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第二節(jié)工程的原理和技 限制性內(nèi)切酶運(yùn)載體或載體提出問題)﹙先解決為什么要分五個(gè)步驟的問題,然后解決每一步驟的技術(shù)方法問題。學(xué)生活動(dòng))引導(dǎo)學(xué)生看本專題題圖中工程的概念:“工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外重組和轉(zhuǎn)等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符符合人們需要”,就是目的,那么更符合人們需要的那個(gè)就是目的了。有了目的基因,才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。學(xué)生活動(dòng))思考:單獨(dú)的片段──目的是不能穩(wěn)定遺傳的。課文中談到構(gòu)建表達(dá)載體的目的是為了使目的在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時(shí)使目的基學(xué)生活動(dòng))思考討論:這是因?yàn)槟康氖欠裾嬲荏w細(xì)胞的中,是否能夠在受體(問題引入)“目的的獲取”有什么方法呢?你能推測出由mRNA反轉(zhuǎn)錄形成c的過(總結(jié)歸納1970年,特明H.M.Temin)和巴爾的摩D.Baltimore)證實(shí)了RNA中含有一種能RNA轉(zhuǎn)錄成 的酶,這種酶被稱為依賴RNA的 聚合酶,由于與法則中的從到RNA的轉(zhuǎn)錄是反向的,所以稱為反轉(zhuǎn)錄酶reversetranscriptase)。 又可以利用RNA作為模板合成與之互補(bǔ)的 聚合酶一樣,反轉(zhuǎn)錄酶也以5′→3′方向合成 的過程圖1-3)。1-3由mRNAc合成過程是:第一步,反轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的單鏈,形成RNA-雜交分子。第二步,酶H使RNA-雜交分子中的RNA鏈降解,使之變成單鏈的。第三步,以單鏈為模板,在補(bǔ)的鏈,形成雙鏈PCR擴(kuò)增是獲取目的的一種非常有用的方法,也是進(jìn)行分子鑒定和檢測的一種很靈敏的方法。PCR的擴(kuò)增反應(yīng)過程包括以下幾個(gè)主要過程。第一步:將反應(yīng)體系包括雙鏈模板、引物、耐高溫的聚合酶、四種脫氧核糖核苷酸以及酶促反應(yīng)所需的離子等90~95模板兩條鏈之間的氫鍵打開,變成單鏈,作為互補(bǔ)鏈聚合反應(yīng)的模板。55~60℃,使兩種引物分別與模板鏈3′端的互補(bǔ)序第三步:將反應(yīng)體系升溫至70~75℃,在耐高溫的聚合酶催化作用下,將與模3-OH 標(biāo)記也可以用別的標(biāo)記方法進(jìn)行,如生物素、熒光素等)片段作為探針,與擴(kuò)增出來 雜交 第四步,在X光底片上出現(xiàn)黑斑的菌落,這表明這個(gè)菌落中含有所需要的目的若選(總結(jié)歸納過c 的c。的產(chǎn)物如果是一個(gè)糖蛋白,那么該在原核生物細(xì)菌中表達(dá)出來的蛋白就可能不具備天然狀態(tài)下的活性,因?yàn)樘堑鞍咨系奶擎準(zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和基體上加上的,(總結(jié)歸納①導(dǎo)入植物細(xì)胞:農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌,再讓農(nóng)桿菌植物細(xì)胞將目的導(dǎo)入受體細(xì)胞 細(xì)↓↓②導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞:顯微注射法(將表達(dá)載體提純,用顯微儀注射到卵中(總結(jié)歸納 受體細(xì)胞中提取的雜交,看是否有雜交帶。②檢測是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,利用 分子雜交技術(shù),目的一條鏈(作探針)與受體細(xì)胞中提取的mRNA雜交,看是否有雜交帶。標(biāo)記的探針雜交;②抗原-抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動(dòng)物進(jìn)行免 (工程的工程常用的受體細(xì)胞有 ①大腸桿 測目的的表達(dá)是否符合特定性狀要求,④提取目的,正確的操作順序是 【教學(xué)】因?yàn)楣こ虒W(xué)生來說是比較抽象的,所以首先設(shè)置問題情景,利用生活中的的

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