荷斯坦奶牛酮病抗氧化系統(tǒng)的研究

荷斯坦奶牛酮病抗氧化系統(tǒng)的研究

目前，我國(guó)奶牛酮病的發(fā)病率顯著增加，尤其是隱酮病，降低了牛奶產(chǎn)量，影響了奶牛業(yè)的發(fā)展。奶牛酮病是高產(chǎn)奶牛產(chǎn)犢后6周內(nèi)最常發(fā)生的一種以碳水化合物和揮發(fā)性脂酸代謝紊亂為基礎(chǔ)的營(yíng)養(yǎng)代謝病。臨床表現(xiàn)為頑固性消化紊亂,呼出氣有酮味,產(chǎn)乳量下降,機(jī)體脫水和一定的神經(jīng)癥狀。臨床特征為酮血、酮尿、酮乳、低血糖、血漿游離脂肪酸濃度升高和肝糖含量降低。為了進(jìn)一步揭示奶牛酮病的發(fā)生機(jī)理,我們首次研究奶牛酮病對(duì)抗氧化系統(tǒng)的影響,旨在為臨床防治奶牛酮病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物黑龍江某奶牛場(chǎng)泌乳量在6500kg以上的3胎~6胎荷斯坦奶牛。1.1.2儀器7230分光光度計(jì),上海第三分析儀器廠;低速臺(tái)式離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;旋渦混勻器,上海第一醫(yī)學(xué)院儀器廠。1.1.3活性測(cè)定試劑盒谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性測(cè)定試劑盒、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性測(cè)定試劑盒、丙二醛(MDA)含量測(cè)定試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn);亞硝基鐵氰化鈉,無水碳酸鈉,硫酸銨(分析純),由天津市化學(xué)試劑一廠生產(chǎn)。1.2方法1.2.1酮病抽樣檢測(cè)應(yīng)用酮粉法和改良式水楊醛比色法對(duì)某農(nóng)場(chǎng)的荷斯坦奶牛進(jìn)行酮病抽樣檢測(cè)。分為2組,每組10頭,分別為對(duì)照組和陽(yáng)性組。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尾中動(dòng)脈采血5mL,分離血清,冷凍保存,在最短時(shí)間內(nèi)測(cè)定試驗(yàn)指標(biāo)。1.2.2血清gsh-px活性測(cè)定采用常規(guī)的DTNB顯色法測(cè)定。1.2.3血清t-sod活性測(cè)定采用常規(guī)的黃嘌呤氧化法測(cè)定。1.2.4血清sda的含量采用常規(guī)的硫代巴比妥酸法測(cè)定。1.2.5處理數(shù)據(jù)采用常規(guī)的用Excel軟件處理。2結(jié)果2.1酮病陽(yáng)性牛的診斷結(jié)果2.1.1酮粉法的診斷結(jié)果有紫色跡象,并逐漸加深,于30s達(dá)頂點(diǎn)者為(++++),約含酮體4.0mg/L以上(圖1)。2.1.2楊樹業(yè)比色法的診斷結(jié)果對(duì)照組奶牛血清酮體含量0.3mg/L,陽(yáng)性組奶牛血清酮體含量5.6mg/L。2.2兩組t-sod活性、mda含量比較從表1可見,陽(yáng)性組與對(duì)照組相比,血清中GSH-Px活性極顯著降低(P<0.01),對(duì)照組的T-SOD活力顯著大于陽(yáng)性組(P<0.05),陽(yáng)性組的MDA含量顯著大于對(duì)照組(P<0.05)。3動(dòng)物機(jī)體自由基活性酮病的發(fā)生機(jī)理現(xiàn)在普遍接受的學(xué)說是糖缺乏理論。由于各種原因所致碳水化合物供應(yīng)不足以及高泌乳消耗大量的糖,導(dǎo)致機(jī)體低血糖及能量負(fù)平衡。為此,動(dòng)用機(jī)體的脂肪和蛋白補(bǔ)充能量的不足。但是脂肪和蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生大量的游離脂肪酸和生酮氨基酸,經(jīng)過肝臟的β-氧化為乙酰coA,乙酰coA可與草酰乙酸縮合成檸檬酸,經(jīng)三羧循環(huán)氧化供能。如果生成草酰乙酸的先質(zhì)丙酸的碳水化合物不足,使得大量乙酰coA不能進(jìn)入三羧酸循環(huán),導(dǎo)致酮體蓄積,進(jìn)而引起一系列的代謝與機(jī)能紊亂,如前胃消化紊亂,神經(jīng)機(jī)能障礙及內(nèi)分泌機(jī)能紊亂等。GSH-Px和SOD是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一類重要的過氧化物分解酶,GSH-Px和SOD活力的高低間接反應(yīng)了動(dòng)物機(jī)體清除自由基的能力,而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。奶牛血清中T-SOD活力顯著降低,血清中MDA含量顯著增高,其原因可能有以下兩個(gè)方面。一方面為奶牛發(fā)生酮病之后,機(jī)體發(fā)生營(yíng)養(yǎng)代謝紊亂或自身采食量減少,引起體內(nèi)Cu、Zn量吸收不足,導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體中SOD含量減少即T-SOD活力下降,消除自由基能力減弱,MDA含量增高。另一方面認(rèn)為酮病產(chǎn)生的直接原因是酮體濃度增高,其大量蓄積的結(jié)果常導(dǎo)致動(dòng)物酸堿平衡失調(diào),引起酸中毒。溶液中的pH過低(過酸)、過高(過堿)都能使酶蛋白變性而失活。從而也可出現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。奶牛血清中GSH-Px的活力降低有兩方面原因。一方面是由于奶牛酮病時(shí)有大量的體脂被動(dòng)員,在脂肪分解代謝的過程中,有脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生,在奶牛酮病的初期GSH-Px的活性代償性的增高。但在奶牛酮病的后期,由于脂質(zhì)過氧化物大量堆積超過動(dòng)物機(jī)體的代償能力,生物膜受損,GSH-Px的活性降低。另一方面是由于奶牛酮病時(shí)影響維生素E的攝入和硒的吸收,而GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸,硒的缺乏將導(dǎo)致GSH-Px的合成受阻,所以血清中