郁并集、諸郁并見”的病因病機。這與朱丹溪對于郁證的認識相同。丹溪指出:“氣血沖和,萬病不生,一有怫郁,諸病生焉”并創(chuàng)立了越鞠丸。《丹溪心法》云:“越鞠丸,解諸郁”。該方由蒼術(shù)、川芎、香附、神曲、山桅組成,專為郁病而設(shè),重在理氣解郁,兼顧六郁。古往今來越鞠丸作為治療抑郁癥的經(jīng)典方劑,許多學者對其進行了研究。于雷總之,孕前應(yīng)激誘導的PPD小鼠模型是一種具有實驗研究價值的PPD動物模型。常規(guī)抗抑郁藥物氟西汀的慢性給藥對該模型無明顯治療作用,提示該模型可能是一種難治性抑郁模型。而YJ對PPD小鼠模型具有與氯胺酮相似的快速抗抑郁作用,提示越鞠丸可用于治療難治性抑郁。本研究為快速治療PPD的中藥新藥研發(fā)提供了依據(jù),可以更好地指導產(chǎn)后抑郁癥的治療。1.1實驗動物1.2yj提取儀式1.3測試試劑1.4.1動物組和模型的準備1.4.2.1.甘蔗偏好試驗spt1.4.2.2.強制游泳試驗fst