體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則

附件1：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量把握技術(shù)指導(dǎo)原則——酶聯(lián)免疫診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量把握技術(shù)指導(dǎo)原則酶聯(lián)免疫診斷試劑是指在酶標(biāo)板上包被相關(guān)的抗原〔或抗體〕〔或抗原)反響，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進(jìn)一步,由形成的顏色的強(qiáng)弱來推斷樣本中相應(yīng)的抗體或抗原的存在。為了標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫診斷試劑的生產(chǎn)和質(zhì)量把握，制定本技術(shù)指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則適用于應(yīng)用酶聯(lián)免疫法的第三類診斷試劑〔病原微生物〕的生產(chǎn)和質(zhì)量把握,其他類酶聯(lián)免疫診斷試劑〔如其次類等〕.國家藥品監(jiān)視治理部門將依據(jù)科學(xué)技術(shù)進(jìn)展的需要，適時(shí)組織修訂。一、根本原則〔一)酶聯(lián)免疫診斷試劑生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求?！捕?酶聯(lián)免疫診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人;同時(shí),應(yīng)依據(jù)《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則〔試行》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量治理體系,形成文件和記錄,加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量治理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)〔)》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍作出明確規(guī)定,并經(jīng)國家藥品治理部門批準(zhǔn)?！踩?酶聯(lián)免疫診斷試劑在研制時(shí)，應(yīng)當(dāng)遵循科學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)的原則，各反響條件的選擇和確定應(yīng)符合根本的科學(xué)原理?！菜?酶聯(lián)免疫診斷試劑生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝,應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜?！参濉成a(chǎn)和質(zhì)量把握的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。二、原材料質(zhì)量把握〔一〕主要生物原料與診斷試劑的質(zhì)量最親熱相關(guān)的生物原料主要包括各種生物活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反響板、標(biāo)記相關(guān)酶(辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等〕、中和反響用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品〔標(biāo)準(zhǔn)品)等.使用前應(yīng)依據(jù)工藝要求對這類生物原料進(jìn)展質(zhì)量檢驗(yàn)，以保必需相對穩(wěn)定；假設(shè)購置,其供給商要求相對固定，不能任憑變更供給商，假設(shè)主要原料(包括工藝〕或其供給商有變更,應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)展變更申請.:1．外觀肉眼觀看，大局部生物原料為澄清透亮的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)；特別生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。純度和分子量主要經(jīng)SDS—電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)展分析，也可用擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)展電泳。一般狀況下,每個(gè)電泳道加樣量為5μg，同時(shí)用分子量的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品作參照，承受適宜的電泳電相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。蛋白濃度蛋白濃度可通過Lowry法、280nm光吸取法、雙縮脲方法等進(jìn)展檢測。效價(jià)效價(jià)的測定一般依據(jù)蛋白含量測定結(jié)果,通過倍比稀釋法進(jìn)展。效價(jià)應(yīng)到達(dá)規(guī)定的要求。功能性試驗(yàn)次原料的相關(guān)性?！捕成镙o料生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料均應(yīng)依據(jù)《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)〔2023年版》所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)展檢驗(yàn)，到達(dá)相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)前方應(yīng)用于生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)：1。牛血清或羊血清外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物無菌試驗(yàn):將血清直接放37度培育7,不得消滅混濁.總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，標(biāo)準(zhǔn)為不小于32mg/ml。1ml,0.85NaCl溶液.參與飽1ml,4℃,2小時(shí)，8000rpm10分鐘，棄上清。沉淀0.85%NaCl溶液，至1ml,Lowry方法測定蛋白含量，不能大于2mg/ml。牛血清白蛋白:外觀:應(yīng)為淺黃色凍干粉末無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。溶解性:將牛血清白蛋白配成10%18—26度時(shí)應(yīng)不大于15分鐘.1％水溶液的ｐＨ值應(yīng)為6.57。1。95%?？偟鞍字械腂SA≥95%。BSA的凈含量:總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。酪蛋白：酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).4．標(biāo)記用酶〔如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等〕,同時(shí)應(yīng)依據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)展檢驗(yàn)，酶的純度RZ值〔OD /OD

〕應(yīng)大于3.0。403nm 280nm酶聯(lián)免疫測定，均不得消滅非特異性反響。生物輔料的供給商同樣要求相對固定,不得任憑變更供給商?！踩郴瘜W(xué)原材料參照《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)〔2023年版〕》分析純級別進(jìn)展檢驗(yàn).主要的檢測指標(biāo)包括：外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解狀況、枯燥失重、熾灼殘?jiān)?。主要化學(xué)原材料的供給商要求相對固定,學(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必需供給當(dāng)批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)到達(dá)生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?！菜摹称渌锪厦笜?biāo)板光明處用肉眼觀看板條的外觀質(zhì)量。如有欠注、飛邊、骯臟、外表光滑度差,底部有波浪及劃傷等應(yīng)剔除.⑵吸附力氣和周密性用確定濃度的正常人IgGIgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反響，雙波長酶標(biāo)儀〔主波長450nm,參考波長630nm〕讀數(shù)。計(jì)算CV值，批內(nèi)CV≤5％,批間CV≤10%。液體試劑裝量瓶,并建立相應(yīng)的質(zhì)量把握標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。其他材料包括標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、枯燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)視治理局公布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識治理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量把握標(biāo)準(zhǔn)。(五)企業(yè)質(zhì)控品〔最低檢出量、周密性〔均一性、hook效應(yīng)等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，國家標(biāo)準(zhǔn)品〔參考品〕(參考品經(jīng)批準(zhǔn)的同類試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).待測樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程(酶工作液濃度確定)程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定?！惨弧掣鞣N工作液的配制液、封閉液、陰性陽性比照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品〔或校準(zhǔn)品〕溶液。假設(shè)陰性、陽性比照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時(shí)應(yīng)在相應(yīng)的生物安全試驗(yàn)室完成。,〔或校準(zhǔn)品〕溶液應(yīng)當(dāng)在量值上具有溯源性。的功能性試驗(yàn)及穩(wěn)定性;各種溶液的外觀、pH值等；酶作用的底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的狀況下自身顯色的狀況，并制定合理的限定指標(biāo)；.〔二〕包被酶標(biāo)反響板包被前應(yīng)對酶標(biāo)反響板進(jìn)展質(zhì)量檢驗(yàn)，如尺寸、外觀、包裝、吸.酶標(biāo)反響板經(jīng)檢驗(yàn)合格前方能用于包被.不同批號的板條不能混用。選擇經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被原料〔如抗原、抗體等，經(jīng)確定的方法確定最正確包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度,依據(jù)診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液,經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包被酶標(biāo)反響板，經(jīng)枯燥已包被的酶標(biāo)反響板用鋁箔紙封閉〔),抽真空后,保存28℃。應(yīng)對包被過程進(jìn)展相應(yīng)的質(zhì)量把握,如包被用原料〔抗原或者抗體等生物活性原料〕的質(zhì)量檢驗(yàn)、包被液和封閉液的質(zhì)控(如配方、外觀、pH值、包被過程的監(jiān)控〔包括包被和封閉的體積、溫度、濕度、時(shí)間等)、包被均一性檢驗(yàn)、枯燥過程的監(jiān)控等.〔三〕分裝和包裝樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液5%。SOP的要求進(jìn)展。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢進(jìn)展復(fù)核.四、質(zhì)量把握〔一)半成品質(zhì)量把握半成品抽樣各組分，作號標(biāo)記、待檢。半成品檢驗(yàn)利用上一批檢驗(yàn)合格的試劑盒的相應(yīng)組分,對本批生產(chǎn)出的各種試劑盒組分分別進(jìn)展檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果到達(dá)產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).半成品檢驗(yàn),一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品(參考品〕或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品〔參.部門已經(jīng)批準(zhǔn)的同類試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。檢測所抽樣的半成品的試劑盒性能，包括陰陽性參考品的符合(最低檢出量,對周密性,CV15％(承受競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％).對定量檢測試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和校準(zhǔn)品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。.試劑盒各組分應(yīng)留樣，28℃定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。(二〕成品質(zhì)量把握申請單的要求進(jìn)展抽樣,同時(shí)填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并