個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)質(zhì)量保證指南

#標(biāo)本的長(zhǎng)距離運(yùn)送應(yīng)符合生物安全要求，具有高度傳染性和嚴(yán)重危害公眾健康的病原體的運(yùn)送更應(yīng)該嚴(yán)格要求，如在HIV標(biāo)本運(yùn)送中就應(yīng)注意要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送。采用三層容器對(duì)標(biāo)本進(jìn)行包裝，隨標(biāo)本應(yīng)附有與標(biāo)本唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、標(biāo)本種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。第-層容器：直接裝標(biāo)本，應(yīng)防滲漏。標(biāo)本應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明標(biāo)本的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時(shí)要注明''小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓''等字樣，還應(yīng)易于消毒。用于病毒載量檢測(cè)的樣品應(yīng)在-20°C以下運(yùn)輸。DBS樣品可室溫（18?25C）運(yùn)送。每一件包裝的體積以不超過(guò)50mL為宜。對(duì)于以空氣為媒介傳播的微生物如：結(jié)核分枝桿菌，特別是耐藥結(jié)核病可疑者的痰標(biāo)本和/或培養(yǎng)物的運(yùn)送，應(yīng)建立確保感染性物質(zhì)安全包裝和運(yùn)輸?shù)南到y(tǒng)。分枝桿菌培養(yǎng)物應(yīng)放入固體培養(yǎng)基內(nèi)運(yùn)輸，要放入螺口管內(nèi)水密保存。培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)物及液體培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)物不得運(yùn)輸。可使用2ml的小冷凍管，含有一定斜面的培養(yǎng)基。如果預(yù)計(jì)運(yùn)輸時(shí)間很短（即不到1周），細(xì)菌的運(yùn)輸無(wú)需培養(yǎng)基和液體。（5）樣本運(yùn)送溫度和時(shí)間的要求對(duì)于靶核酸為DNA的樣本，如是在無(wú)菌條件下采集，可以在室溫下運(yùn)送，建議采集后，8h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。當(dāng)欲檢測(cè)的靶核酸為RNA時(shí)，如果樣本能夠在iomin內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，則可室溫運(yùn)送，如所需運(yùn)送時(shí)間較長(zhǎng)，則應(yīng)將樣本置于冰上，必須保證樣本與冰屑充分接觸，且冰屑應(yīng)達(dá)到樣本的高度，建議采集后4h內(nèi)送到分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。樣本運(yùn)送溫度和時(shí)間的要求除考慮DNA或RNA的穩(wěn)定性外，還與樣本類型有關(guān)。冰凍組織樣本最好保證其在運(yùn)送過(guò)程中不發(fā)生融化，石蠟包埋組織則可在室溫下運(yùn)送。樣本保存溫度和時(shí)間的要求樣本接收后，最好能立即進(jìn)行檢測(cè)，如果不能立即檢測(cè)，必須對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４?，保存方式和期限視樣本種類及檢測(cè)目的不同而定。通常而言，用于DNA檢測(cè)時(shí)，樣本可在2?8°C保存72h。用于RNA檢測(cè)時(shí)，樣本一旦采集送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，如不能立即提取，應(yīng)凍存于.70C。臨床體液樣本的長(zhǎng)期保存(>2周)在保存于-70°C。已提取純化的RNA最好在乙醇沉淀后保存在-70°Co但是，除DNA或RNA的穩(wěn)定性外，還與樣本類型有關(guān)。如果樣本中含有紅細(xì)胞，應(yīng)盡可能去除紅細(xì)胞后，再進(jìn)行凍存。石蠟包埋組織則可在2-8C長(zhǎng)期保存。常見(jiàn)樣本采集、運(yùn)送和保存的要求血液采血前檢查患者兩只手臂，選擇一處未穿刺過(guò)的區(qū)域，止血帶壓迫時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，最好不要超過(guò)2min,以避免淤血和血液凝縮。最好采用封閉式真空采血管，既有利于樣本的采集、運(yùn)送和保存，又便于防止血液交叉污染，要避免從血管插管內(nèi)取血，因插管易被污染，造成檢測(cè)的假陽(yáng)性。溶血是檢驗(yàn)科血液樣本檢測(cè)最常見(jiàn)的干擾，臨床血液采集人員在樣本采集過(guò)程中應(yīng)特別注意操作手法，防止錯(cuò)誤操作的出現(xiàn)，避免溶血。血液樣本采集后必須加塞、管口向上、垂直放置，減少管中內(nèi)容物震蕩，促進(jìn)凝血完全，并防止樣本蒸發(fā)、污染或外濺等。血漿樣本如進(jìn)行RNA檢測(cè)，采樣后必須對(duì)全血樣本進(jìn)行離心，如使用的為無(wú)分離膠的采血管，血漿應(yīng)在4h內(nèi)離心并轉(zhuǎn)移到另一試管中；如使用的為帶分離膠的采血管，可直接送至實(shí)驗(yàn)室。血清樣本/全血樣本用于RNA檢測(cè)的樣本應(yīng)使用含有RNA穩(wěn)定劑的采血管進(jìn)行采樣，特別是用于RNA轉(zhuǎn)錄子檢測(cè)的樣本，必須使用含有RNA穩(wěn)定劑的采血管。樣本采集后送至實(shí)驗(yàn)室之前，均應(yīng)暫放在2-8C臨時(shí)保存。對(duì)于靶核酸為DNA的樣本，如是在無(wú)菌條件下采集，可以在室溫下運(yùn)送，建議采集后，8h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。用于DNA檢測(cè)的可在2-8C保存72h,如72h內(nèi)不能檢測(cè)，則保存在-2(TC以下。如為RNA,10分鐘以內(nèi)的短時(shí)間運(yùn)送可在室溫下進(jìn)行，如更長(zhǎng)時(shí)間，應(yīng)在加冰條件下運(yùn)送，41】?jī)?nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，如不能立即檢測(cè)，則應(yīng)存放于-70°C以下。如需長(zhǎng)期保存的DNA樣本，3個(gè)月以內(nèi)存放于-20°C以下；3個(gè)月以上置于-70°C以下。如需長(zhǎng)期保存的RNA樣本，應(yīng)置于?70°C以下，反復(fù)凍融不超過(guò)3次。不要在“無(wú)霜”冰箱中儲(chǔ)存血液樣本，因無(wú)霜冰箱在每天自動(dòng)除霜過(guò)程中會(huì)發(fā)生溫度變化。干血斑(DBS)樣本適合用于DNA檢測(cè)但并不推薦作為完整RNA檢測(cè)的樣本類型。一旦風(fēng)干，DBS不能單獨(dú)放在密封的袋子中，袋子中殘留的潮氣利于微生物的繁殖。應(yīng)將DBS放入預(yù)置干燥劑的容器內(nèi)，同時(shí)放置濕度指示卡，隨時(shí)監(jiān)測(cè)容器內(nèi)濕度變化。為了避免交叉感染，多個(gè)DBS樣本應(yīng)該用薄玻璃紙片、蓋玻片或采用其它方式彼此隔開(kāi)。濾紙上的樣本可在室溫穩(wěn)定存在，因此可用于常溫運(yùn)輸。組織組織樣本采集的方式有新鮮組織、活檢組織和手術(shù)切除樣本等。手術(shù)樣本進(jìn)行基因突變檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是可以提供足夠的腫瘤組織用于檢測(cè)，但是由于手術(shù)過(guò)程需要麻醉，目前又缺乏手術(shù)中組織核酸穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，手術(shù)過(guò)程中可能存在組織缺氧，可能會(huì)導(dǎo)致局部組織pH降低從而使核酸量下降。臨床分子檢測(cè)所需的組織大約在1?2g,但由于不同組織之間DNA、RNA的含量變化較大，最佳的樣本量仍需根據(jù)組織的性質(zhì)決定。骨髓、淋巴結(jié)和脾等組織細(xì)胞數(shù)較多，樣本的需要量相對(duì)較小。細(xì)胞含量較少的組織如肌肉、脂肪組織并不是基因組DNA檢測(cè)的最佳選擇，且樣本需要量大于1?2g。一般情況下，只要獲得的組織樣本沒(méi)有大量脂肪浸潤(rùn)，大于lθmg的樣本便可獲得＞10pg的RNA、DNAo由于不同組織的蛋白種類和含量存在差異，針對(duì)不同組織核酸提取試劑也有所不同。采集組織樣本后，應(yīng)使用浸于生理鹽水中的無(wú)菌紗布或?yàn)V紙包裹，以避免組織樣本的脫水。不同組織樣本中DNA和RNA的穩(wěn)定性有所不同。總的來(lái)說(shuō)，樣本采集后，不推薦將組織樣本放置在22-25°C條件下。最理想的方法為，將組織迅速置于液氮中保存或放在核酸保存液中。如果條件有限，可以將組織樣本立即置于冰上，特別是進(jìn)行RNA檢測(cè)時(shí)。用于原位分子檢測(cè)如熒光原位雜交(Fluorescentinsituhybridization,FISH)的樣木置于眼佳切割溫度包埋劑(ODtimalCuttingTenmeratureCompound,OCT)中并保持冰凍狀態(tài)直到檢測(cè)。由于組織樣本通常需先進(jìn)行病理學(xué)分析，在分析完成后應(yīng)盡早將組織樣本置于穩(wěn)定劑中，以避免核酸降解。這一點(diǎn)在檢測(cè)RNA轉(zhuǎn)錄子中尤為重要。用于DNA提取的組織應(yīng)迅速冷凍，并在冰上運(yùn)送。一般來(lái)講，組織中的DNA在2?8°C可穩(wěn)定保存24h,-20°C至少2周，-70°C至少保存2年。用于DNA提取的組織送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)立即保存在.20°C或立即進(jìn)行DNA提取，長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-70°Co用于RNA提取的新鮮組織樣本，應(yīng)該置于穩(wěn)定液中迅速保存在-70°Co立即置于.70°C冰凍的組織RNA可至少保存2年。如需進(jìn)行原位分子檢測(cè)(如FISH),冰凍組織應(yīng)在檢測(cè)前一直置于OCT中并保存在-70°Co如果樣本是干冰或冰浴保存運(yùn)輸?shù)模拥綐颖竞髴?yīng)立即保存在-70°C,以防止樣本溶解，并在RNA提取前將樣本一直保存在-70°C；如果在運(yùn)送過(guò)程中已經(jīng)融化則應(yīng)在4h內(nèi)提取RNA,已提取純化的RNA最好在乙醇沉淀后保存在?70°C。在提取前應(yīng)避免反復(fù)凍融，如可能發(fā)生反復(fù)凍融，可首先將組織樣本在異硫氤酸服或其他核酸提取液中勻漿處理。用于RNA檢測(cè)的固相組織特別是腫瘤組織，富含內(nèi)源性核酸酶，如果不能即刻檢測(cè)需要保存在?70°Co有血的組織在冷凍之前需要用無(wú)菌生理鹽水洗凈。不論樣本要保存多久，都需要將樣本保存在-70°C或.7(TC以下，因?yàn)镽NA酶即使在-20°C也可以降解RNAo胚胎樣本(產(chǎn)前檢測(cè)樣本)胚胎樣本包括絨毛膜活檢(CVS)樣本、培養(yǎng)的絨毛膜活檢細(xì)胞、羊水、從羊水中培養(yǎng)的細(xì)胞以及其它來(lái)源于胚胎的細(xì)胞樣本。胚胎樣本的標(biāo)簽上必須注明母親的全名和胚胎樣本的類型。母體血液樣本應(yīng)一同送檢，以排除胚胎樣本受到母體細(xì)胞/DNA的污染。通常胚胎樣本應(yīng)同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)作為樣本的備份，直至檢測(cè)完成，并確認(rèn)樣本巳無(wú)保存必要。孕期15周后采集的羊水樣本無(wú)需進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)備份。CVS樣本采樣后必須清除母體組織，特別是子宮內(nèi)膜蛻膜組織。在去除母體組織后，標(biāo)準(zhǔn)的CVS樣本應(yīng)至少為15mg。CVS樣本應(yīng)在無(wú)菌組織培養(yǎng)液或生理鹽水中運(yùn)送。羊水樣本需采集至少10ml以上。來(lái)源于羊水或CVS樣本的培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)置于充滿細(xì)胞培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞匯合率需＞75%。CVS樣本應(yīng)當(dāng)在解剖顯微鏡下評(píng)價(jià)母體組織的污染情況。如未受母體組織污染，應(yīng)當(dāng)在收到樣本的當(dāng)天進(jìn)行DNA提取。如果樣本受母體組織污染，應(yīng)盡可能去除。如樣本無(wú)法在當(dāng)天進(jìn)行處理,應(yīng)當(dāng)在2?8°C保存至第二天，即進(jìn)行DNA提取。羊水樣本應(yīng)當(dāng)在收到樣本當(dāng)天進(jìn)行DNA提取，如當(dāng)天無(wú)法進(jìn)行處理，應(yīng)當(dāng)在2.8°C保存至第二天，即進(jìn)行DNA提取。培養(yǎng)的CVS或羊水來(lái)源的細(xì)胞，應(yīng)首先在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞匯合率。一般而言，細(xì)胞匯合率應(yīng)超過(guò)75%,如果細(xì)胞匯合率不足75%,應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。骨髓穿刺樣本/細(xì)針穿刺細(xì)胞骨髓穿刺應(yīng)當(dāng)使用含EDTA抗凝的注射器進(jìn)行，不建議使用肝素抗凝。如進(jìn)行DNA提取，骨髓穿刺樣本可在處理前臨時(shí)儲(chǔ)存在2-8°C,并在72h內(nèi)完成核酸提取。如進(jìn)行RNA檢測(cè)，應(yīng)盡早將骨髓穿刺樣本置于RNA穩(wěn)定劑中。如條件不允許，可將骨髓樣本立即置于冰上，送至實(shí)驗(yàn)室。如無(wú)法將樣本保存在穩(wěn)定劑中或無(wú)法冰凍，應(yīng)在4h內(nèi)進(jìn)行RNA提取。如需長(zhǎng)期保存的樣本，在去除紅細(xì)胞后可在-20°C儲(chǔ)存幾個(gè)月。無(wú)論何種類型的樣本，均不推薦在核酸提取前凍融含有紅細(xì)胞的樣本。胸腹水首次穿刺抽到積液后，應(yīng)棄掉第一管樣本及所用注射器，然后更換新的一次性注射器抽取。穿刺采集后留取中段液體于帶蓋的無(wú)菌試管內(nèi)，因積液易凝集，應(yīng)采用EDTA抗凝，同時(shí)注意防止外傷性血液的進(jìn)入。穿刺獲得胸腹水樣本直接分離提取有核細(xì)胞用于檢測(cè)，如不能立即檢測(cè)可在-20C存放72h,長(zhǎng)期保存應(yīng)存放-70°Co用于RNA檢測(cè)的樣本在樣本采集后迅速放到冰上，并在4h內(nèi)提取RNA,如果樣本不能立即處理，應(yīng)在紅細(xì)胞去除后將其立即冷凍。冷凍的樣本在運(yùn)送過(guò)程中應(yīng)放在干冰上。用于突變基因檢測(cè)時(shí)離心后得到的細(xì)胞塊樣本的運(yùn)送和保存與活檢組織樣本相同。痰液痰液樣本應(yīng)采集早晨第一口痰，深咳可獲得較好的痰樣本：先用無(wú)菌水反復(fù)漱口，以去除口內(nèi)大部分雜菌，經(jīng)深呼吸數(shù)次后用力咳痰，咳出的深部痰液置于無(wú)菌管內(nèi)，應(yīng)避免口腔、鼻腔分泌物的污染，推薦使用廣口無(wú)菌采集器收集痰?！莺细竦奶禈颖緫?yīng)該是未經(jīng)唾液污染的，需要作革蘭染色和鱗狀上皮細(xì)胞鏡檢，平均每低倍鏡視野多于10個(gè)鱗狀上皮細(xì)胞表明混有唾液，說(shuō)明樣本是不合格的。用于DNA檢測(cè)的痰樣本應(yīng)當(dāng)收集在無(wú)菌容器中。痰樣本運(yùn)輸前應(yīng)放置于陰涼處，最好是放置于2.8°C冰箱內(nèi)。如果痰樣本在收集與處理過(guò)程之間有可能長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫，為促成粘液和有機(jī)碎屑的均質(zhì)化以及確保運(yùn)輸過(guò)程中的無(wú)污染，可加入0.6%的漠化十六烷毗隴或1%的氯化十六烷基毗陡，體積與痰樣本相當(dāng)。如果樣本在30min以內(nèi)不能運(yùn)送，應(yīng)該冷凍保存；如果運(yùn)送時(shí)間超過(guò)30min,應(yīng)在2?8°C運(yùn)送。接到樣本后如果不能及時(shí)檢測(cè)應(yīng)立即冷凍保存，結(jié)核分枝桿菌在樣本中穩(wěn)定存在的時(shí)間較其他微生物稍長(zhǎng),對(duì)于既做培養(yǎng)又做分子檢測(cè)的樣本應(yīng)立即進(jìn)行處理。樣本在-70°C至少可以保存1年。尿液尿液的采集應(yīng)特別注意避免尿道口分泌物、糞便等混入。應(yīng)清潔外陰，收集中段尿，必要時(shí)采用導(dǎo)尿術(shù)采集樣本，避免污染。尿液在膀胱內(nèi)應(yīng)停留6~8h以上，使細(xì)菌有足夠時(shí)間繁殖。晨尿是早晨起床后第一次排出的尿液，由于尿液在膀胱中滯留時(shí)間較長(zhǎng)，所以晨尿較為濃縮，適于多種微生物檢測(cè)。隨機(jī)尿是在任意時(shí)間采集的尿液樣本，是尿液分析最常用的樣本類型，但是可能會(huì)出現(xiàn)由于尿液被稀釋而導(dǎo)致假陰性結(jié)果，因此隨機(jī)尿不能準(zhǔn)確反映患者狀況。甲醛固定的石蠟包埋組織(FFPET)對(duì)于FFPET樣本而言,用檢測(cè)DNA的組織蠟塊可在室溫條件下保存。但是,如進(jìn)行RNA檢測(cè)，建議不要使用FFPET樣本。(四)臨床分子診斷樣本的接收各臨床分子診斷實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)建立嚴(yán)格的標(biāo)本驗(yàn)收制度和不合格標(biāo)本拒收制度，對(duì)每項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目均制定相應(yīng)的接收標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)符合要求的標(biāo)本，接收后立即進(jìn)行檢測(cè)，不符合要求的標(biāo)本應(yīng)拒收，并建議重新采集標(biāo)本。對(duì)于每個(gè)接收的合格標(biāo)本均應(yīng)分配一個(gè)唯一的標(biāo)識(shí)碼，通過(guò)這一標(biāo)識(shí)碼可以將不同患者的不同標(biāo)本區(qū)分開(kāi)來(lái)。對(duì)于某些具有高度傳染性的標(biāo)本必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的安全控制并且在高度密閉、具有處理感染性材料能力的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣、戴口罩、防護(hù)眼鏡的工作人員在生物安全柜中打開(kāi)，用后的包裹應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。簡(jiǎn)單快捷并且有效的滅活病毒、細(xì)菌及真菌的抱子，又不影響后期分子檢測(cè)是相當(dāng)重要的，既能保證檢測(cè)人員的安全，又可以保證高質(zhì)量的檢測(cè)結(jié)果。用于腫瘤組織基因突變檢測(cè)的樣本，在分子檢測(cè)前須由病理醫(yī)師進(jìn)行鏡下腫瘤細(xì)胞評(píng)估，然后富集腫瘤細(xì)胞用于核酸提取。腫瘤細(xì)胞所占比例應(yīng)達(dá)到所用擴(kuò)增檢測(cè)方法的要求。（五）純化后的DNA和RNA的保存DNA如果純化后的DNA無(wú)DNA酶的污染,則可在TE緩沖液中室溫保存26周；2-8°C保存一年；-20°C保存7年；-70°C保存7年以上。懷疑可能存在DNA酶污染的樣本，則保存在-20C以下。RNARNA易于降解，在-20C條件下，RNA酶也可能發(fā)揮作用。因此，純化后的RNA應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)乙醇沉淀，并在-70C以下保存。四分析中質(zhì)量保證（一）實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要求1.基本原則涉及臨床基因擴(kuò)增技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、空氣流向、人員工作流向、設(shè)備配置等應(yīng)符合《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》。本指南僅對(duì)實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和功能的要點(diǎn)進(jìn)行規(guī)定。2.實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和功能的要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)設(shè)置4個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)域，包括試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，需設(shè)在不同的房間或區(qū)域。四個(gè)區(qū)域空間上必須是完全相互獨(dú)立的，各區(qū)域無(wú)論是在空間上還是在使用中，應(yīng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。各區(qū)的功能是：（1）試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。（2）標(biāo)本制備區(qū)：各種類型樣本的預(yù)處理，例如組織的固定、細(xì)胞分離、血漿離心、石蠟包埋組織樣本的制備切片等，核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。（3）擴(kuò)增區(qū)：cDNA合成、DNA擴(kuò)增。（4）產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增片段的測(cè)定，包括測(cè)序產(chǎn)物的純化、測(cè)序、基因芯片、點(diǎn)雜交、酶切電泳、質(zhì)譜分析等各種產(chǎn)物分析的形式。（5）區(qū)域的適當(dāng)增加及合并：實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)所采用技術(shù)平臺(tái)的多少、檢驗(yàn)項(xiàng)目數(shù)量和工作量及樣本特點(diǎn)，適當(dāng)增加分區(qū)。不同的產(chǎn)物分析平臺(tái)，如有出現(xiàn)交叉污染的可能，則應(yīng)分開(kāi)，如測(cè)序與基因芯片雜交不宜放在一個(gè)區(qū)域內(nèi)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀，擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本混合、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自動(dòng)化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。（二） 檢測(cè)方法和試劑的選擇如使用商品試劑，應(yīng)當(dāng)使用經(jīng)SFDA注冊(cè)批準(zhǔn)的試劑。如使用自制試劑，應(yīng)當(dāng)建立實(shí)驗(yàn)室配制試劑的SOPo（三） 設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)立常用儀器的維護(hù)及校準(zhǔn)制度，以保證檢測(cè)工作正常運(yùn)轉(zhuǎn)。必須經(jīng)國(guó)家法定部門定期（每年至少1次）校準(zhǔn)的儀器至少包括：溫度計(jì)，高壓滅菌器。溫濕度計(jì)須經(jīng)計(jì)量部門校準(zhǔn)。其他精密儀器及出具實(shí)驗(yàn)結(jié)果的儀器，如加樣器、生物安全柜、離心機(jī)、擴(kuò)增儀、實(shí)時(shí)熒光PCR儀、雜交儀、測(cè)序儀、質(zhì)譜儀等也必須定期（每年1次）校準(zhǔn)，可由生產(chǎn)廠家校準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保留校準(zhǔn)的記錄。加樣器也可由實(shí)驗(yàn)室自校。（四） 人員培訓(xùn)檢測(cè)技術(shù)人員需進(jìn)行上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。上崗培訓(xùn)是實(shí)驗(yàn)室人員需接受醫(yī)政醫(yī)管局指定機(jī)構(gòu)進(jìn)行的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)，并取得上崗證，方能從事個(gè)體化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。如檢測(cè)技術(shù)涉及臨床基因擴(kuò)增技術(shù)的，還應(yīng)取得臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員上崗證。在崗持續(xù)培訓(xùn)指在工作中耍根據(jù)需要接受復(fù)培訓(xùn)，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員至少每2年1次，除接受檢測(cè)基本培訓(xùn)內(nèi)容外，要求了解相關(guān)技術(shù)、質(zhì)控及安全要求的新進(jìn)展。（五）試劑的性能驗(yàn)證根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（試行），跟美國(guó)大體一致，體外診斷試劑也可分為I類、II類、III類，其中II類、III類要求進(jìn)行性能驗(yàn)證，國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的個(gè)體化診斷項(xiàng)目也絕大多數(shù)屬于此類。性能驗(yàn)證的內(nèi)容包括：精密度或重復(fù)性（定性和定量）、準(zhǔn)確度（定性為方法學(xué)比較或與標(biāo)準(zhǔn)樣本盤比較）、線性（定量）、可報(bào)告范圍（定量）、檢出限（定性）、參考區(qū)間（定量）、抗干擾能力等。精密度或重復(fù)性評(píng)價(jià)精密度是指重復(fù)檢測(cè)條件下，獲得的測(cè)量結(jié)果間的一致程度。精密度是一個(gè)方法或檢測(cè)系統(tǒng)的性能指標(biāo)中最重要的，也是準(zhǔn)確度的前提。（1） 定性檢測(cè)在定性檢測(cè)中，精密度是指一個(gè)陽(yáng)性或陰性樣本，重復(fù)多次測(cè)定得到陽(yáng)性或陰性結(jié)果的比率。在評(píng)價(jià)定性測(cè)定時(shí)，不能使用強(qiáng)陽(yáng)性或陰性樣本，只能使用接近臨界濃度的樣本。具體做法是：使用一份接近臨界濃度的陽(yáng)性標(biāo)本，進(jìn)行20次以上的重復(fù)檢測(cè)，計(jì)算出現(xiàn)陽(yáng)性或陰性結(jié)果的次數(shù)，陽(yáng)性率需不小于95%0（2） 定量檢測(cè)在定量檢測(cè)中，可將精密度評(píng)價(jià)理解為是對(duì)檢測(cè)體系隨機(jī)誤差的一種度量，無(wú)法用數(shù)字來(lái)表示，只能通過(guò)不精密度如標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)來(lái)評(píng)估，標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)越小精密度越好。定量檢測(cè)的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)，有兩種方法：一是如這種待評(píng)估方法為標(biāo)準(zhǔn)方法，則使用該方法直接重復(fù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，直接比較檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差和標(biāo)準(zhǔn)方法中規(guī)定的重復(fù)性限；二是如已有其他標(biāo)準(zhǔn)方法，則將待評(píng)估方法直接與標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行比較，兩種方法同時(shí)對(duì)一系列的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或臨床常規(guī)樣品分別進(jìn)行分析，檢查兩種方法檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差或方差是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目和臨床耍求來(lái)設(shè)定允許的定量結(jié)果不精密度范圍。準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度是指測(cè)定結(jié)果與真實(shí)結(jié)果之間的接近程度。（1） 定性檢測(cè)在定性檢測(cè)中，準(zhǔn)確度是指樣本陽(yáng)性或陰性測(cè)定結(jié)果與其真實(shí)結(jié)果的一致性程度，可以采用陽(yáng)性符合率和陰性符合率來(lái)表示。通常是將待驗(yàn)證方法與一公認(rèn)（金標(biāo)準(zhǔn)方法或參考方法）或?qū)嶒?yàn)室已在使用的方法同時(shí)檢測(cè)日常工作標(biāo)本（至少有50例陽(yáng)性樣本），然后比較兩種方法之間結(jié)果的差異，不一致的結(jié)果再用第三種或金標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)，通過(guò)計(jì)算陽(yáng)性符合率和陰性符合率來(lái)評(píng)價(jià)定性測(cè)定的準(zhǔn)確度。實(shí)驗(yàn)室根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目和臨床要求來(lái)設(shè)定對(duì)陽(yáng)性符合率和陰性符合率的要求，一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)性符合率和陰性符合率應(yīng)＞95%0（2） 定量檢測(cè)在定量檢測(cè)中，準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)主要是評(píng)價(jià)測(cè)定的定量結(jié)果與真實(shí)定量結(jié)果的偏倚，以結(jié)果和真實(shí)值之間的差異表示。定量檢測(cè)的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)，有兩種方法：一是可使用待驗(yàn)證方法對(duì)已知標(biāo)準(zhǔn)值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行分析，將檢測(cè)結(jié)果與已知標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較。二是同時(shí)使用待評(píng)估項(xiàng)目與標(biāo)準(zhǔn)方法或參考方法對(duì)同一批次樣品（包括測(cè)定線性范圍高中低濃度樣本）進(jìn)行分析，然后將不同方法得到的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目和臨床要求來(lái)設(shè)定允許的定量結(jié)果偏倚范圍。線性與可報(bào)告范圍驗(yàn)證線性是指在檢測(cè)體系的檢測(cè)范圍以內(nèi)，測(cè)量值與預(yù)測(cè)值之間的關(guān)系。線性與準(zhǔn)確度密不可分，高準(zhǔn)確度是線性分析的必要條件。線性分析有兩種常見(jiàn)方法，我們可以直接分析已知濃度樣品，也可將一定濃度樣本進(jìn)行系列稀釋，根據(jù)稀釋因子來(lái)研究檢測(cè)值與逐步下降的預(yù)期估計(jì)濃度之間是否存在線性。可報(bào)告范圍是能夠報(bào)告的可靠的最低和最高檢測(cè)結(jié)果，一般由廠家/方法建立者提供，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室可通過(guò)“多點(diǎn)法''進(jìn)行簡(jiǎn)單驗(yàn)證，推薦至少使用4個(gè)，最好是5個(gè)不同濃度水平樣品進(jìn)行驗(yàn)證。這些不同濃度樣品中需包含一個(gè)接近檢出限的零水平濃度和一個(gè)接近或稍高于最高檢出限的濃度，重復(fù)測(cè)量4次，以測(cè)量值均值為y軸，指定值為x軸繪制圖形進(jìn)行分析，觀察各點(diǎn)是否通過(guò)直線。檢出限（LoD）驗(yàn)證檢出限是指可被檢測(cè)體系重復(fù)檢測(cè)出待測(cè)物質(zhì)的最低濃度水平。不同類型的標(biāo)本，測(cè)定下限可能會(huì)有所不同。在定性和定量檢測(cè)中，檢出限的評(píng)價(jià)方式相同。檢出限的建立一般由廠家、方法建立者完成，實(shí)驗(yàn)室可驗(yàn)證廠家/方法建立者給出的檢出限是否正確，具體做法是：采用濃度為L(zhǎng)oD的樣本檢測(cè)至少20次,如產(chǎn)生95%的陽(yáng)性結(jié)果。則符合要求驗(yàn)證通過(guò)，不符合要求則聯(lián)系廠家/方法建立者，或自行建立LoD。參考區(qū)間驗(yàn)證參考區(qū)間是指上、下參考限之間的參考值分布范圍，醫(yī)學(xué)參考值區(qū)間通俗的講就是“正常人''各項(xiàng)生理指標(biāo)正常波動(dòng)的范圍，主要用于劃分正常與異常人群。在定性檢測(cè)中，通常以正常人群結(jié)果為陰性報(bào)告結(jié)果，以異常人群結(jié)果為陽(yáng)性報(bào)告結(jié)果，因此不需對(duì)參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。在定量檢測(cè)中，如果以某一量值的結(jié)果為臨界值來(lái)進(jìn)行劃分，在臨界值以上和以下的結(jié)果對(duì)臨床有不同的意義，那么需要對(duì)量值的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。參考區(qū)間的建立一般由廠家/方法建立者完成，實(shí)驗(yàn)室可驗(yàn)證廠家/方法建立者給出的檢出限是否正確，具體做法有三種：一是直接分析法：直接比較廠家/方法建立者進(jìn)行參考區(qū)間建立研究時(shí)的相關(guān)分析、分析前因素是否與本實(shí)驗(yàn)室一致。如參考人群的地理因素、人口因素等是否與本實(shí)驗(yàn)室測(cè)試對(duì)象人群一致，如大體一致，可認(rèn)為相符并直接使用該參考區(qū)間，但這種方法比較粗糙；二是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室可檢測(cè)少量本實(shí)驗(yàn)室測(cè)試對(duì)象（如n=20）,將這部分參考個(gè)體檢測(cè)值與廠家/方法建立者的大型初始研究進(jìn)行比較。如果這20個(gè)參考個(gè)體中檢測(cè)值落在廠家/方法建立者提供的參考區(qū)間以外的個(gè)數(shù)＜2（測(cè)試結(jié)果的10%）,則本實(shí)驗(yàn)室可使用該參考區(qū)間；如20個(gè)參考個(gè)體中檢測(cè)值落在廠家/方法建立者提供的參考區(qū)間以外的個(gè)數(shù)23,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室需重新收集參考個(gè)體進(jìn)行檢測(cè)，若超過(guò)廠家/方法建立者提供的參考區(qū)間以外的個(gè)數(shù)W2,那么本實(shí)驗(yàn)室可使用該參考區(qū)間，反之仍23則需重新分析兩組人群的生物特征差異，考慮自行建立參考區(qū)間。三是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)更大量本實(shí)驗(yàn)室測(cè)試對(duì)象(如n=120),將這部分參考個(gè)體檢測(cè)值與廠家/方法建立者的大型初始研究進(jìn)行比較。這個(gè)方法因參考個(gè)體數(shù)量的增加而更具科學(xué)性。五分析后質(zhì)量保證檢測(cè)結(jié)果應(yīng)包括的信息結(jié)果的報(bào)告原則上，結(jié)果報(bào)告應(yīng)將檢測(cè)結(jié)果的原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)變?yōu)榍逦鬃x且能被醫(yī)師和患者理解的形式進(jìn)行報(bào)告。除非是對(duì)結(jié)果說(shuō)明很有必要，否則不需要將臨床醫(yī)生不理解或需要非常專業(yè)知識(shí)才能理解的原始數(shù)據(jù)圖如實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增曲線圖、電泳圖、雜交圖等放在報(bào)告內(nèi)。結(jié)果的報(bào)告應(yīng)包含以下信息：實(shí)驗(yàn)室、患者、標(biāo)本編號(hào)及標(biāo)識(shí)，具體如下：患者的姓名、性別、年齡；送檢科室或單位名稱；標(biāo)本采集時(shí)間和實(shí)驗(yàn)室接收標(biāo)本時(shí)間；標(biāo)本的編號(hào)或條碼；檢測(cè)項(xiàng)目；標(biāo)本類型和標(biāo)本的前處理過(guò)程(如冰凍、石蠟包埋、肝素抗凝等)；檢測(cè)方法和主要設(shè)備等。結(jié)果檢測(cè)結(jié)果：如為基因突變，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)化的基因命名，推薦使用HGVS,HumanGenomeVariationSociety標(biāo)準(zhǔn)(/mutnomen)；如定量檢測(cè)，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)量單位，并注明項(xiàng)目的參考區(qū)間或檢測(cè)方法的線性或測(cè)定范圍；如為定性檢測(cè)可注明“陽(yáng)性”或“陰性”，并給出正常應(yīng)為''陽(yáng)性”還是陰性；檢測(cè)人、審核人、復(fù)核人簽字；結(jié)果報(bào)告日期和備注。結(jié)果的解釋必須對(duì)結(jié)果進(jìn)行解釋，為用藥決策的個(gè)體化檢測(cè)可提出用藥方案的建議’具體包括：結(jié)果的一般臨床意義和對(duì)受試患者的臨床意義；如之前進(jìn)行過(guò)檢測(cè)，需解釋與之前檢測(cè)結(jié)果之間的縱向關(guān)聯(lián)（如果有該情況）:推薦的進(jìn)一步措施（例如下一步的檢測(cè)建議、遺傳咨詢等等）（如果有該情況）：樣本的狀態(tài)是否會(huì)影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性（如樣本接收時(shí)處于融化狀態(tài)、核酸部分降解等等）（如果有該情況）；所用試劑方法的檢測(cè)性能特點(diǎn)及相關(guān)的可能干擾檢測(cè)結(jié)果的干擾物質(zhì)（不強(qiáng)制要求）；引用有關(guān)本檢測(cè)及其臨床應(yīng)用的經(jīng)過(guò)同行評(píng)議的醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)或網(wǎng)址（不強(qiáng)制要求）；如果該報(bào)告是補(bǔ)充或修訂報(bào)告，需要寫(xiě)明報(bào)告的改變或更新情況（不強(qiáng)制要求）。（二） 報(bào)告時(shí)間的要求基因檢測(cè)所需時(shí)間依所檢測(cè)樣本性質(zhì)、檢測(cè)項(xiàng)目、所采用檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)等而有所不同。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)明確檢測(cè)報(bào)告發(fā)出所需時(shí)間，并告訴醫(yī)生和患者。（三） 檢測(cè)后樣本的保存和處理樣本檢測(cè)后要進(jìn)行一定時(shí)間的保留，以備必要時(shí)復(fù)查。當(dāng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果提出質(zhì)疑時(shí)，只有對(duì)原標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查才能說(shuō)明初次檢驗(yàn)是否有誤。標(biāo)本的保存?zhèn)€體化檢測(cè)報(bào)告發(fā)出后的標(biāo)本應(yīng)盡可能長(zhǎng)期保存，或至少在患者的整個(gè)藥物治療期間，或保存半年以上，以便復(fù)查，也利于和新采集的標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比分析。臨床醫(yī)師如果對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果有疑問(wèn)，應(yīng)盡快反饋給實(shí)驗(yàn)室。（1） 建立標(biāo)本保存的規(guī)章制度，做好標(biāo)本的標(biāo)識(shí)并有規(guī)律地存放，保存好標(biāo)本的原始標(biāo)識(shí)；（2） 在標(biāo)本保存前要進(jìn)行必要的收集和處理，如離心分離血清或細(xì)胞成份等;對(duì)于敏感、重要的標(biāo)本應(yīng)加鎖重點(diǎn)保管，專人專管；對(duì)超過(guò)保存時(shí)限的標(biāo)本可清除以非省資源和空間；要建立配套的標(biāo)本存放信息管理系統(tǒng)，監(jiān)控每個(gè)檢測(cè)樣本的有效存放和最終銷毀時(shí)間，并可通過(guò)患者信息快速定位找到樣本存放位置。標(biāo)本的處理標(biāo)本的處理和檢測(cè)標(biāo)本的容器、檢驗(yàn)過(guò)程中使用的材料的處理要符合《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》，以及國(guó)家、地區(qū)的相關(guān)要求。對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本、培養(yǎng)物、被污染物要保存于專用的、有明顯生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)的廢物貯存袋中，從實(shí)驗(yàn)室取走前，要經(jīng)過(guò)高壓消毒，最后送到無(wú)公害化處理中心進(jìn)行處理。六質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂包括以下內(nèi)容的SOP及相關(guān)記錄表格樣本的采集、運(yùn)送、保存、接收、登記和處理；知情同意告知；檢測(cè)方法和步驟；試劑和耗材的選擇和保存(如為自制試劑，需詳細(xì)寫(xiě)明試劑的制備過(guò)程以及各原料的來(lái)源)；試劑性能驗(yàn)證；儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)；人員培訓(xùn)；結(jié)果報(bào)告與解釋；實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；室內(nèi)質(zhì)量控制；室間質(zhì)量評(píng)價(jià)或?qū)嶒?yàn)室間比對(duì)；保密程序。SOP編寫(xiě)及修訂由各崗位人員起草，實(shí)驗(yàn)室主任審定，根據(jù)實(shí)際使用過(guò)程發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，隨時(shí)進(jìn)行修訂。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行SOP,不得擅自修改。質(zhì)控品的耍求涉及人基因組的檢驗(yàn)項(xiàng)目可包含如下質(zhì)控品：陰性質(zhì)控品：判斷假陽(yáng)性反應(yīng)；陽(yáng)性質(zhì)控品：判斷假陰性反應(yīng)；提取內(nèi)對(duì)照：監(jiān)測(cè)提取效率是否符合要求；擴(kuò)增內(nèi)對(duì)照：監(jiān)測(cè)擴(kuò)增效率是否符合要求。涉及人基因組以外的檢驗(yàn)項(xiàng)目可包含如下質(zhì)控品：陰性質(zhì)控品：判斷假陽(yáng)性反應(yīng)；陽(yáng)性質(zhì)控品：判斷假陰性反應(yīng)；擴(kuò)增內(nèi)對(duì)照：監(jiān)測(cè)擴(kuò)增效率是否符合要求。室內(nèi)質(zhì)量控制定性項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)量控制對(duì)基因突變、基因多態(tài)性等定性檢測(cè)而言，一般用非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。常用的做法在每次檢測(cè)時(shí)同時(shí)設(shè)立試劑對(duì)照、陰性質(zhì)控、陽(yáng)性質(zhì)控、弱陽(yáng)性質(zhì)控，而且這些質(zhì)控樣本要與待檢樣本同時(shí)檢測(cè)。對(duì)于陰性質(zhì)控，可以選用已知的陰性樣本；對(duì)于陽(yáng)性或弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本，可能是實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證過(guò)的己知陽(yáng)性樣本，也可能是疾病相關(guān)的細(xì)胞系或體外構(gòu)建的含已知突變基因的質(zhì)粒。根據(jù)分子診斷的現(xiàn)狀，我們建議按照以下原則設(shè)定室內(nèi)質(zhì)量控制：(1)如果只檢測(cè)1個(gè)基因突變，且標(biāo)本量不是特別大，不多于30份，定性測(cè)定有一份接近c(diǎn)ut?off的弱陽(yáng)性和一份陰性質(zhì)控樣本即可。陰陽(yáng)性質(zhì)控樣本的設(shè)置數(shù)量隨檢測(cè)標(biāo)本數(shù)的增加而按比例適當(dāng)增加，例如臨床標(biāo)本數(shù)量達(dá)到50?60份，則可將陽(yáng)性和陰性質(zhì)控樣本的數(shù)量翻倍。質(zhì)控樣本應(yīng)隨機(jī)放置在臨床標(biāo)本中間隨同臨床標(biāo)本一起同時(shí)處理。(2)當(dāng)同時(shí)檢測(cè)多個(gè)突變基