禽肉中8種多溴聯(lián)苯醚殘留量的測(cè)定

禽肉中8種多溴聯(lián)苯醚殘留量的測(cè)定

[研究意義]多溴異苯醚是溴化合金（pbbs）的一種代阻塞阻滯劑。它通常用作電子、化工、木材、紡織、石油、采礦和其他領(lǐng)域的額外阻滯劑。1材料和方法1.1改性雙溴雙環(huán)[4-2,2]pbde儀器：高速粉碎機(jī)FW80（中國(guó)天津泰斯特儀器有限公司）；快速溶劑萃取儀ASE-300（美國(guó)戴安公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R-300（瑞士Buchi）；渦旋混合器MX-S（中國(guó)東邁科技儀器有限公司）；氮吹儀N-EVAP-112（美國(guó)Organomation）；氣相色譜儀6890N（美國(guó)安捷倫公司），配電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；破壁料理機(jī)JYL-C022E（中國(guó)九陽(yáng)股份有限公司）；真空冷凍干燥機(jī)Pilot2-4LD（中國(guó)北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。試劑：正己烷、壬烷、二氯甲烷均為農(nóng)殘級(jí)，購(gòu)于迪馬科技有限公司；丙酮為農(nóng)殘級(jí)購(gòu)自于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司；硅膠（75～250μm）購(gòu)于上海懷聰生物科技有限公司。PBDEs標(biāo)準(zhǔn)溶液，包括2,2’,4,4’-四溴二苯醚（BDE-47,CAS:5436-43-1,50.0mg/L;2,2’,4,4’,5-五溴二苯醚（BDE-99,CAS:60348-60-9,50.0mg/L);2,2’,4,4’,5,5’-六溴二苯醚（BDE-153,CAS:68631-49-2,50.0mg/L);2,2’,3,4’,4,5’,6’-七溴二苯醚（BDE-183,CAS:207122-16-5,50.0mg/L）；十溴二苯醚（BDE-209,CAS:1163-19-5,50.0mg/L);3-甲氧基-2,2’,4,4’-四溴二苯醚（3-MeO-BDE-47,CAS:N/A,50.0mg/L);5-甲氧基-2,2’,4,4’-四溴二苯醚（5-MeO-BDE-47,CAS:N/A,50.0mg/L);6-甲氧基-2,2’,4,4’-四溴二苯醚（6-MeO-BDE-47,CAS:N/A,10.0mg/L）均購(gòu)自美國(guó)AccuStandard公司。混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：將8種PBDEs的標(biāo)準(zhǔn)溶液用壬烷逐級(jí)稀釋混合配制成1mg/L的8種PBDEs的標(biāo)準(zhǔn)工作液并保存于-20oC冰箱內(nèi)，有效期6個(gè)月。酸性硅膠柱的制備：取一定量100目～200目事先經(jīng)550oC活化12h并干燥保存的活性硅膠，將濃硫酸按照與硅膠質(zhì)量比為11∶14和3∶7的比例逐滴與硅膠充分混合并振蕩，直至獲得均勻的混合物，分別制得44%酸性硅膠和30%酸性硅膠；取一定量無(wú)水硫酸鈉660oC干燥不少于6h保存；于內(nèi)徑為15mm的層析柱，依次裝入1g活性硅膠、10g44%酸性硅膠、2g30%酸性硅膠、2g活性硅膠和6g無(wú)水硫酸鈉，干法裝柱。1.2方法1.2.1冷凍干燥禽肉樣品用破壁料理機(jī)攪拌成漿狀，置于真空冷凍干燥機(jī)中于-20oC、真空度為1Pa條件下冷凍干燥72h，再用高速粉碎機(jī)將樣品打碎成粉末，置于-20oC冰箱中保存。1.2.2萃取條件及溫度準(zhǔn)確稱取5.0g試樣于燒杯中，與10.0g無(wú)水硫酸鈉混合均勻，轉(zhuǎn)移至加速溶劑萃取池中進(jìn)行提取。提取條件為萃取溶劑，正己烷∶二氯甲烷=1∶1(v/v）；壓力，10.3MPa(1500psi）；溫度，100oC；加熱時(shí)間，5min；靜態(tài)提取時(shí)間，8min；吹掃時(shí)間120s循環(huán)3次。樣品提取液轉(zhuǎn)移至平底燒瓶中，用少量正己烷分3次清洗接收瓶，并將提取液旋蒸濃縮至近干，加5mL正己烷復(fù)溶，待凈化。1.2.3酸性硅膠柱洗脫用30mL正己烷預(yù)淋洗酸性硅膠柱后，將待凈化液加入柱中，并用3mL正己烷清洗3次，清洗液一并加入柱中，當(dāng)液面接近凈化柱最上層，再用80mL正己烷∶二氯甲烷=1∶1(v/v）對(duì)酸性硅膠柱進(jìn)行洗脫，收集上樣液和洗脫液，旋蒸濃縮至3～5mL轉(zhuǎn)移至試管，3mL正己烷清洗3次，氮?dú)獯蹈桑?00μL壬烷復(fù)溶待測(cè)。1.2.4氮?dú)鈾z測(cè)條件色譜柱：HP-5(30m×320μm×0.25μm）。升溫程序：初始柱溫140℃，保持2min；再以25℃/min升至180℃，保持5min；再以5℃/min升至260℃，保持5min；最后以15℃/min升至310℃，保持10min。載氣為高純氮?dú)?，流速?mL/min；檢測(cè)器300℃；進(jìn)樣量1μL，進(jìn)樣口溫度：265℃。進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣。2結(jié)果與分析2.1機(jī)器條件優(yōu)化本研究初始?xì)庀鄺l件參考由宗政等2.2酸性硅膠柱的制備在PBDEs的檢測(cè)方法中，生物樣品中的大量油脂和雜質(zhì)主要是通過(guò)濃硫酸、GPC和固相萃取柱來(lái)去除。樣品中直接添加濃硫酸，除脂能力最強(qiáng)，但其可能會(huì)引起化合物的不穩(wěn)定，且操作較為危險(xiǎn)；GPC除脂效果顯著，但是除脂能力有限，普通凈化柱只能去除0.5g左右脂肪，超過(guò)這個(gè)脂肪量則會(huì)引起柱堵塞；固相萃取小柱重現(xiàn)性好且適合批量生產(chǎn)，但是普通規(guī)格的小柱除脂能力較難達(dá)到本研究的要求。因此本文結(jié)合濃硫酸和固相萃取柱的優(yōu)點(diǎn)，參考EPA1614的復(fù)合硅膠柱的制作方法，制成酸性硅膠柱，為達(dá)到最佳的凈化效果，本文對(duì)酸性硅膠柱的洗脫條件進(jìn)行了摸索。以標(biāo)準(zhǔn)品配制含100μg/L的8種多溴聯(lián)苯醚的提取液上凈化柱，選用正己烷和正己烷∶二氯甲烷（1∶1,v/v）作為洗脫溶劑，分段收集洗脫液，每段收集20mL，測(cè)定洗脫液，結(jié)果見圖3。結(jié)果采用正己烷洗脫時(shí)，80mL能將BDE-47、BDE-99、BDE-153、BDE-183基本洗脫下來(lái)，但MeO-BDE由于極性較弱無(wú)法洗脫，而以以正己烷∶二氯甲烷（1∶1）作為洗脫溶劑，60mL能夠基本洗脫，80mL可以完全洗脫，因此本研究確定以正己烷∶二氯甲烷（1∶1）作為方法的洗脫溶劑，洗脫體積為80mL。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制移取1mg/L的PBDEs混合標(biāo)液，壬烷逐級(jí)稀釋，配制質(zhì)量濃度分別為0.5,1,2,20,50,100,200,500μg/L的PBDEs標(biāo)準(zhǔn)工作液，氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖2，以橫坐標(biāo)作為質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)作為響應(yīng)峰面積，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，8種PBDEs具有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1。采用優(yōu)化的前處理方法和儀器條件，進(jìn)行一系列低水平加標(biāo)回收試驗(yàn)，以3倍和10倍信噪比（S/N）來(lái)確定檢出限（LOD）和定量限（LOQ），結(jié)果，BDE-209的檢出限（LOD）為0.125μg/kg其余7種PBDEs的檢出限為0.025μg/kg;BDE-209的定量限（LOQ）為0.4μg/kg其余7種PBDEs的定量限為0.1μg/kg。目前國(guó)內(nèi)外尚未規(guī)定食品中PBDEs的限量標(biāo)準(zhǔn)，但EPA規(guī)定商用十溴聯(lián)苯醚每日可攝入計(jì)量為10μg/kg；商用八溴聯(lián)苯醚每日可攝入計(jì)量為3μg/kg；商用五溴聯(lián)苯醚每日可攝入計(jì)量為2μg/kg，按照可攝入量計(jì)量要求，本方法的檢出限應(yīng)能滿足PBDEs的檢測(cè)要求。且與一些相關(guān)的研究報(bào)道相比較，例如李敏潔2.4準(zhǔn)確度和精密度以空白雞肉樣品為代表進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，設(shè)置方法定量限以及1.0μg/kg和10.0μg/kg3個(gè)水平，每個(gè)水平重復(fù)5次，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照，按照本研究建立的前處理方法和儀器方法進(jìn)行檢測(cè)，用基質(zhì)標(biāo)定量，計(jì)算回收率和精密度（RSD）。添加回收結(jié)果見表2。從表2中可以看出8種PBDEs在雞肉中的平均加標(biāo)回收率為66.0%～146.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8%～11.4%。本方法的準(zhǔn)確度