生物化學之核酸的結構與功能專家講座

第四章核酸結構與功效

第一節(jié)核酸化學組成

第二節(jié)核苷酸結構第三節(jié)核酸一級結構

第四節(jié)DNA結構與功效

第五節(jié)RNA空間結構與功效

第六節(jié)核酸理化性質及應用

第七節(jié)核酸酶生物化學之核酸的結構與功能專家講座第1頁核酸研究歷史：

1868年，瑞士外科醫(yī)生FridrichMiescher從膿細胞核中分離到核酸樣物質。

1944年，OswaldAvery經(jīng)過肺炎雙球菌轉化試驗證實了DNA是遺傳物質基礎。

核酸分為DNA和RNA。DNA存在于細胞核和線粒體內，RNA存在于細胞質和細胞核內。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第2頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第3頁第一節(jié)核酸化學組成核酸是一個線形多聚核苷酸。核酸在核酸酶作用下水解為核苷酸，所以核酸基本單位是：核苷酸。核苷酸由堿基、戊糖和磷酸組成。核苷酸磷酸核苷堿基戊糖核酸核糖脫氧核糖嘌呤嘧啶生物化學之核酸的結構與功能專家講座第4頁堿基+戊糖 核苷+磷酸核苷酸 poly

聚合核酸(核苷酸之間經(jīng)過3

,5-磷酸二脂鍵連接)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第5頁按戊糖不一樣，可分：1、脫氧核糖核酸（DNA）：分布于細胞核中，為染色體主要成份。D-2-脫氧核糖；磷酸；堿基（腺嘌呤，鳥嘌呤，胞嘧啶，胸腺嘧啶）2、核糖核酸：（RNA）：分布于細胞質和核仁中。D-核糖；磷酸；堿基（腺嘌呤，鳥嘌呤，胞嘧啶，尿嘧啶）生物化學之核酸的結構與功能專家講座第6頁戊糖核糖脫氧核糖生物化學之核酸的結構與功能專家講座第7頁核酸主要性1、DNA是遺傳物質，是遺傳信息載體：DNA→RNA→多肽中氨基酸組成和次序（中心法則）2、DNA以本身半保留復制方式把遺傳信息一代一代傳遞下去；3、核酸研究在醫(yī)學、農(nóng)學等生命科學中發(fā)揮主要作用；4、基因工程進行DNA重組，將創(chuàng)造出自然界原來沒有新品種。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第8頁第二節(jié)核苷酸結構一、堿基1、嘧啶堿：在嘧啶2位碳原子上由酮基取代H，4位碳原子上有氨基或酮基取代H嘧啶(pyrimidine)胞嘧啶（2-氧，4-氨基嘧啶）Cytosine(C)尿嘧啶(2，4-二氧嘧啶)Uracil(U)胸腺嘧啶（5-甲基尿嘧啶）Thymine(T)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第9頁另外還有：5-甲基胞嘧啶，5-羥甲基胞嘧啶，5,6-雙氫尿嘧啶，假尿嘧啶。Ψ假尿嘧啶核苷DHU:雙氫尿嘧啶生物化學之核酸的結構與功能專家講座第10頁2、嘌呤堿：在嘌呤2位或6位碳原子上H被氨基或酮基取代

另外還有：N6-甲基腺嘌呤，7-甲基鳥嘌呤等（p.479，表13-2）。嘌呤(purine)腺嘌呤(6-氨基嘌呤)Adenine(A)鳥嘌呤(2-氨基6-氧嘌呤)Guanine(G)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第11頁7-甲基鳥嘌呤mG：甲基鳥嘌呤核苷生物化學之核酸的結構與功能專家講座第12頁

在DNA和RNA中都有腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）和胞嘧啶（C）。胸腺嘧啶（T）只出現(xiàn)在DNA分子中，尿嘧啶（U）則只出現(xiàn)于RNA分子中。

嘌呤嘧啶核糖磷酸DNAA，GC，T脫氧核糖磷酸RNAA，GC，U核糖磷酸兩類核酸分子組成比較

嘌呤、嘧啶環(huán)上因為有共軛雙鍵，在260nm波長附近對紫外光有較強吸收。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第13頁二、核苷由核糖和堿基之間以糖苷鍵（C-N糖苷鍵）縮合而成。連接方式是嘌呤環(huán)上N-9或嘧啶環(huán)上N-1與糖C-1’以糖苷鍵相連。

β-構型（1位羥基在環(huán)上面）。

核糖核苷：腺嘌呤核苷、鳥嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷（p.480，表13-3）脫氧核糖核苷：腺嘌呤脫氧核苷、鳥嘌呤脫氧核苷、胞嘧啶脫氧核苷、胸腺嘧啶脫氧核苷（假尿嘧啶核苷：核糖與尿嘧啶第5位碳原子形成C-C糖苷鍵）腺嘌呤核苷（腺苷）核苷=核糖+堿基生物化學之核酸的結構與功能專家講座第14頁胞嘧啶脫氧核苷（脫氧胞苷）生物化學之核酸的結構與功能專家講座第15頁三、核苷酸

核苷中戊糖羥基（主要是5位上）被磷酸酯化，形成核苷酸（p.481，表3-4）。核糖核苷酸：腺嘌呤核苷酸（AMP）、鳥嘌呤核苷酸（GMP）、胞嘧啶核苷酸（CMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）脫氧核糖核苷酸：腺嘌呤脫氧核苷酸（dAMP）、鳥嘌呤脫氧核苷酸（dGMP）、胞嘧啶脫氧核苷酸（dCMP）、胸腺嘧啶脫氧核苷酸（dTMP）核糖核苷酸在2、3、5位上都有一個自由羥基，能各自被磷酸酯化；脫氧核糖核苷酸在2位上沒有羥基，故只有3、5能被磷酸酯化。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第16頁四、多磷酸核苷酸核苷與一個磷酸產(chǎn)生磷酸酯化核苷酸，稱為核苷單磷酸（NMP）；核苷單磷酸深入磷酸化，形成核苷二磷酸（NDP）和核苷三磷酸（NTP）。

磷酸之間焦磷酸鍵含有很高能量，稱為高能鍵（~），是生物體內能量利用和貯存主要物質（1卡/每克分子高能鍵）。核苷二磷酸：ADP、GDP、CDP、UDP

核苷三磷酸：ATP、GTP、CTP、UTP

脫氧核苷二磷酸：dADP、dGDP、dCDP、dTDP

脫氧核苷三磷酸：dATP、dGTP、dCTP、dTTP生物化學之核酸的結構與功能專家講座第17頁核苷酸=核苷+磷酸

磷酸基團位于核糖第五位碳原子C-5’上。

NMP（nucleosidemonophosphate)

NDP(nucleosidediphosphate)

NTP(nucleosidetriphosphate)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第18頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第19頁五、環(huán)化核苷酸類（3,5’-環(huán)狀腺苷酸，cAMP）由腺苷酸上磷酸與核糖3’，5’碳原子形成雙脂環(huán)化而成，其中3’位磷酸酯鍵為高能鍵：

由腺苷酸環(huán)化酶催化ATP脫去一分子焦磷酸而環(huán)化成cAMP；它又可被專一性磷酸二酯酶水解成5’-AMP。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第20頁六、核苷酸性質

1、紫外吸收：嘌呤堿和嘧啶堿含有共軛雙鍵，所以使得堿基、核苷和核苷酸在240~290nm紫外波段有強烈吸收峰，最大吸收值在260nm附近。

2、互變異構作用：凡含有酮基嘧啶或嘌呤堿，在溶液中可發(fā)生酮式和烯醇式互變異構現(xiàn)象：

在生物細胞內普通是以酮式存在（這對核酸中氫鍵結構形成十分主要）。酮式烯醇式胞嘧啶（2-氧，4-氨基嘧啶）Cytosine(C)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第21頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第22頁第三節(jié)核酸一級結構

一級結構指其核苷酸排列次序。因為核苷酸間差異主要是堿基不一樣，也稱堿基序列。

DNA：四種脫氧核苷酸按一定次序以磷酸二酯鍵相連形成聚脫氧核苷酸鏈（polydeoxynucleotides）。

DNA書寫次序是5‘——3’。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第23頁DNA一級結構生物化學之核酸的結構與功能專家講座第24頁5’末端磷酸基團3‘，5’-磷酸二酯鍵3‘末端羥基生物化學之核酸的結構與功能專家講座第25頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第26頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第27頁第四節(jié)DNA結構與功效一、DNA二級結構研究史

二十世紀二十年代，Levene研究了核酸化學結構并提出了四核苷酸假說。他認為DNA分子是由A、G、C、T4種核苷酸不停重復延伸而成。

二十世紀五十年代初，Chargaff采取層析和紫外吸收分析等技術研究了DNA分子堿基組成，發(fā)覺不一樣物種DNA堿基組成不一樣，并總有[A]=[T]；[C]=[G]。

1953年，Watson和Crick以Chargaff發(fā)覺為基礎，進行DNA晶體X-射線衍射圖譜研究，提出了DNA雙螺旋結構。1962年，Watson（美）和Crick（英）與Wilkins共享Nobel生理醫(yī)學獎，Wilkins經(jīng)過對DNA分子X-射線衍射研究證實了Watson和CrickDNA模型。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第28頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第29頁DNA二級結構(雙螺旋)

1953年，Watson和Crick提出DNA雙螺旋結構生物化學之核酸的結構與功能專家講座第30頁二、DNA雙螺旋結構關鍵點1、Watson-Crick模型模型特征：雙螺旋：兩條反向平行多核苷酸鏈圍繞同一中心軸相互纏繞，而且均為右手螺旋；雙螺旋結構上有二條螺形凹溝：一條較深，稱大溝；一條較淺，稱小溝?；鶊F位置：堿基位于雙螺旋內側，且其平面與縱軸垂直；磷酸與核糖位于雙螺旋外側，彼此經(jīng)過3’,5’-磷酸二酯鍵相連，形成DNA分子骨架，且糖環(huán)平面與縱軸平行?；鶊F走向：多核苷酸鏈方向取決于磷酸二酯鍵走向，習慣上以C’3→C’5為正向。尺度：雙螺旋平均直徑為2nm。兩個相鄰堿基之間相距高度（堿基堆積距離）為0.34nm，兩個核苷酸之間夾角為36o。所以，沿中心軸每旋轉一周有10個核苷酸，每一轉高度（螺距）為3.4nm。堿基在一條鏈上排列次序不受任何限制，但依據(jù)堿基配對標準，當一條鏈序列確定后，可決定另一條互補鏈序列。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第31頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第32頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第33頁

氫鍵：兩條核苷酸鏈依靠彼此堿基之間氫鍵相連而結合在一起：

A與T相配對，形成兩個氫鍵：A（N6）--T（O4）

A（N1）--T（N3）

G與C相配對，形成三個氫鍵：G（N2）--C（O2）

G（N1）--C（N3）

G（O6）--C（N4）上述堿基之間配對標準，稱之為堿基互補。T==AC≡≡G生物化學之核酸的結構與功能專家講座第34頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第35頁2、Dickerson十二聚體（人工合成）補充：（1）兩個核苷酸之間夾角并非都是36，可由28至42不等，實際平均每一螺周含10.4個堿基對；（2）組成堿基正確兩個核苷酸分布并非在同一平面上，而是堿基對沿長軸旋轉一定角度，從而使堿基正確形狀像螺旋槳葉片樣子，故稱為螺旋槳狀扭曲。這可提升堿基堆積力，使DNA結構更穩(wěn)定；（3）維持DNA二級結構作用力：氫鍵、堿基堆積力。后者為維持二級結構主要作用力。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第36頁三、DNA結構多樣性DNA右手螺旋并不是自然界DNA唯一存在方式。右手螺旋結構是在生理鹽水溶液中提取DNA結構，當前將這種結構稱為B-DNA。1979年，AlexanderRich發(fā)覺了左手螺旋，稱為Z-DNA，另外也有A-DNA存在。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第37頁1、C-3’內式和C-2’內式是指呋喃核糖信封式構象中C3還是C2指向C5，見p14圖1-13；2、糖苷鍵構象：嘌呤六元環(huán)或嘧啶O2指向。遠離糖為反式，指向糖為順式。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第38頁嘌呤六元環(huán)順式嘧啶O2環(huán)順式生物化學之核酸的結構與功能專家講座第39頁四、DNA三級結構DNA三級結構指DNA雙螺旋經(jīng)過扭曲和折疊所形成特定構象，包含不一樣二級結構單元間相互作用、單鏈與二級結構單元間相互作用以及DNA拓撲特征。超螺旋是DNA三級機構一個形式。環(huán)形DNA：大部分原核生物DNA是共價封閉環(huán)狀雙螺旋。包含：一些病毒、噬菌體、細菌質粒、真核生物線粒體和葉綠體、細菌染色體DNA。線形DNA兩端有粘末端，也可借助DNA連接酶將互補粘末端連接成環(huán)形DNA。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第40頁超螺旋結構1、超螺旋形成原因：當DNA雙螺旋分子以一定構象自由存在時，是處于能量最低狀態(tài)，為松弛型；假如額外多轉或少轉幾圈，就會使雙螺旋中存在張力。當雙螺旋分子末端是開放，這種張力能夠經(jīng)過鏈轉動而釋放出來，DNA將恢復正常雙螺旋狀態(tài)；但假如DNA分子兩端是固定，或者是環(huán)狀分子，這種額外張力就不能釋放掉，DNA分子本身就會發(fā)生扭曲，用以抵消張力。這種扭曲稱為超螺旋（雙螺旋螺旋）。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第41頁2、拓撲學特征：（1）連環(huán)數(shù)：在雙螺旋中，一條鏈以右手螺旋繞另一條鏈纏繞次數(shù)，以L表示；（2）扭曲數(shù)：DNA分子中Watson-Crick螺旋數(shù)目（螺周數(shù)），以T表示；（3）超螺旋數(shù)：雙螺旋鏈再扭曲成螺旋周數(shù)，以W表示。三者關系：L=T+WL值必須是整數(shù)。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第42頁3、負超螺旋：設一段260bp，螺周數(shù)為25DNA。1）當將此線形DNA連接成環(huán)形時，此環(huán)形DNA稱為松弛型DNA：

L=25T=25W=02）當將此線形DNA螺旋先擰松兩周（其它周內螺旋不解鏈），再連接成環(huán)形時，可形成兩種環(huán)形DNA：（1）解鏈環(huán)形DNA：L=23T=23W=0（含有一個解鏈后形成突環(huán)）（2）超螺旋DNA：L=23T=25W=-2（為負超螺旋）生物化學之核酸的結構與功能專家講座第43頁真核生物：DNA和蛋白質組裝成染色體，染色體基本單位是核小體。核小體由DNA和組蛋白組成。組蛋白有H1，H2A，H2B，H3和H4。

H2A，H2B，H3和H4各兩分子組成核小體關鍵，稱為組蛋白八聚體。DNA雙螺旋分子纏繞在八聚體上組成核小體關鍵顆粒。核小體關鍵顆粒之間再由DNA和組蛋白H1組成連接區(qū)連接起來形成串珠狀結構。核小體深入旋轉折疊形成棒狀染色體，快要1m長DNA分子容納于直徑只有數(shù)微米細胞核中。核小體結構模式圖生物化學之核酸的結構與功能專家講座第44頁真核染色不一樣層次結構模型生物化學之核酸的結構與功能專家講座第45頁DNA功效

DNA基本功效：用為生物遺傳信息復制模板和基因轉錄模板，它是遺傳繁殖物質基礎。

基因組（genome）：一個生物體全部基因序列。最簡單生物如SV40病毒基因組僅含有5100堿基對（basepairbp），大腸桿菌基因組大小為5700千堿基對（kbp），人基因組則由大約3.0×109個bp組成。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第46頁第五節(jié)RNA空間結構與功效一、結構特點

1、堿基組成：AMP、GMP、CMP、UMP，還有一些稀有堿基；

2、戊糖是核糖；

3、天然RNA是單鏈線形分子，只有局部區(qū)域為鏈內雙螺旋（單鏈分子本身回折使得互補堿基配對而形成，不配正確區(qū)域形成突環(huán)）。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第47頁核糖核酸(RNA)分為信使RNA(mRNA) 轉運RNA(tRNA) 核糖體RNA(rRNA)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第48頁二、類型1、信使RNA結構與功效信使RNA（messengerRNA，mRNA）不均一核RNA（heterogeneounuclearRNA，hnRNA）：在細胞核內合成mRNA初級產(chǎn)物，經(jīng)過剪接成為成熟mRNA并移到細胞質。真核生物成熟mRNA結構特點：（1）5‘端帽子結構（capsequence)：m’GpppNm.

帽子結構能促進核糖體與mRNA結合，加速翻譯起始速度,同時能夠增強mRNA穩(wěn)定性。（2）3’末端多聚A尾巴?？赡芘cmRNA從核內向胞質轉位及mRNA穩(wěn)定相關。

mRNA功效是把核內DNA堿基次序按照堿基互補標準，抄錄并轉送至胞質，指導蛋白質合成。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第49頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第50頁2、轉運RNA結構與功效

轉運RNA（transferRNA，tRNA）是細胞內分子量最小一類核酸，其功效是在細胞蛋白質合成過程中作為各種氨基酸載體。tRNA特點：1、tRNA分子中含有10~20%稀有堿基，包含雙氫尿嘧啶（DHU）、假尿嘧啶（Ψ）和甲基化嘌呤（mG，mA）。mG：甲基鳥嘌呤核苷I：次黃嘌呤核苷生物化學之核酸的結構與功能專家講座第51頁Ψ假尿嘧啶核苷DHU:雙氫尿嘧啶生物化學之核酸的結構與功能專家講座第52頁2、tRNA中存在一些能局部互補配正確區(qū)域，能形成局部雙鏈，進而形成一個莖-環(huán)狀或發(fā)夾結構，因為莖環(huán)結構存在，使tRNA形成了三葉草形二級結構。3、tRNA共同三級結構：倒L型。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第53頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第54頁

結構：（1）氨基酸臂：由7對堿基組成，3’末端為-CCA，接收活化氨基酸；（2）二氫尿嘧啶環(huán)：由8-12個堿基組成，含有兩個二氫尿嘧啶；（3）反密碼子環(huán)：由7個堿基組成，環(huán)中部有3個堿基組成反密碼子，將由此與mRNA上密碼子配對；（4）額外環(huán)：由3-18個堿基組成，大小不一樣，為tRNA分類依據(jù)之一；（5）TψC環(huán)：由7個堿基組成，含有假尿嘧啶。（ψ，psai）生物化學之核酸的結構與功能專家講座第55頁3、核糖體RNA結構與功效核糖體RNA（ribosomalRNA，rRNA），是細胞內含量最多RNA，約占RNA總量80%以上。rRNA與核糖體蛋白共同組成核糖體（ribosome）。傳統(tǒng)認為rRNA是組成核糖體骨架，催化蛋白質肽鍵形成是核糖體蛋白質（大亞基）上肽基轉移酶催化。現(xiàn)在認為核糖體催化肽鍵形成是rRNA，蛋白質只是維持rRNA構象，起輔助作用。大腸桿菌核糖體中有：5SrRNA，16SrRNA，23SrRNA

動物細胞核糖體中有：5SrRNA，5.8SrRNA，18SrRNA，

28SrRNA。小亞基大亞基生物化學之核酸的結構與功能專家講座第56頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第57頁核糖體組成原核生物真核生物核糖體70S80S小亞基30S40SrRNA16S(1542個核苷酸)18S（1874個核苷酸）蛋白質21種(占總重量40%)33種（占總重量50%）大亞基50S60SrRNA23S(2940個核苷酸)28S（4718個核苷酸）5S(120個核苷酸)5.85S(160個核苷酸)5S(120個核苷酸)蛋白質31種(占總重量30%)49種(占總重量35%)生物化學之核酸的結構與功能專家講座第58頁4、其它小分子RNA功效核糖體RNArRNA核糖體組成成份信使RNAmRNA蛋白質合成模板轉運RNAtRNA轉運氨基酸不均一核RNAHnRNA成熟mRNA前體小核RNASnRNA參加HnRNA剪接轉運小核仁RNASnoRNArRNA加工和修飾小胞質RNAScRNA蛋白質內質網(wǎng)定位合成信號識別體組成成份生物化學之核酸的結構與功能專家講座第59頁五、核酶

一些RNA分子本身含有自我催化能力，能夠完成rRNA剪接。這種有催化作用RNA被稱為核酶（Ribozyme）。1989年，美國科學家Altman和Cech因為發(fā)覺核酶而獲Nobel化學獎。

是對傳統(tǒng)觀念一個挑戰(zhàn)。

在醫(yī)學上有特殊用途。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第60頁第六節(jié)核酸理化性質及應用一、核酸普通理化性質多元酸，較強酸性?，F(xiàn)有磷酸基，又有堿性基，故為兩性電解質，在一定pH條件下，可解離而帶電荷，所以都有一定等電點（p.504-506）。DNA為線性高分子極性化合物，粘度極大，而RNA分子遠小于DNA，粘度也小得多。溶于水，不溶于有機溶劑。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第61頁

因為堿基成份紫外吸收特征，DNA和RNA溶液均含有260nm紫外吸收峰?？山?jīng)過測定紫外吸收值來分析核酸含量?？山?jīng)過測定核酸溶液中磷含量W和紫外吸收值，再求出摩爾磷吸光系數(shù)ε(P)來表示溶液中核酸變性是否：

ε(P)=30.98A/WL

（A=光密度，L=比色杯直徑，W=每升中磷重量（克）單鏈多核苷酸ε(P)>雙螺旋多核苷酸ε(P)：增色效應：當核酸變性時，(P)值升高現(xiàn)象減色效應：當核酸復性后，(P)值又降低現(xiàn)象雙螺旋結構使堿基正確電子云發(fā)生重合而降低對紫外光吸收。二、核酸紫外吸收特征生物化學之核酸的結構與功能專家講座第62頁三、DNA變性

DNA變性：在一些理化原因作用下，DNA分子互補堿基對之間氫鍵斷裂，使DNA雙螺旋結構渙散，變成單鏈。監(jiān)測指標為A260改變。

慣用變性方法為加熱。

增色效應（hyperchromiceffect）：DNA解鏈過程中，其A260增加，并與解鏈程度有一定關系。

解鏈曲線：在連續(xù)加熱過程中以溫度對A260關系作圖。

解鏈溫度：DNA變性從開始到完全解鏈是在一個相當窄范圍內完成。在這一范圍內A260到達最大值50%時溫度稱為解鏈溫度，又稱為融解溫度（meltingtemperature，Tm）。

Tm大小與其所含堿基中G+C百分比相關，G+C百分比越高，Tm值越高。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第63頁生物化學之核酸的結構與功能專家講座第64頁四、DNA復性與分子雜交

復性；變性DNA在適當條件下，兩條互補鏈可重新恢復天然雙螺旋構象，稱為復性。熱變性DNA經(jīng)遲緩冷卻后即可復性，也稱為退火（annealing）。

DNA復性速度受溫度影響。復性時溫度遲緩下降才可使其重新配對復性。如加熱后將其快速冷卻至4℃以下，則不可能發(fā)生復性。比Tm低25℃為DNA復性最正確條件。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第65頁

核酸分子雜交(hybridization):加熱雙鏈DNA單鏈DNA雜交雜化雙鏈在DNA復性過程中，雙鏈分子再形成既能夠發(fā)生在序列完全互補核酸分子之間,也能夠發(fā)生在堿基序列部分互補不一樣DNA之間或DNA與RNA之間，這種現(xiàn)象稱為分子雜交。生物化學之核酸的結構與功能專家講座第66頁四、沉降特征在超離心機強大引力場中，不一樣構象核酸沉降速度差異很大：

RNA>閉環(huán)形質粒DNA>開環(huán)形及線形DNA>蛋白質離心后，用注射針頭從離心