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過(guò)氧化物酶的顯示過(guò)氧化物酶的顯示第1頁(yè)【試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)】
掌握聯(lián)苯胺反應(yīng)法顯示細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化物酶原理和方法。過(guò)氧化物酶的顯示第2頁(yè)過(guò)氧化物酶-定義利用過(guò)氧化氫作為電子受體來(lái)催化底物氧化作用酶。
過(guò)氧化物酶的顯示第3頁(yè)【試驗(yàn)原理】細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化物酶能夠催化過(guò)氧化氫氧化聯(lián)苯胺成藍(lán)色或者棕色產(chǎn)物,藍(lán)色為中間產(chǎn)物聯(lián)苯胺藍(lán),很不穩(wěn)定,可自然轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣?lián)苯胺腙,經(jīng)過(guò)產(chǎn)物顏色間接顯示出細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化物酶分布。過(guò)氧化物酶的顯示第4頁(yè)【試驗(yàn)儀器、材料和試劑】光學(xué)顯微鏡;小白鼠、剪刀、鑷子、載玻片、牙簽、吸管。0.5%CuSO4(0.5克CuSO4溶于100ml蒸餾水中)、聯(lián)苯胺混合液(0.1克聯(lián)苯胺在研缽中加少許蒸餾水研成細(xì)漿,加入100ml蒸餾水,過(guò)濾后加入2滴3%雙氧水,放棕色瓶中備用)、1%番紅[1克番紅O(SafranineO)染料溶于100ml蒸餾水中]。過(guò)氧化物酶的顯示第5頁(yè)【試驗(yàn)步驟】
用頸椎脫臼法處死小鼠,剪開大腿上皮膚和肌肉,取出股骨;剪斷或者折斷股骨,用牙簽挑取骨髓,放置于載玻片上制成涂片,晾干;將涂片上滴加幾滴0.5%CuSO4,固定1分鐘;傾去CuSO4溶液,滴加0.1%聯(lián)苯胺混合液,染色6分鐘;用自來(lái)水或蒸餾水沖洗,滴加1%番紅染液(染色細(xì)胞輪廓),染色1分鐘;用自來(lái)水或者蒸餾水沖洗,空氣中晾干,顯微鏡下觀察。過(guò)氧化物酶的顯示第6頁(yè)頸椎脫臼法處死小鼠過(guò)氧化物酶的顯示第7頁(yè)【觀察與結(jié)果】骨髓細(xì)胞內(nèi)能夠見到藍(lán)色或者棕色顆粒,即
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