大蒜及其制品中蒜氨酸含量測定-征求意見稿

1T/GDNBXXXX—2023大蒜及其制品中蒜氨酸含量測定本文件規(guī)定了大蒜及以蒜氨酸為主要活性成分產(chǎn)品中蒜氨酸含量的測定方法。本文件適用于以蒜氨酸為主要活性成分的片劑、粉劑及飲料中蒜氨酸含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法術(shù)語和定義3術(shù)語與定義3.1蒜氨酸alliin蒜氨酸為大蒜中特有的含硫氨基酸，分子式：C6H11NO3S;分子量：177.2214；CAS號：556-27-4；密度：1.205；熔點：164℃~166℃。該物質(zhì)是大蒜素的主要前體物質(zhì)，穩(wěn)定性好，具有多種活性功能，是大蒜中主要的活性成分。4原理5試劑或材料除非另有規(guī)定，本文件所用試劑均為分析純。水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）:色譜純。5.1.2磷酸（H3PO4）:優(yōu)級純。5.2溶液配置磷酸溶液（0.01%，體積分?jǐn)?shù)）：準(zhǔn)確吸取0.10mL磷酸（5.1.2）與預(yù)先加入一定量水的1000mL容量瓶，稀釋至刻度，經(jīng)0.22μm水相濾膜過濾。5.3標(biāo)準(zhǔn)品蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（Alliin，C6H11NO3S，CAS號：556-27-4）：含量≥98%。5.4標(biāo)準(zhǔn)品溶液配置蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000mg/L稱取蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（5.2）10mg（精確到0.01mg）于10mL容量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，4℃保存，有效期為1個月。6儀器設(shè)備2T/GDNBXXXX—20236.1分析天平：感量0.01g、0.001g和0.01mg。6.2離心機(jī)：最高轉(zhuǎn)速8000r/min。6.3組織搗碎機(jī)。6.4微波爐：功率900W。6.5超聲波清洗器。6.6高效液相色譜儀：配備紫外或二極管陣列檢測器。7實驗步驟7.1試樣處理7.1.1大蒜樣品取有代表性的大蒜樣品可食部分，混勻縮分至約50g（精確至0.01g置于250mL燒杯中，微波功率900W高火滅酶1min，冷卻至室溫，用水補(bǔ)充微波滅酶過程中損失的質(zhì)量，再按縮分后樣品質(zhì)量（約50g）比1:1加水，用組織搗碎機(jī)粉碎制成蒜泥，作為試樣。試樣置于密閉容器內(nèi)，-20℃冷凍保存。平行做3份試驗。稱取試樣2g（精確至0.001g）于100mL三角瓶中，加入60mL磷酸溶液（5.4手動振蕩1min后超聲提取15min，靜置至恢復(fù)室溫，用磷酸溶液（5.4）轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中并定容，取10mL溶液于15mL離心管中，8000r/min離心15min，上清液過0.22μm水相濾膜，待測。7.1.2片劑取10g～20g片劑粉碎、磨細(xì)（過80目篩）后混勻。準(zhǔn)確稱取試樣1g（精確至0.001g）于100mL三角瓶中，加入30mL磷酸溶液（5.4超聲提取15min使其充分溶解，放冷至室溫后，用磷酸溶液（5.4）轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中定容。取10mL溶液于15mL離心管中，使用超高速離心機(jī)8000r/min離心15min，再經(jīng)微孔濾膜（0.22μm）過濾，取濾液待測。7.1.3粉劑取10g～20g粉劑充分混勻。準(zhǔn)確稱取試樣1g（精確至0.001g）于100mL三角瓶中，加入30mL磷酸溶液（5.4超聲提取15min使其充分溶解，放冷至室溫后，用磷酸溶液（5.4）轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中定容。取10mL溶液于15mL離心管中，使用超高速離心機(jī)8000r/min離心15min，再經(jīng)微孔濾膜（0.22μm）過濾，取濾液待測。7.1.4飲料搖勻后準(zhǔn)確吸取混勻的試樣1mL于50mL容量瓶中用磷酸溶液（5.4）定容至刻度，搖勻。經(jīng)微孔濾膜（0.22μm）過濾，取濾液待測。7.2色譜條件7.2.1耐水相色譜柱：C18，250mm×4.6m，5μm，或相當(dāng)者；7.2.2流動相：磷酸溶液（5.4）—甲醇（95/5，υ/υ),使用前經(jīng)濾膜過濾，超聲。7.2.3流速：0.8mL/min。7.2.4進(jìn)樣量：10μL。7.2.5柱溫：30℃。7.2.6檢測波長：214nm。7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制準(zhǔn)確吸取一定量的蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液（5.3梯度稀釋成濃度約為100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液供高效液相色譜儀測定。7.4樣品測定3T/GDNBXXXX—2023取待測液（7.1）或相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（7.3）接照7.2色譜參考條件測定，作單點校準(zhǔn)或多點校準(zhǔn)，以保留時間定性，以色譜峰面積外標(biāo)法定量。待測液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中蒜氨酸的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見附錄A。8數(shù)據(jù)處理試樣中蒜氨酸的含量按如下公式進(jìn)行計算：幼=c1xn×10-3m——試樣中蒜氨酸的含量，單位為克每千克或克每升（g/kg或g/Lc1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算樣品測定液中蒜氨酸濃度，單位為（mg/Lv1——定容體積的數(shù)值，單位為毫升（mLm1——樣品質(zhì)量，單位為克或毫升（g或mLn——樣品儲備液稀釋倍數(shù)；測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表述，計算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。9精密度9.1重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于這2個測定值的算術(shù)平均值的10%。9.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于這2個測定值的算術(shù)平均值的15%。4T/GDNBXXXX—2023（資料性）蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見