細(xì)菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶與耐藥性

細(xì)菌ESBL酶與耐藥性

主講人：華耀編輯ppt細(xì)菌超廣譜β－內(nèi)酰胺酶與耐藥性1、什么是β－內(nèi)酰胺類抗生素？2、什么是β－內(nèi)酰胺酶？3、什么是超廣譜β－內(nèi)酰胺酶？4、它們與細(xì)菌耐藥有什么關(guān)系？？編輯ppt一、β－內(nèi)酰胺類抗生素青霉素發(fā)現(xiàn)者、英國科學(xué)家弗萊明〔1928〕〔一〕概念β-內(nèi)酰胺類抗生素〔β-lactams〕指化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有β-內(nèi)酰胺環(huán)的一大類抗生素。編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt(二)β－內(nèi)酰胺類抗生素抑制細(xì)菌的機(jī)理N-乙酰葡萄糖胺雙糖十肽轉(zhuǎn)肽酶N-乙酰胞壁酸五肽聚合物〔PBPs〕粘肽〔構(gòu)成細(xì)胞壁〕β－內(nèi)酰胺類抗生素〔－〕胞漿內(nèi)細(xì)胞膜細(xì)胞膜外編輯ppt編輯ppt細(xì)胞壁合成受阻，細(xì)胞壁缺損，外環(huán)境水分滲入到菌體，菌體膨脹裂解而死。編輯ppt編輯ppt二、β－內(nèi)酰胺酶〔一〕概念β-內(nèi)酰胺酶〔β-lactamase〕是細(xì)菌產(chǎn)生的可水解β-內(nèi)酰胺類抗生素的酶。絕大多數(shù)常見的β-內(nèi)酰胺酶有一個依賴絲氨酸發(fā)揮作用的機(jī)制。通常它們的活性位點(diǎn)具有一個狹窄的縱形溝狀結(jié)構(gòu)，在溝的底部形成了一個空腔〔氧陰離子袋〕，這種疏松的構(gòu)造容易彎曲，便于結(jié)合底物。編輯ppt〔二〕、β-內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌耐藥的機(jī)理絲氨酸的結(jié)構(gòu)式編輯pptβ-內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基碳在結(jié)合β內(nèi)酰胺酶活性部位的絲氨酸時發(fā)生了不可逆的反響，結(jié)果使其成為開環(huán)物。編輯ppt〔三〕β-內(nèi)酰胺酶分類方法一、Bush-M-J分類法〔功能分類法〕根據(jù)β-內(nèi)酰胺酶的功能相似性〔底物和抑制物的輪廓〕分為1，2，3，4四組，其中2組和3組又分為很多亞組。二、Ambler分類法〔分子分類法〕根據(jù)酶的氨基酸序列的保守性和相似性將β-內(nèi)酰胺酶分為A，B，C，D四組。編輯ppt克拉維酸編輯ppt

三、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶

〔一〕概念超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extendedspectrumbeta-lactamases,ESBLs)是由質(zhì)粒介導(dǎo)的能賦予細(xì)菌對多種β-內(nèi)酰胺類抗生素和單酰胺環(huán)類抗生素耐藥并可被β-內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制的一類β-內(nèi)酰胺酶.

編輯ppt(二)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶特點(diǎn)〔1〕主要是有質(zhì)粒介導(dǎo)ESBLs基因由質(zhì)粒介導(dǎo),可通過接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等形式在細(xì)菌間擴(kuò)散。編輯ppt〔2〕產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶主要是革蘭氏陰性菌如：大腸埃希菌屬、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌〔3〕能被β-內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制如：CA〔克拉維酸〕、甲氧西林編輯ppt〔1〕TEM型ESBLs

TEM型ESBLs由TEM-1衍化而來。在TEM家族中

TEM-3是第一個顯示ESBLs特點(diǎn)的TEM型β-內(nèi)酰胺酶。TEM型ESBLs的形成是因?yàn)?38位甘氨酸突變?yōu)榻z氨酸所形成的。這種突變提高了對頭孢噻肟的水解能力。2005年發(fā)現(xiàn)的TEM-94發(fā)生了104,238氨基酸位點(diǎn)的改變,藥敏實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對頭孢泊肟和頭孢噻肟耐藥。編輯ppt〔三〕超廣譜內(nèi)酰胺酶類型

目前發(fā)現(xiàn)的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶種類已超過200多種,其類型可以分為TEM型、SHV型、OXA型、CTX-M型、其它型等5類。其中TEM和SHV型酶是臨床上較常見的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。編輯ppt〔2〕SHV型ESBLsSHV型ESBLs是由SHV-1衍化而來。SHV家族中第一個SHV型ESBLs是SHV-2。SHV-2發(fā)生了Gly-238-Ser位點(diǎn)的突變,這增加了對氧亞氨基類抗生素的親和力和水解能力。比照其它的SHV型ESBLs氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn),氨基酸的突變主要集中在179,238,240,205位點(diǎn)。

編輯ppt〔三〕ESBLs的檢測方法

1、標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法〔1〕表型初篩試驗(yàn)按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法操作，當(dāng)下述抗菌藥物的抑菌環(huán)直徑頭孢泊肟(10μg)≤17mm或頭孢他啶(30μg)≤22mm或氨曲南(30μg)≤27mm或頭孢噻肟(30μg)≤27mm或頭孢曲松(30μg)≤25mm時，提示為可疑產(chǎn)ESBLs菌株。編輯ppt〔2〕表型確證試驗(yàn)使用頭孢他啶(30μg)和頭孢他啶/克拉維酸(30/10μg)及頭孢噻肟(30μg)和頭孢噻肟/克拉維酸(30/10μg)兩對藥敏紙片，當(dāng)兩個藥物中有任何一個在加克拉維酸后抑菌環(huán)直徑與不加克拉維酸的抑菌環(huán)相比增大值≥5mm，可確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株。編輯ppt頭孢他啶\克拉維酸頭孢噻肟頭孢他啶頭孢噻肟\克拉維酸編輯ppt2三相水解試驗(yàn)區(qū)分菌株為產(chǎn)ESBLs或產(chǎn)頭孢菌素酶〔AmpC酶〕ESBLs和AmpC酶同時產(chǎn)生的情況。編輯ppt①號槽：酶粗提物；②號槽：酶+CA；③號槽：酶+氯唑西林〔CLO〕；④號槽：酶+CA+CLO單產(chǎn)ESBLs菌株編輯ppt①號槽：酶粗提物；②號槽：酶+CA；③號槽：酶+氯唑西林〔CLO〕；④號槽：酶+CA+CLO聯(lián)合產(chǎn)ESBLs和AmpC菌株編輯ppt3、E-test法

E-test，為ABBIODISK公司開發(fā)的測試ESBLs的試劑條。應(yīng)用表型確證試驗(yàn)的原理，將頭孢他啶〔或頭孢噻肟〕和復(fù)方制劑頭孢他啶/克拉維酸〔或頭孢噻肟/克拉維酸〕分別置于試條兩端，將試條貼于接種了待測細(xì)菌的平板上，刻度面朝上，35℃培養(yǎng)18-24小時后，讀取試條兩端的MIC值。當(dāng)頭孢他啶與頭孢他啶/克拉維酸〔或頭孢噻肟與頭孢噻肟/克拉維酸〕的比值≥8時，即可判定為產(chǎn)ESBLs，否那么為陰性。編輯ppt編輯ppt編輯ppt4、分子生物學(xué)檢測聚合酶鏈?zhǔn)椒错?PCR)參照GenBank已發(fā)表的TEM、SHV、CTX-M和OXA各亞型的基因序列，分別設(shè)計(jì)特異性引物編輯ppt5、總結(jié)ESBLs的檢測方法表型初篩試驗(yàn)初步判斷表型確證試驗(yàn)最終確認(rèn)三相水解試驗(yàn)確認(rèn)菌株是否只產(chǎn)ESBLsE-test法分子生物學(xué)檢測編輯ppt〔四〕ESBLs的防治(1)開發(fā)能夠相對或絕對能夠抵抗β－內(nèi)酰胺酶水解的新型抗菌藥物。(2)應(yīng)用β-內(nèi)酰胺酶抑制劑(3)標(biāo)準(zhǔn)抗生素的使用編輯ppt〔一〕β-內(nèi)酰胺酶抑制劑β-內(nèi)酰胺酶抑制劑是一種β-內(nèi)酰胺類藥物，可與β-內(nèi)酰胺酶發(fā)生牢固的結(jié)合而使酶失活，和其他抗生素聯(lián)用可增強(qiáng)抗菌活性，減少其用量。編輯ppt〔二〕β-內(nèi)酰胺酶抑制劑分類按作用分為三類：〔1〕可逆性競爭性抑制劑：鄰氯西林、雙氯西林等〔2〕不可逆競爭性抑制劑：克拉維酸、舒巴坦等〔3〕非競爭性抑制劑：甲氧西林等編輯pptβ-內(nèi)酰胺酶β-內(nèi)酰胺類抗生素β-內(nèi)酰胺酶克拉維酸不可逆競爭性抑制藥物分解，細(xì)菌存活酶失活，藥物起作用編輯pptβ-內(nèi)酰胺酶鄰氯西林

+鄰氯西林可逆性競爭性抑制

編輯ppt(三)合理使