大腸桿菌的分離鑒定

大腸桿菌的別離鑒定、藥敏實驗及生化實驗目的要求熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理了解大腸桿菌的主要生理生化特性一、鑒別培養(yǎng)培養(yǎng)基類別菌種別離鑒定---麥康凱培養(yǎng)基原理：在培養(yǎng)基中含有膽鹽，可抑制大局部革蘭氏陽性菌的生長，培養(yǎng)基含乳糖，大腸桿菌能別離乳糖，使pH下降〔中性指示劑5.5--7.5，紅--黃〕形成紅色菌落，而沙門氏菌和志賀氏菌，不能分解乳糖，菌落小且為無色術式

兩試管斜面移植時，左手斜持菌種管和被接種管，管口相齊，管底放在拇指和食指間，松動兩管棉塞，將管口進行火焰滅菌，使其靠近火焰，將接種環(huán)深入管內，先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻，再挑取少量的細菌后，拉出接種環(huán)，立即伸入另一管斜面培養(yǎng)基上，勿碰到斜面和管壁，直達斜面底部，從底部開始劃曲線，向上到斜面頂端，管口火焰滅菌，塞好棉塞，接種完畢。接種環(huán)火焰滅菌后，放下接種棒最后在斜面管壁上注明日期、接種者。置370C，溫箱培養(yǎng)結果判定鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色圓形，扁平，邊緣整齊，外表光滑，濕潤二、藥敏試驗方法：取一菌種，用滅菌的接種環(huán)致密劃線于瓊脂外表〔可重復來回劃線〕，用無菌鑷子，將各種抗菌藥物圓紙片，分別貼于培養(yǎng)基外表。各片距離相等，370C，24h后，觀察結果。藥敏結果判定抑菌直徑〔mm〕敏感性>20極敏感15-20高敏感10-14中敏感<10低敏感0不敏感三、生化實驗

1糖發(fā)酵試驗原理：各種細菌具有不同的酶，有的細菌能分解某些糖類而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的細菌雖能分解某種糖類，但只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，有的細菌則不能分解。從而鑒別細菌。方法：將需要鑒別的細菌純培養(yǎng)物，分別接種在各種含指示劑的糖發(fā)酵管內，將發(fā)酵管倒置與370C溫箱內培養(yǎng)24h結果：培養(yǎng)液不變色----無變化〔—〕培養(yǎng)液變?yōu)辄S色----產(chǎn)酸〔+〕培養(yǎng)液變黃并有氣泡----產(chǎn)酸產(chǎn)氣〔+〕2硫化氫試驗原理：某些細菌能別離蛋白質中的含硫氨基酸，生成硫化氫，遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色的沉淀物。方法：將需要鑒別的細菌純培養(yǎng)物，分別接種在硫化氫培養(yǎng)基中，370C溫箱內培養(yǎng)24h結果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不產(chǎn)生黑色為陰性。大腸桿菌為陰性，沙門氏菌為陽性3硝酸鹽復原實驗原理：有些細菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽復原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽與對位氨基苯磺酸起作用后，在與α-萘胺反響，生成紅色偶氮化合物。方法：將被檢細菌接種于硝酸鈉蛋白胨培養(yǎng)基內，370C溫箱內培養(yǎng)24h。結果