結(jié)核病防治實驗室痰檢工作第一講痰涂片鏡檢

結(jié)核病防治實驗室痰檢工作第一講痰涂片鏡檢第一講痰涂片鏡檢9/18/2023本節(jié)內(nèi)容導(dǎo)航痰檢工作的目的和意義國家結(jié)核病規(guī)劃（NTP）與結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實驗室網(wǎng)絡(luò)檢查對象結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)電子顯微鏡下的結(jié)核分枝桿菌染色特性萋尼氏染色鏡下形態(tài)9/18/2023本節(jié)內(nèi)容導(dǎo)航痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理痰標(biāo)本的采集－容器痰標(biāo)本的采集留取標(biāo)本痰標(biāo)本的運送標(biāo)本的性狀直接涂片的步驟染色的步驟9/18/2023痰檢工作的目的和意義

在結(jié)核病控制工作中痰結(jié)核菌涂片鏡檢對于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評價防治效果具有重要意義是國家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)的重要組成部分，在現(xiàn)代結(jié)核病控制工作中起著不可缺少的重要作用129/18/2023國家結(jié)核病規(guī)劃（NTP）與

結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實驗室網(wǎng)絡(luò)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實驗室通過日常、有效的細(xì)菌學(xué)（病原學(xué)）診斷，發(fā)現(xiàn)傳染源、決定化療方案和評價治療效果為實現(xiàn)NTP的重要目標(biāo)服務(wù)痰涂片鏡檢服務(wù)必需在健全的細(xì)菌學(xué)實驗室網(wǎng)絡(luò)中才能實現(xiàn)129/18/2023國家結(jié)核病規(guī)劃（NTP）與

結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實驗室網(wǎng)絡(luò)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家NTP主要通過實施現(xiàn)代結(jié)核病控制策略（DOTS）來實現(xiàn)痰涂片鏡檢是結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實驗室服務(wù)中最重要的內(nèi)容之一。痰涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)傳染源是DOTS策略的重要組成部分349/18/2023結(jié)核病癥狀體征咳血或伴有血痰發(fā)熱或胸痛超過2周持續(xù)咳嗽咳痰超過3周

檢查對象胸部X線異常凡因結(jié)核病癥狀求診及轉(zhuǎn)診的可疑肺結(jié)核患者，均應(yīng)進行痰直接涂片檢查確定診斷9/18/2023確定診斷的涂片檢查應(yīng)采集3個合格的痰標(biāo)本就診當(dāng)時在門診留一份“即時痰”標(biāo)本，同時給患者2個痰盒，囑患者留取“夜間痰”和“晨痰”，于次日交驗檢查對象

9/18/2023檢查對象

治療中或復(fù)診隨訪病人按期每次送檢兩份痰(當(dāng)日即時痰、當(dāng)日或次日晨痰）

初治涂陽患者在療程滿2、5、6月時

復(fù)治涂陽患者在療程滿2、5、8月時療效評價9/18/2023經(jīng)萋爾-尼爾遜染色后在顯微鏡內(nèi)藍(lán)色背景下呈紅色桿狀寬度為0.3～0.6um，生長發(fā)育期間形成分枝光學(xué)顯微鏡下為細(xì)長稍彎曲，兩端鈍圓的桿菌，菌體長度多為1.5~3.5um結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)結(jié)核分枝桿菌9/18/2023細(xì)胞質(zhì)核物質(zhì)

細(xì)胞壁細(xì)胞膜結(jié)核分枝桿菌結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)電子顯微鏡下的結(jié)核分枝桿菌9/18/2023Gram-positive

S.aureusGram-negative

E.coliAcidfast

M.tuberculosis

結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)電子顯微鏡下的結(jié)核分枝桿菌9/18/2023

結(jié)核桿菌用革蘭氏染色，著色較差但呈蘭色，列為G＋菌

結(jié)核桿菌用普通的染色方法不易著色，在染液中加入石炭酸后才可著色

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結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)染色特性9/18/2023

抗酸染色時，因結(jié)核桿菌菌體含有大量脂質(zhì)，其脂質(zhì)的含量占分枝桿菌之首，占菌體干重的40%，因脂質(zhì)的含量大，所以不易著色，但經(jīng)過加熱或者提高石炭酸的濃度、延長染色時間等處理以后才能著色

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結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)染色特性9/18/2023

一旦著色，不易被鹽酸酒精脫色，而其他細(xì)菌均被脫色，把不被鹽酸酒精脫色的細(xì)菌稱為抗酸菌，這種方法稱為抗酸染色法

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結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)染色特性9/18/2023結(jié)核菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)萋尼氏染色鏡下形態(tài)9/18/2023【胸腹水】【腦脊液】【尿標(biāo)本】【膿液、病灶組織】【痰標(biāo)本，肺部深咳的痰】痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理9/18/2023【胸腹水的采取】于試管中加20%的枸櫞酸鈉3—5滴，或10%的草酸鉀

5—6滴，可防止15—20ml胸腹水凝固。無菌采取胸腹水以后應(yīng)立即送檢?？刹扇‰x心集菌或漂浮集菌法檢查痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理9/18/2023

【纖維支氣管鏡刷檢物】可將毛刷直接進行抗酸染色,也可將刷檢標(biāo)本洗脫于裝有無菌生理鹽水的試管中,再涂片檢查

痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理9/18/2023【腦脊液的采取】無菌手術(shù)取得腦脊液以后，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘，取沉淀物涂片染色檢查結(jié)核性的腦脊液放在冰箱中4℃過夜以后，會在液面形成一個倒漏斗狀的薄膜，取此薄膜涂片染色鏡檢痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理9/18/2023

【尿標(biāo)本的采取】通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小時的尿液，放冰箱或陰涼處，靜置，去上清，留沉淀部分50—60ml送檢，取此沉淀液，經(jīng)3000轉(zhuǎn)，離心30分鐘，取沉淀部分2ml直接涂片，染色檢查痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理9/18/2023膿液直接涂片染色鏡檢病灶組織或干酪樣組織需充分研碎后再涂片檢查痰涂片操作程序常見標(biāo)本的收集及處理9/18/2023

當(dāng)前,貴州省疾病預(yù)防控制機構(gòu)結(jié)核病實驗室進行痰檢工作的耗材由項目統(tǒng)一提供：

螺旋蓋痰瓶可密封的塑料盒可密封的蠟紙盒痰涂片操作程序痰標(biāo)本的采集－容器9/18/2023痰涂片操作程序痰標(biāo)本的采集－容器9/18/2023痰涂片操作程序痰盒圖例9/18/2023痰涂片操作程序痰盒圖例9/18/2023痰標(biāo)本的采集痰容器應(yīng)標(biāo)明病人姓名、編號（檢查項目和容器序號1、2、3

（1＝當(dāng)日即時痰，2

＝夜間痰，3＝次日晨痰）通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒蠟紙盒收集痰標(biāo)本如：張三，涂片

58—1，58—258--3痰涂片操作程序痰標(biāo)本的采集9/18/2023痰瓶上標(biāo)明病人姓名，初診門診序號（或隨訪病人登記號）痰標(biāo)本留取后，痰盒切勿倒置、嚴(yán)防痰液外溢，應(yīng)立即送檢進行細(xì)菌學(xué)檢查時，應(yīng)在登記本和檢驗報告單上注明標(biāo)本性狀留取標(biāo)本痰涂片操作程序留痰時應(yīng)囑咐病人盡量深咳，留取痰量3~5毫升干酪痰、血痰、黏液痰為合格的標(biāo)本唾液屬不合格痰標(biāo)本

留取標(biāo)本9/18/2023難以獲得合格標(biāo)本時，也應(yīng)進行細(xì)菌學(xué)檢查，但應(yīng)注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時參考需送上一級實驗室檢查的痰標(biāo)本應(yīng)置4℃冰箱保存，外送前認(rèn)真核對檢驗單與痰瓶上標(biāo)注，放專用的冰盒內(nèi)運送，或用紙袋、塑料袋封裝扎牢后順序放入包裝盒，盒外注明請勿倒置標(biāo)志痰涂片操作程序痰標(biāo)本的運送9/18/2023合格的痰標(biāo)本應(yīng)是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物核心是肺部壞死組織中間層是支氣管分泌物外層是口腔黏液痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023

【干酪痰】標(biāo)本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團塊狀的肺部分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時較易涂抹涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細(xì)胞、肺上皮脫落細(xì)胞由于此類標(biāo)本是由肺部深處咳出，對肺結(jié)核的診斷最有價值，故抗酸桿菌(以下簡稱AFB)的檢出率較高痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023【血痰】此類標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲涂片染色后鏡檢除能夠觀察到粘液痰或干酪痰的細(xì)胞特征外，含新鮮血液的標(biāo)本中可見到被染色的血細(xì)胞由于含血標(biāo)本易干擾AFB鏡檢的結(jié)果，故在制片時應(yīng)盡量避免挑取含血標(biāo)本痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023痰涂片操作程序【粘液痰】標(biāo)本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支氣管分泌物為主，制片時需仔細(xì)涂抹此類標(biāo)本的AFB檢出率較唾液高標(biāo)本的性狀9/18/2023痰涂片操作程序【粘液痰】涂片染色后鏡檢時，鏡下可見支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞

(細(xì)胞較長且形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)著色均較深，細(xì)胞一端可見著色較淺的纖毛)，伴有少量肺上皮脫落細(xì)胞(多數(shù)為圓形、細(xì)胞核較小且著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比大于1:3)、膿性炎癥細(xì)胞(卵圓形、細(xì)胞核占細(xì)胞比例較大且著色較深，核質(zhì)比低于1:1)、口腔脫落細(xì)胞及口腔寄生菌標(biāo)本的性狀9/18/2023【唾液】目視觀察標(biāo)本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度較低的口腔分泌物為主，標(biāo)本中有時伴有氣泡涂片染色鏡檢時，鏡下可見少量口腔上皮脫落細(xì)胞(形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比接近或大于1:2)和口腔內(nèi)寄生菌，有時可見食物殘渣由于此類標(biāo)本進行AFB檢查時的檢出率很低，用于對患者確定診斷時是不合格的標(biāo)本痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023

不同痰液涂片陽性率表

（僅供示例）性質(zhì)例數(shù)陽性數(shù)陽性率干酪痰553665.5%血痰461634.8% 粘液痰5295610.6%唾液9277.6%痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023細(xì)胞核質(zhì)比，白細(xì)胞，說明痰的質(zhì)量較好痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023上皮細(xì)胞多，說明標(biāo)本質(zhì)量差痰涂片操作程序標(biāo)本的性狀9/18/2023【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】

編號無磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用標(biāo)簽紙有磨砂面的玻片，可用鉛筆編號痰涂片操作程序直接涂片的步驟9/18/2023

【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】使用折斷的竹簽茬端，取痰標(biāo)本中干酪樣或膿樣

0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3處，均勻涂抹

10x20毫米大小的橢圓形痰膜痰膜朝上，待自然干燥(一般20分鐘)

痰涂片操作程序直接涂片的步驟9/18/202310×20mm20mm10mm痰涂片操作程序涂片面積9/18/2023復(fù)染(亞甲蘭)脫色(鹽酸酒精)初染(堿性復(fù)紅)染色過程

痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023

【初染】將玻片放置染色架上，玻片間距保持10毫米以上距離火焰固定（5秒鐘將玻片過火4次）滴加石炭酸復(fù)紅染液，蓋滿玻片火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽，勿使沸騰脫離火焰，保持5分鐘染色步驟痰涂片操作程序9/18/2023痰涂片操作程序

【脫色】流水自玻片一端清緩沖洗染色液，瀝去玻片上的水，滴加脫色液，保持1

分鐘染色步驟9/18/2023痰涂片操作程序【復(fù)染】滴加亞甲藍(lán)復(fù)染液，保持30秒鐘流水沖洗，瀝去玻片上的水玻片干燥后鏡檢染色步驟9/18/2023將涂片排放在染色架上，注意間隔痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023滴加堿性復(fù)紅痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023加熱痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023流水沖洗痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023脫色痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023流水輕緩沖洗痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023復(fù)染痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023流水洗去復(fù)染液

痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023在玻片架上自然干燥痰涂片操作程序染色步驟9/18/2023滴加亞甲蘭復(fù)染液保持1分鐘

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將涂片排放在染色架