多不飽和脂肪酸對鴨脂質(zhì)和srebp1基因表達的影響

多不飽和脂肪酸對鴨脂質(zhì)和srebp1基因表達的影響

固醇調(diào)節(jié)元、蛋白質(zhì)是控制脂肪合成和脂質(zhì)吸收的重要因素。這些蛋白的前體被定位在含有蛋白質(zhì)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上。當醇水平降低時，srebps轉(zhuǎn)移到高爾基體，成熟的蛋白體被酶釋放，成熟的srebps進入心臟，并與含有sre元素基因的啟動子結(jié)合開始旋轉(zhuǎn)。1材料和方法1.1組試驗結(jié)果同批出雛的櫻桃谷母鴨90只,2周齡隨機分成3個組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)10只。Ⅰ組:基礎(chǔ)飼糧;Ⅱ組:基礎(chǔ)飼糧+4%亞油酸;Ⅲ組:基礎(chǔ)飼糧+4%二十碳五烯酸,試驗過渡期7d,試驗期49d。參照蘭云賢1.2rarnasoregant和tiwscriprtk的設(shè)計TotalRNA提取試劑(TaKaRaRNAisoReagent)和TIANscriptRTKit購自大連寶生物工程有限公司;Hieff1.3重復(fù)2只櫻桃谷鴨的肝臟4、6、8周齡時,無菌條件下采集各處理組每個重復(fù)1只櫻桃谷鴨的肝臟;10周齡時翅靜脈采血后全部屠宰,屠宰過程按《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T823-2004)1.4肌肉肌內(nèi)脂肪酸檢測采集10周齡櫻桃谷鴨胸肌和腹脂,計算腹脂的百分比,索氏抽提法提取胸肌肌內(nèi)脂肪,氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測定飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸和必需脂肪酸;分離10周齡櫻桃谷鴨的血清(無抗凝劑),根據(jù)試劑盒操作說明測定血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。1.5實時熒光定量pcr檢測以鴨1.6處理數(shù)據(jù)根據(jù)22結(jié)果與分析2.1引物的pcr擴增用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的總RNA和2對引物的PCR產(chǎn)物(圖1),可見擴增條帶28S和18S清晰(圖1-A),28S條帶比18S亮,且含量幾乎是18S的2倍,OD2.2檢測產(chǎn)物的基因型化和定量檢測利用合成的2對引物進行實時熒光定量PCR檢測,結(jié)果見圖2。由圖2可見,β-Actin和SREBP1基因擴增熔解曲線效果良好,無其他非特異雜峰,表明2對引物用于定量檢測時不會擴增出其他非特異性產(chǎn)物而影響定量結(jié)果。2.3多飽和脂肪酸和支撐脂肪酸組p1分析3個處理組櫻桃谷鴨脂肪沉積指標的差異,結(jié)果見表2。由表2可知:II組的飽和脂肪酸顯著低于I組(P<0.05),多不飽和脂肪酸和必需脂肪酸顯著高于I組(P<0.05);II組的甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白均顯著高于I組(P<0.05),表明飼糧中添加亞油酸和二十碳五烯酸可影響機體脂肪酸組成,引起甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白的升高,且亞油酸的影響效果比二十碳五烯酸強,但對腹脂、肌內(nèi)脂肪、不飽和脂肪酸、低密度脂蛋白影響卻不明顯。2.4不同脂肪酸對鴨srebp1基因表達的影響通過檢測3個處理不同周齡櫻桃谷鴨肝臟SREBP1基因mRNA表達水平(表3)表明,3個處理組SREBP1基因的表達隨周齡的增加而增加,I組各周齡的表達量均顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.05),Ⅱ組和Ⅲ組差異不顯著(P>0.05),表明飼糧中添加2種脂肪酸均對鴨SREBP1基因表達有抑制作用。2.5回汁添加量選擇櫻桃谷鴨SREBP1基因表達對Ⅰ組脂質(zhì)指標的相關(guān)性分析結(jié)果見表4。由表4可知,SREBP1基因mRNA表達量除與飽和脂肪酸、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白不相關(guān)外(P>0.05),與其他7個指標顯著相關(guān)(P<0.05)。3脂肪酸和指標SREBP1是調(diào)控肝臟脂質(zhì)動態(tài)平衡的重要轉(zhuǎn)錄因子,可激活多種參與脂肪酸和甘油三酯合成酶的轉(zhuǎn)錄,包括乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰輔酶A去飽和酶-1(stearlycoenzymeadesaturase-1,SCD-1)等本研究結(jié)果表明,櫻桃谷鴨飼糧中添加亞油酸和二十碳五烯酸可引起機體胸肌中飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸、