細(xì)菌的耐藥機(jī)理及檢測方法

隨著抗生素的廣泛大量的濫用、介入性治療、免疫抑制劑應(yīng)用及某些根底疾病的發(fā)生。細(xì)菌性感染已是臨床重要的常見病，且耐藥性和耐藥水平越來越高，給疾病的治療及臨床用藥造成諸多困難。病原菌對常用抗生素，如β-內(nèi)酰胺類、氨基糖甙類和喹諾酮類藥物的耐藥性尤為突出，及時(shí)了解細(xì)菌的耐藥機(jī)制和抗生素的開展及應(yīng)用對策，對我們預(yù)防和治療細(xì)菌性感染、制備新的抗菌藥物及控制耐藥性的蔓延是非常重要的。編輯ppt藥物作用機(jī)制落后于細(xì)菌對抗生素耐藥性傳播的開展，藥物作用機(jī)理主要是通過干擾細(xì)菌核酸的合成、抑制核糖體的功能、抑制胞壁的合成及葉酸鹽的代謝等。細(xì)菌對抗生素的耐藥機(jī)制包括遺傳和生化兩種方式：<1>遺傳方式包括固有耐藥〔天然性〕和染色體突變產(chǎn)生的耐藥或獲得新的DNA分子；<2>生化方式是指細(xì)菌獲得性耐藥或質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥，主要包括：產(chǎn)生B-內(nèi)酰胺酶、乙?；D(zhuǎn)移酶、腺甘酸酶、磷酸化酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶等對藥物的滅活作用；依靠菌膜的特性降低藥物的通透性；改變抗生素作用的靶位，縮短與藥物結(jié)合的時(shí)間；產(chǎn)生藥物代謝的旁路；大量產(chǎn)生青霉素結(jié)合蛋白〔PBPS〕，降低抗生素的新生力；開展產(chǎn)生耐受；產(chǎn)生抗生素導(dǎo)出泵。編輯ppt

遺傳方式固有耐藥固有耐藥具有種屬特異性，來源于該細(xì)菌固有的自然特性，即本身具有耐藥基因存在染色體上，非發(fā)酵的G-桿菌如綠膿稈菌、醋酸鈣不動(dòng)桿菌、假單胞菌屬及大多數(shù)G-桿菌耐萬古霉素和甲氧西林，腸球菌耐頭孢菌素，厭氧菌耐氨基糖甙類藥物等，這些菌的高度固有耐藥性是由于菌體外膜的通透性低與繼發(fā)的雙重耐藥機(jī)理〔誘導(dǎo)產(chǎn)生頭孢菌素酶和抗生素導(dǎo)出泵〕導(dǎo)致的。編輯ppt染色體突變或獲得新的DNA分子突變可發(fā)生于DNA分子，如結(jié)核桿菌的點(diǎn)突變可導(dǎo)致對利福平的耐藥，淋球菌的點(diǎn)突變可導(dǎo)致對苯唑西林的耐藥；也可發(fā)生于質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子的基因上，如質(zhì)粒編碼產(chǎn)生的超廣譜B-內(nèi)酰胺酶〔ESBL〕可能由于TEM和SHV酶基因的點(diǎn)突變導(dǎo)致的，這些點(diǎn)突變集中于基因的5個(gè)區(qū)域內(nèi)，殘基的突變能改變B-內(nèi)酰胺酶與頭孢菌素的結(jié)合形成，消除阻遏作用，導(dǎo)致抑制和水解三代頭孢菌素，如果酶基因的連續(xù)突變可從本質(zhì)上增強(qiáng)酶的活力，使新一代頭孢菌素滅活；某些DNA調(diào)節(jié)區(qū)基因的突變可產(chǎn)生頭孢菌素酶導(dǎo)致對第三代頭孢菌素耐藥。編輯ppt耐藥性可通過接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)化在微生物間傳遞，外源性相關(guān)的DNA小片段組合為內(nèi)源性基因幾乎都通過自然轉(zhuǎn)化和重組形成，質(zhì)粒接合傳播的方式最普遍，但宿主范圍局限，尚未發(fā)生可在G+和G-菌中都能復(fù)制的質(zhì)粒，而轉(zhuǎn)座子的宿主范圍較廣，可在G+和G-菌間轉(zhuǎn)移，如染色體內(nèi)的AmpC基因可通過轉(zhuǎn)座子越位至質(zhì)粒中，使某些細(xì)菌獲得誘導(dǎo)產(chǎn)生能力極強(qiáng)的I型酶，稱之為AmpC型ESBLS株〔如腸球菌、克雷伯氏菌、某些腸桿菌科的細(xì)菌〕，是耐藥性傳播的重要原因之一。編輯ppt

生化方式細(xì)菌獲得性耐藥的生化機(jī)理主要有以下幾種。1.酶的滅活作用通過水解或修飾作用破壞抗生素的活性。〔1〕β-內(nèi)酰胺酶質(zhì)粒介導(dǎo)或染色體突變使細(xì)菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，可水解破壞β-內(nèi)酰胺酶，使B-內(nèi)酰胺類抗生素失活，這是大多數(shù)致病菌對此類抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要機(jī)制。目前B-內(nèi)酶胺酶已有230余種，包括TEM系列酶、SHV系列酶、OXA系列酶、PSE系列酶、頭孢菌素酶等，質(zhì)粒介導(dǎo)的酶在G-菌中分布較廣，以TEM-1最普遍，其次為OXA-1。編輯ppt根據(jù)分子量、等電點(diǎn)、被抑制譜、對底物的水解譜等將B-內(nèi)酰胺酶又分為4類，Ⅰ類酶由染色體的AmpC基因誘導(dǎo)產(chǎn)生，多種需氧G-桿菌〔如大腸桿菌、弗氏枸櫞酸桿菌、陰溝桿菌等〕可產(chǎn)生此酶；Ⅱ類酶臨床上最為重要，分5個(gè)亞類〔2a、2b-2b’、2c、2d、2e〕，大多數(shù)G+菌產(chǎn)生的酶〔如pc1〕屬于2a亞類，2b亞類〔如SHV-1、TEM-1〕，2b’亞類〔如TEM-3、SHV-2〕，2c亞類〔如PSE-1，PSE-4〕,2d亞類〔如OXA-1和PSE-2〕，2e亞類〔如FEC-1〕少見，由大局部G-菌產(chǎn)生。隨著新的β-內(nèi)酶胺類抗生素的臨床應(yīng)用，由大局部G-菌產(chǎn)生。編輯ppt隨著新的β-內(nèi)酶胺類抗生素的臨床應(yīng)用，新的酶類不斷產(chǎn)生，近年報(bào)道的ESBL可能來源于TEM和SHV酶，由于其有有序列的基因點(diǎn)突變導(dǎo)致的，該酶最早發(fā)現(xiàn)于肺炎克雷伯氏菌中，僅局限于少數(shù)腸桿菌和腸球菌中，可水解頭孢菌素及單酰胺類抗生素，特別表現(xiàn)為相應(yīng)的產(chǎn)酶菌對頭孢噻肟、頭孢他啶和氨曲南的耐藥，并可引起對其氨基糖甙類抗生素的耐藥。編輯ppt新近研究發(fā)現(xiàn)，過量產(chǎn)TEM和SHV型酶的的細(xì)菌具有含鋅的β-內(nèi)酶胺金屬酶，此酶的催化效率極高，不僅存在于窄食假單胞菌中，也偶見于其它細(xì)菌，此酶對碳青霉烯類抗生素也有耐藥性，且不易受酶抑制劑的影響。β內(nèi)酰胺酶陽性的嗜血桿菌屬、淋球菌和卡他莫拉菌對青霉素、氨芐西林和阿莫西林耐藥；β-內(nèi)酰胺酶陽性的葡萄球菌和腸球菌對青霉素和乙酰氨基青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素耐藥。注：只對嗜血桿菌屬，淋球菌，卡那莫拉菌、葡萄球菌和腸球菌測定β-內(nèi)酶胺酶，不要對腸桿菌科，假單胞菌屬及其他需氧G-桿菌進(jìn)行此試驗(yàn)。編輯ppt〔2〕ESBLs1983年由khothe在德國發(fā)現(xiàn)，1985年正式報(bào)道，該酶為絲氨酸蛋白酶的衍生物，它是由于β-內(nèi)酰胺酶上1～4位點(diǎn)氨基酸發(fā)生了突變，并可以通過質(zhì)粒傳播，由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥比由染色體介導(dǎo)的耐藥多，它可在不同菌株、菌種或菌屬間轉(zhuǎn)移擴(kuò)散。突變產(chǎn)生的ESBLs抗藥性廣，且在ESBLS的質(zhì)粒上常攜帶對其它抗生素如氨基糖苷類及氟喹諾酮類的耐藥基因，呈多重耐藥性。編輯pptESBLS的分類：根據(jù)酶的來源可分為TEM系列：為TEM1、TEM2的突變酶，此系列酶等電點(diǎn)一般介于5.1~6.5，絕大多數(shù)酶分子量〔MW〕為29KD，從TEM3起已發(fā)現(xiàn)有TEM-70，而且還在增加；SHV系列：此系列酶的等電點(diǎn)較高，介于7.0~8.2，分子量主要為29KD，從SHV-2起，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)SHV-12；非TEM和SHV系列。如確認(rèn)為ESBLs菌株，不管體外藥敏試驗(yàn)的結(jié)果如何，對所有青霉素類、頭孢菌素類和氨曲南均應(yīng)報(bào)告耐藥。此酶對酶的抑制劑如克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。編輯ppt〔3〕AmpC酶：1976年開始研究，但直到1990年由PaPaniColaoll等才首先證實(shí)了此酶的存在。由染色體介導(dǎo)的AmpC酶已發(fā)現(xiàn)50多種，基因帶有調(diào)控序列，呈誘導(dǎo)型表達(dá)，酶的活性不被克拉維酸、EDTA抑制，可被鄰氯西林、頭孢西丁、BRL-42715、RO47、RO48等抑制劑抑制。攜帶染色體型AmPC基因的細(xì)菌主要有腸桿菌科、不動(dòng)桿菌屬、綠膿桿菌等，根據(jù)產(chǎn)酶水平的上下和表達(dá)方式可分為：野生型，通常所定義的AmpC酶屬于此型；根底型、低水平非誘導(dǎo)型表達(dá)，臨床定義不大，如E.Coli的染色體型AmpC酶；高誘導(dǎo)型，誘導(dǎo)后的產(chǎn)酶水平遠(yuǎn)高于野生型；去阻遏突變型，持續(xù)或半持續(xù)高水平產(chǎn)酶。編輯ppt由質(zhì)粒介導(dǎo)的酶可分5～6組：弗氏枸櫞酸桿菌組有LAT型和某些CMY型，腸桿菌屬有MIR-1型和ACT-1型，摩根摩根組有DHA-1型和DHA-2型，氣單胞菌組有MOX型、FOX型和其他CMY型等。質(zhì)粒上的AmpC酶基因大小從7～180kb。酶分子大小約38～42KD，具有378～386個(gè)氨基酸。高產(chǎn)AmpC酶細(xì)菌通常對第四代頭孢菌〔如頭孢吡肟〕敏感，對碳青霉烯類敏感，對頭霉素類〔如頭孢西汀〕耐藥，不被酶抑制劑所抑制。如果別離的菌株對三代頭孢菌素耐藥，且不能被克拉維酸抑制、對泰能敏感、對頭孢西汀耐藥可初步推斷為高產(chǎn)AmpC酶的細(xì)菌。編輯ppt〔4〕氨基糖甙類滅活酶雙功能的氨基糖甙類滅活酶〔6’-N-氨基糖甙類乙酰轉(zhuǎn)移酶，2’’-O-氨基糖甙類磷酶轉(zhuǎn)移酶〕是葡萄球菌和腸球菌高水平耐氨基糖甙類藥物的重要機(jī)制。此酶在分子不同的區(qū)域內(nèi)存在兩種不同的氨基糖甙改造因子，是由Th4100轉(zhuǎn)座子內(nèi)6’-aac-a-2’’基因編碼合成，該基因可插入R質(zhì)粒及氨基糖甙類抗生素染色體基因中，導(dǎo)致在G+菌中氨基糖甙類抗性的快速傳播。這種雙功能酶與其它抗生素抗性因子無任何基因關(guān)聯(lián)，真核蛋白激酶抑制劑能抑制磷酸轉(zhuǎn)移酶的活性，提示這種雙功能酶可能是蛋白質(zhì)家族中的兩種普通結(jié)構(gòu)，為臨床提供開發(fā)這種功能酶抑制劑的可能。編輯ppt〔5〕乙酰基轉(zhuǎn)移酶某些細(xì)菌〔如金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腸球菌、肺炎球菌及流感嗜血桿菌等〕對氯霉素耐藥性主要是由于質(zhì)粒編碼產(chǎn)生的乙?；D(zhuǎn)移酶所致，該酶使氯霉素轉(zhuǎn)化為無活性的代謝產(chǎn)物，失去抗菌活性。編輯ppt〔6〕拓?fù)洚悩?gòu)酶該酶又稱DNA旋轉(zhuǎn)酶，由gyrA和gyrB編碼，基因的突變引起靶酶DNA旋轉(zhuǎn)酶的改變，使喹諾酮類藥物失去抑制此酶的活性，而使細(xì)菌獲得耐藥?；虻耐蛔兂Ｎ挥?0-106殘基區(qū)域內(nèi)，在大腸桿菌中約為第83個(gè)絲氨酸，金黃色葡萄球菌中為第84個(gè)絲氨酸。編輯ppt2.菌膜通透性的改變由于藥物的作用，細(xì)菌改變了外膜蛋白，使菌體外膜通透性降低，阻礙抗生素進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)膜靶位。外膜通透性降低主要由于膜孔蛋白缺陷、多向性突變、特異性通道的改變及膜脂質(zhì)雙層的改變。常見于假單胞菌、醋酸鈣不動(dòng)桿菌、腸球菌等對B-內(nèi)酰胺類、氨基糖甙類、氯霉素、喹諾酮類抗生素的耐藥。編輯ppt3.改變抗生素的作用靶位細(xì)菌在抗生素的作用下通過產(chǎn)生誘導(dǎo)酶對菌體成分進(jìn)行化學(xué)修飾，使其與抗生素結(jié)合的有效部位變異，使藥物不敏感，而細(xì)菌的生理功能正常。常見的藥物有甲氧芐胺嘧啶、磺胺類、氨基糖甙類、氯霉素、喹諾酮類藥物。如DNA中A位點(diǎn)基因的突變導(dǎo)致盤旋改變造成喹諾酮類耐藥；核糖體RNA甲基化抑制紅霉素結(jié)合；PBP的改變導(dǎo)致對B-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥，PBP的改變主要有PBP數(shù)量改變或缺失、藥物與PBP的結(jié)合力降低、細(xì)菌產(chǎn)生誘導(dǎo)型PBP或緩慢結(jié)合的PBP。編輯ppt這種由PBP介導(dǎo)的耐藥性在G+菌中較G-菌更常見，最常見于耐甲氧西林的葡萄球菌，主要與PBP2a的存在有關(guān)，該蛋白是一種轉(zhuǎn)肽酶，負(fù)責(zé)細(xì)胞壁的合成，且由mecA基因編碼，位于DNA外區(qū)域mec內(nèi)，受質(zhì)粒攜帶的blaRI-blaI誘導(dǎo)抑制子及mecRI-mecI基因所編碼的蛋白質(zhì)調(diào)控的，在抗生素的治療中，mecA基因編碼產(chǎn)生OXA系列酶，誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)生大量的PBP，使藥物不易與胞壁結(jié)合，導(dǎo)致藥物的作用降低或失活。編輯ppt4.產(chǎn)生藥物代謝的旁路抗生素可與靶位結(jié)合，但靶位的生理作用已被某種新生成份代替，如G+菌耐灰黃霉素的機(jī)制可能與其產(chǎn)生旁路有關(guān)。編輯ppt5.產(chǎn)生耐受對β-內(nèi)酰胺類殺菌效應(yīng)的耐受發(fā)生在抗生素低濃度時(shí)，細(xì)菌的生長狀態(tài)被抑制，需很高濃度才能將其殺滅，呈最低仰菌與最低殺菌濃度別離，這是由于細(xì)菌過度分泌自溶抑制因子而降低了細(xì)菌的自溶性，這種耐受性表現(xiàn)為細(xì)菌雖不對B-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，但仍不被殺滅，致使抗生素治療效果不佳，噬菌體可能與非耐受性轉(zhuǎn)化有關(guān)，但其轉(zhuǎn)染機(jī)理不明。編輯ppt6.產(chǎn)生導(dǎo)出泵導(dǎo)出泵的產(chǎn)生是受流出基因控制的，此基因存在于質(zhì)粒上，在G-腸桿菌中該基因受抑制子調(diào)控，在G+菌中此基因受減毒機(jī)制調(diào)控，如G+菌對四環(huán)素的耐藥性主要是導(dǎo)出泵的建立和核糖體的保護(hù)作用，至少有一種核糖體保護(hù)基因受減毒機(jī)制調(diào)控，且其耐藥流出基因可以在不同的細(xì)菌間傳遞。與核糖體保護(hù)性相關(guān)的基因既存在于質(zhì)粒上，也存在于染色體的共軛轉(zhuǎn)座子上，該轉(zhuǎn)座子最初發(fā)現(xiàn)于鏈球菌中，可轉(zhuǎn)染給其它G+菌、G-菌及支原體，四環(huán)素耐藥基因和基因的刺激轉(zhuǎn)導(dǎo)對其它受體菌來說具有雙重效應(yīng)。編輯ppt另外，G-桿菌導(dǎo)出泵的建立，易造成多重耐藥，已發(fā)現(xiàn)旋轉(zhuǎn)酶突變與導(dǎo)出性耐藥機(jī)制共同存在，多重耐藥機(jī)制在同一菌株中同時(shí)產(chǎn)生，容易產(chǎn)生對藥物的高度耐藥。7.超級(jí)整合子(基因盒)銅綠假單胞菌對碳青酶稀類的泵出機(jī)制：美平/泰能(MIC)≥1占17.6%。(國外15%-35%)。超級(jí)整合子〔耐藥基因盒〕：10.26%。編輯ppt耐藥篩選編輯ppt耐藥篩選編輯ppt細(xì)菌耐藥的主要機(jī)制抗生素靶位點(diǎn)改變,孔蛋白改變，細(xì)胞壁/膜通透性改變,超級(jí)整合子(基因盒)產(chǎn)生滅活酶編輯ppt新的耐藥細(xì)菌突變XX耐藥細(xì)菌的擴(kuò)散敏感細(xì)菌耐藥細(xì)菌耐藥基因轉(zhuǎn)移編輯ppt耐藥細(xì)菌感染的后果細(xì)菌耐藥的直接后果增加患者住院時(shí)間與住院率增加死亡率增加感染發(fā)病率(MRSA,VRE,ESBL)增加醫(yī)療費(fèi)用抗生素后時(shí)代間接后果無法治療的感染對生產(chǎn)力損失估計(jì)美國每年損失：$40億美圓編輯ppt關(guān)于藥物的幾個(gè)概念〔1〕抗感染藥物〔anti-infectiveagents〕〞包括用以治療各種病原體〔病毒、衣原體、支原體、立克次體、細(xì)菌、螺旋體、真菌、原蟲、蠕蟲等〕所致感染的各種藥物“〔2〕抗微生物藥物〔anti-micyobial〕較抗感染藥物略窄，抗蠕蟲藥物一般不包括在內(nèi)〔3〕抗生素〔antibiotics〕：在高稀釋度下對一些特異微生物有殺滅或抑制作用的微生物產(chǎn)物。以后將用化學(xué)方法合成的仿制品，具有抗腫瘤、寄生蟲等作用的微生物產(chǎn)物，以及抗生素的半合成衍生物等也統(tǒng)稱為抗生素。但非微生物產(chǎn)物的全合成藥物如喹諾酮類、咪唑類等不應(yīng)列入抗生素。〔4〕抗菌素〔antibacterial〕：此名稱現(xiàn)已摒棄不用〔5〕抗菌藥物〔antibacterialagents〕：指具有殺菌或抑菌活性，主要供全身應(yīng)用〔含口服、肌注、靜注、靜滴等，局部也可用于局部〕的各種抗生素、磺胺藥、異煙肼、咪唑類、硝咪唑類、喹諾酮類、呋喃類等化學(xué)藥物?！?〕化學(xué)治療藥〔chemotherapeuticagents〕：應(yīng)用于臨床上一切具有化學(xué)結(jié)構(gòu)〔含尚未說明者〕的藥物統(tǒng)稱。編輯ppt對當(dāng)前臨床上面臨嚴(yán)峻的細(xì)菌耐藥性及其開展，耐藥性從G-桿菌開展到G+球菌，由院內(nèi)感染開展到院外感染。對耐藥菌感染的治療尚無可靠的藥物，對預(yù)防和控制耐藥菌的出現(xiàn)和傳播尤為重要，我們應(yīng)采取積極有效的措施來保護(hù)人類的健康?？刂萍?xì)菌耐藥性的對策主要有：<1>加強(qiáng)對已出現(xiàn)的耐藥菌進(jìn)行動(dòng)態(tài)耐藥性監(jiān)測，爭取及早作出病原學(xué)診斷，有針對性選擇抗生素；<2>加強(qiáng)和嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度，尤其是在耐藥菌嚴(yán)重感染的重癥監(jiān)護(hù)病房等單位，防止交叉感染；<3>合理應(yīng)用抗生素，嚴(yán)格掌握用藥原那么。編輯ppt

從目前來看，通過研究新的抗生素和消除細(xì)菌耐藥性基因來控制細(xì)菌耐藥性還未取得令人滿意的進(jìn)展，因此對抗生素的使用進(jìn)行宏觀管理與控制是減少耐藥性產(chǎn)生的重要措施，如盡量減少青霉素的預(yù)防性應(yīng)用，控制第三代頭孢菌素及其它新的B-內(nèi)酰胺類、氟喹諾酮類藥物的大量應(yīng)用，根據(jù)臨床細(xì)菌藥敏感結(jié)果、患者自身感染狀況合理選擇抗生素聯(lián)合應(yīng)用；〈4〉研制新的抗生素，對產(chǎn)酶菌開發(fā)新型穩(wěn)定的制劑，如對青霉素和頭孢菌素用取代基替代6-氨基青霉烷酸或7-氨基頭孢烷酸的氨基酸組，或用a-甲氧基替代青霉素中的6碳和頭孢菌素中7碳上的氫，對羧芐青霉素可結(jié)合一個(gè)6-氫氧基組分，使抗生素增強(qiáng)B-內(nèi)酰胺酶的水解能力。編輯ppt開發(fā)G+球菌感染治療的有效藥物，如鏈陽菌素為原始霉素的衍生物，可與細(xì)菌核糖體50s亞基中的不同位點(diǎn)結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)的合成，到達(dá)殺菌的目的，該藥主要用于耐甲氧西林的葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌及流感桿菌、奈瑟氏菌屬、卡他莫拉氏菌等感染的治療；甘氨酰環(huán)素為多四環(huán)素與米諾環(huán)素的半合成衍生物，對MRSA、MSSA、腸球菌、鏈球菌屬、肺炎球菌有強(qiáng)大的作用，對G-桿菌和厭氧菌亦有良好作用，可能成為治療多重藥菌感染的有效藥物；2-吡啶酮類藥物其結(jié)構(gòu)與氟喹諾酮類相似，其抗菌譜廣，對各種G-桿菌、G+球菌及厭養(yǎng)菌均有良好的抗菌活性，可能適用于各種呼吸道、皮膚、軟組織及尿路感染，以及作為嚴(yán)重感染的經(jīng)驗(yàn)用藥；編輯ppt惡唑烷酮類為全新的化學(xué)結(jié)構(gòu)，以U-100592、U-100766為代表，與抗生素?zé)o交叉耐藥，對G+球菌有強(qiáng)大的殺菌作用，對厭養(yǎng)菌、結(jié)核桿菌也有良好作用，但對G-桿菌無作用，機(jī)理為作用于細(xì)菌蛋白合成的起始階段，抑制30s核糖體起始復(fù)合物的形成，該藥有望成為臨床治療耐藥性G+菌感染最有效藥物。<5>研究消除耐藥質(zhì)粒。細(xì)菌的耐藥性大多由其質(zhì)粒上的耐藥基因控制的，如能消除細(xì)菌中的耐藥質(zhì)粒，那么可降低細(xì)菌的耐藥性，到現(xiàn)在為止，國際上還沒有一個(gè)較好的可供體內(nèi)使用的去除R質(zhì)粒的方法，這方面研究的難度很大，但仍需繼續(xù)努力。<6>進(jìn)一步深入研究細(xì)菌的耐藥機(jī)制，不斷更新防治耐藥菌的措施。編輯ppt細(xì)菌的耐藥機(jī)理越來越復(fù)雜，不斷有新的耐藥機(jī)制出現(xiàn)，這是細(xì)菌與人類生命相互抗?fàn)幍妮^量，尚需人們付出艱苦卓絕的研究工作，逐步控制和減少細(xì)菌的耐藥性，以至最終消滅耐藥菌，使人類在和平美好的環(huán)境中健康快樂地開展。編輯ppt附注：β-內(nèi)酰胺酶的檢測:〔1〕頭孢硝基噻吩顯色法〔Nitrocefin〕：制配紙片→滅菌水濕潤→涂測試菌于紙片上，10min觀察紙片顏色，顯紅色為陽性〔葡萄球菌應(yīng)放置1h內(nèi)觀察〕?！?〕酸度法：青霉素→β-內(nèi)酰胺酶水解→青霉酸、pH6.8以下→酚紅指示劑由紅色〔構(gòu)櫞酸鈉緩沖液pH8.5〕變?yōu)辄S色?！?〕碘測定法：β-內(nèi)酰胺酶破壞β-內(nèi)酰胺環(huán)，碘與破壞后的β-內(nèi)酰胺結(jié)合，使蘭色的淀粉—碘復(fù)合物轉(zhuǎn)變成無色?！?〕儀器測定法：Vitek-AMS、Microscan的藥物測試卡中均帶有測酯功能。編輯pptESBLS檢測：〔1〕紙片擴(kuò)散初篩：頭孢他啶〔30μg/片〕抑菌圈≤22mm頭孢噻肟〔30μg/片〕抑菌圈≤27mm頭孢曲松〔30μg/片〕抑菌圈≤25mm氨曲南〔30μg/片〕抑菌圈≤27mm〔2〕肉湯稀釋法：上述藥物MIC≥2μg/ml可疑為ESBLS?！脖硇痛_證試驗(yàn)：對2個(gè)任何一個(gè)藥物MIC，在加克位維酸比不加克拉維酸的MIC值降低3個(gè)以上對倍稀釋度判為ESBLS〕。編輯ppt〔3〕雙紙片協(xié)同確認(rèn)試驗(yàn)：頭孢他啶〔30μg/片〕與頭孢他啶〔30μg〕/克位維酸〔10μg〕頭孢噻肟〔30μg/片〕與頭孢噻肟〔30μg〕/克拉維酸〔10μg〕兩紙片抑菌圈相比≥5mm即為ESBLS?！?〕E-test法〔濃度梯度法〕：由瑞典ABBiodisk公司研究生產(chǎn)，廣洲貝肯公司經(jīng)銷。試條中的三代頭孢菌素或氨曲南的MIC≥2μg/ml即可疑為ESBLS。編輯ppt〔5〕儀器測定法：Vitek,microscan和BD-PHOEMXTM微生物分析儀均可測試ESBLS?！?〕利用分子生物學(xué)技術(shù)〔PCR、DNA探針等〕及分析酶底物譜及抑制物譜、生物化學(xué)技術(shù)等檢測技術(shù)可對ESBLS做出確診。編輯pptAmpc酶檢測：〔1〕初篩：①頭孢西汀〔30μg/片〕與頭孢西汀〔30μg〕/鄰氯西林〔200μg〕。后者比前者的抑菌圈≥5mm即疑為Ampc。②5種紙片篩選：馬斯平、泰能、頭孢西汀、頭孢他啶與頭孢他啶/克拉維酸。如頭孢西汀≤18mm，對馬斯平、泰能敏感即疑為產(chǎn)Ampc，如頭孢他啶與其酶抑制劑的抑菌圈≥5mm可能產(chǎn)ESBLS。〔2〕確認(rèn)試驗(yàn)〔頭孢西汀三維水相試驗(yàn)法〕編輯ppt一．金屬β-內(nèi)酰胺酶的表型檢測方法(一)頭孢他啶+2-巰基丙酸法(CAZ+NCA)1.將待測菌株按常規(guī)藥敏紙片K-B法操作均勻涂布于M-H平板上。2.在M-H平板上分別貼兩片頭孢他啶(30ug/片)紙片，紙片中心相距2.5cm,將其中一片頭孢他啶紙片上加3ul2-巰基丙酸，35℃孵育18-24h。3.結(jié)果觀察：假設(shè)加有2-巰基乙酸的頭孢他啶紙片抑菌圈大于單個(gè)頭孢他啶的抑菌圈〔≧4mm〕，那么為陽性，即產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶。編輯ppt一．金屬β-內(nèi)酰胺酶的表型檢測方法(二)亞胺培南+EDTA法(IMP+EDTA)1.將待測菌株按常規(guī)藥敏紙片K-B法操作均勻涂布于M-H平板上。2.在M-H平板上貼一片亞胺培南(10ug/片)紙片，在距亞胺培南紙片中心1.5cm處貼無菌空白紙片一片，將0.5MEDTA10ul均勻浸注于空白紙片上，35℃孵育18-24h。3.結(jié)果觀察：假設(shè)兩片紙片抑菌圈有協(xié)同作用，那么為陽性，即產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶。編輯ppt二．AmpC酶新的檢測方法(一)三維水相試驗(yàn)方法的改進(jìn)1.將標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922按常規(guī)藥敏紙片K-B法操作均勻涂布于M-H平板上。2.在M-H平板中心貼一片頭孢西汀(30ug/片)紙片，在距紙片邊緣1cm處，用無菌手術(shù)刀片切3cm長度的小槽，將待測菌株的6個(gè)菌落接種于槽內(nèi)(勿溢出槽外)，35℃孵育