藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文(共6篇)

篇一：藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1實(shí)驗(yàn)三 1、地西泮抗驚厥作用【目的】觀察地西泮的抗驚厥作用。【原理】尼可剎米可吸收入血，以至出現(xiàn)興奮、抽搐、驚厥。地西泮作用于邊緣系統(tǒng)，加強(qiáng)了gaba能神經(jīng)元的抑制作用，可有效地對(duì)抗中毒性驚厥?！緞?dòng)物】家兔1只，體重2kg~3kg?！舅幤贰?.5%地西泮溶液、25%尼可剎米?！酒鞑摹客霉潭ㄏ?、臺(tái)式磅秤、注射器（5ml）、針頭（6號(hào)）。【方法】取家兔1只，秤重并觀察正?；顒?dòng)情況，然后靜脈注射25%尼可剎米（0.5ml/kg給藥）。觀察動(dòng)物的活動(dòng)姿勢(shì)、肌張力及呼吸等變化。當(dāng)家兔出現(xiàn)明顯驚厥后，由耳靜脈緩慢推注0.5%地西泮（按0.5ml/kg~1ml/kg給藥），直到肌肉松弛為止?！窘Y(jié)果】將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表。表地西泮對(duì)兔驚厥作用的影響給藥前家兔反應(yīng)正常尼可剎米給藥后驚厥、肌肉強(qiáng)直肌肉松弛、鎮(zhèn)靜、催眠注射地西泮【討論題】地西泮抗驚厥作用、作用機(jī)制及用途有哪些？【注意事項(xiàng)】家兔出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥后，應(yīng)緩慢推注地西泮，過快可抑制呼吸。2、用化學(xué)刺激法觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用【目的】觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用；學(xué)習(xí)化學(xué)刺激法篩選鎮(zhèn)痛藥或比較藥物鎮(zhèn)痛效果的方法?！驹怼扛鼓さ母杏X神分布廣泛，把醋酸等化學(xué)刺激物注入腹腔，使小鼠產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，表現(xiàn)為腹部雙側(cè)凹陷，軀體扭曲，后肢伸展，臀部高起，稱扭體反應(yīng)。曲馬多有鎮(zhèn)痛作用，可明顯抑制扭體反應(yīng)。【動(dòng)物】小鼠2只，體重28g~32g?！舅幤贰?.2%鹽酸曲馬多溶液、0.6%醋酸溶液、生理鹽水。【器材】天平、注射器（1ml）、針頭（5號(hào)）、秒表?！痉椒ā?、 取小鼠2只，稱重后觀察正?；顒?dòng)后標(biāo)號(hào)。2、 甲鼠腹腔注射鹽酸曲馬多溶液0.1ml/10g；乙鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g。3、 給藥30min后兩鼠均腹腔注射醋酸0.2ml/只，觀察記錄注射醋酸后15min內(nèi)兩鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)情況?！窘Y(jié)果】表藥物對(duì)醋酸所致小鼠疼痛作用的影響鼠號(hào)藥物用藥前扭體反應(yīng)次數(shù)甲乙醋酸---鹽酸曲馬多醋酸---生理鹽水419用藥后扭體反應(yīng)次數(shù)016【討論題】結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明曲馬多的鎮(zhèn)痛效果與臨床用途?！咀⒁馐马?xiàng)】1、 醋酸溶液在實(shí)驗(yàn)前臨時(shí)配制。2、 小鼠體重輕，扭體反應(yīng)出現(xiàn)率低。3、 扭體反應(yīng)任何一項(xiàng)表現(xiàn)即可為陽性，扭體反應(yīng)減少50%以上，才能認(rèn)為有鎮(zhèn)痛效力。篇二：藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)病理學(xué)》實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告（一）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)性肺水腫時(shí)間成績實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜げ±砩韺W(xué)和病理解剖學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法，掌握急性肺水腫的影響因素。材料：家兔、手術(shù)器材、靜脈輸液器材、生理鹽水、5%烏拉坦和1mg腎上腺素等。實(shí)驗(yàn)方法：給麻醉家兔做氣管插管手術(shù)后，按80ml/kg給家兔頸總靜脈輸液，150~180滴/分。輸液完成后，靜脈注射0.5mg/5ml腎上腺素。觀察1家兔呼吸頻率和有無呼吸困難；2氣管插管處有無異常。出現(xiàn)后，夾住氣管，處死動(dòng)物，開胸結(jié)扎支氣管，游離兩肺。吸干表面水分，稱肺重量，計(jì)算系數(shù)。（肺重/體重—正常4~5）。觀察肺臟及剖面。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:呼吸觀察：輸液完成，給腎上腺素后，呼吸頻率由60/分升高至100/分并呼吸增強(qiáng)；鼻、耳部皮膚青紫，氣管插管處可見粉紅色泡沫粘液。肺重系數(shù):0.175/2.5*100=7標(biāo)本觀察：肺暗紅色，彈性減弱。剖面有粉紅色泡沫液體流出。討論與結(jié)論：成功演繹急性肺水腫病理形成過程。大量快速輸液，使血漿膠體滲透壓下降50%左右，腎上腺素起到強(qiáng)心作用升高血壓，增加肺毛細(xì)血管壓。兩個(gè)因素使肺內(nèi)組織液快速大量生成，進(jìn)一步漏出進(jìn)入肺泡；毛細(xì)血管擴(kuò)張，少量滲出紅細(xì)胞，因此出現(xiàn)粉紅色泡沫液體。肺水腫影響肺換氣，出現(xiàn)發(fā)紺，皮膚青紫色。肺水腫表現(xiàn)器官重量增加。實(shí)驗(yàn)報(bào)告（二）病理觀察觀察內(nèi)容：大葉性肺炎大體標(biāo)本，脂肪肝大體標(biāo)本。急性肝炎病理組織切片。肉眼所見：標(biāo)本1病變肺葉腫脹，質(zhì)地硬；切面灰紅色，較粗糙。肺胸膜表面有纖維素滲出物附著。標(biāo)本2肝體積增大，被摸緊繃，表面油膩光亮，肝臟呈淡黃色。鏡下所見：高倍鏡：肝細(xì)胞體積腫大多見，胞漿淡染疏松狀；肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，壞死細(xì)胞大小不等，細(xì)胞核凝固染色深，還可見細(xì)胞核碎裂呈小塊狀，還可見細(xì)胞核疏松近消失。匯管區(qū)和壞死區(qū)有明顯的炎性細(xì)胞侵潤。實(shí)驗(yàn)報(bào)告（三）病例討論教師問題：這個(gè)病人的以下臨床表現(xiàn)各考慮是什么病變？1、 既往勞累、激動(dòng)時(shí)發(fā)作，心前區(qū)痛，有伴隨癥狀，休息、治療后緩解。2、 此次下午心前區(qū)劇痛，呼吸困難，咳粉紅色泡沫痰，兩肺濕羅音。3、 晚間突然昏倒，神志不清，搶救無效死亡。死者尸檢心、腦、肺會(huì)有何種表現(xiàn)？學(xué)生分析初步結(jié)論心絞痛心肌梗死和左心衰腦梗死或腦出血支持初步結(jié)論的要有下例尸檢結(jié)果心臟：冠狀動(dòng)脈狹窄或血栓栓塞；心肌梗死灶邊緣地圖狀，邊緣有出血帶；壞死組織色淺凝固狀。腦：體積增大腦水腫；腦動(dòng)脈粥樣硬化、狹窄或血栓栓塞；腦梗死灶色淺，邊緣有出血帶；腦出血病灶。肺：兩肺體積增大，顏色暗紅，切面見暗褐色泡沫液體流出。小組討論摘要臨床表現(xiàn)和病理檢驗(yàn)，診斷為動(dòng)脈粥樣硬化癥引起心、腦等重要器官病變。教師總結(jié)理論聯(lián)系實(shí)際，收到良好的學(xué)習(xí)效果。篇三：藥理實(shí)驗(yàn)報(bào)告藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)校：學(xué)院：班級(jí)：學(xué)號(hào)：姓名：指導(dǎo)老師：元胡止痛片對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛抗炎鎮(zhèn)痛活性研究組員：指導(dǎo)老師:摘要：目的：研究元胡止痛片是否具有鎮(zhèn)痛抗炎的效果。方法：使用小鼠熱板法、醋酸扭體法、耳腫脹法，并分別建立小鼠的鎮(zhèn)痛抗炎模型，觀察元胡止痛片對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛抗炎作用的影響。結(jié)果：1.熱板法：元胡止痛片對(duì)小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)中給藥60分鐘后有顯著性差異，陽性藥阿司匹林與生理鹽水組相比有明顯的痛閾降低，低濃度與生理鹽水組相比有痛閾降低。醋酸扭體法：實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著差異，阿司匹林陽性藥與高濃度元胡溶液相比有顯著性差異，陽性藥有明顯的鎮(zhèn)痛作用。而阿司匹林組與生理鹽水，低濃度與生理鹽水組沒有出現(xiàn)顯著性差異。3.熱腫脹法：結(jié)果顯示無顯著性差異，陽性藥阿司匹林沒有明顯的抗炎活性。結(jié)論：阿司匹林陽性藥有抗炎鎮(zhèn)痛作用，元胡止痛片無抗炎鎮(zhèn)痛作用。關(guān)鍵詞：元胡止痛片；鎮(zhèn)痛；抗炎；熱板法；醋酸扭體法；耳腫脹法元胡止痛片為中藥復(fù)方制劑，由延胡索（醋制）、白芷等中藥組成，延胡索（醋制）具辛、苦、溫，歸肝脾經(jīng)，由活血、理氣、止痛等功效；白芷辛溫，歸胃、大腸、肺經(jīng)，其功能與主治為散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿。該制劑為中國藥典方，臨床上用于氣滯血淤的胃痛、脅痛、頭痛及月經(jīng)痛等。由于直腸給藥50％以上的藥物可以不通過肝臟而直接進(jìn)入血液作用于全身，可避免口服引起的胃腸道刺激，同時(shí)減少。胃液和肝臟對(duì)藥物的破壞和降解，從而提高藥效減輕藥物的不良反應(yīng)。另外，直腸給藥藥物吸收緩慢，可使藥效維持較長的時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)元胡止痛栓的鎮(zhèn)痛抗炎作用的研究。1材料與方法1.1動(dòng)物健康昆明種小白鼠，體重25±8g，雌性32只，雄性32只。健康昆明種小白鼠，體重40±10g，雄性，32只。藥品與試劑元胡止痛片，廣西半宙天龍制藥有限公司，批號(hào)130807；0.9%氯化鈉注射液，新疆華世丹藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)214070702；阿司匹林腸溶片，臨汾寶珠制藥有限公司，批號(hào)140401；二甲苯，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)120411；冰乙酸，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，批號(hào)090527。1.3儀器yls-6b智能熱板儀，淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司，出廠日期071018；天孚牌jyt-5架盤藥物天平，生產(chǎn)日期2011年8月；yls-25a電動(dòng)耳腫打耳器，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司，出廠日期20140521；電子天平。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2.1熱板法2.1.1動(dòng)物篩選致痛潛伏期（痛閾值）為5~45s之間的合格雌性小鼠。32只，熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)，篩選痛閾值合格的小鼠，取早小鼠于給藥前先用熱板儀于55±0.5°C分別測(cè)定每只小鼠的正常痛閾值［將小鼠放于智能熱板儀上至出現(xiàn)舔后足的所需時(shí)間作為痛閾值（s），連續(xù)2次，間隔30S,測(cè)定平均值即為正常痛閾值］。將舔后足時(shí)間＜5s或〉45s，或跳躍者不用于此實(shí)驗(yàn)。2.1.2分組按體重隨機(jī)分組，分4組，編號(hào)，每組8只。2.1.3給藥1組生理鹽水空白對(duì)照組（按0.1mg/10g灌胃生理鹽水），2組阿司匹林陽性對(duì)照組（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3組元胡止痛片低劑量組（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4組元胡止痛片高劑量組（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。2.1.4測(cè)定痛閾值各鼠給藥前測(cè)定正常痛閾值。取智能熱板儀，調(diào)節(jié)溫度，使溫度恒定在55±0.5C,取每組合格雌性小鼠，按2.1.2灌胃不同藥液，測(cè)定給藥后每組15、30、60、90分鐘后各鼠痛閾值。2.1.5痛閾提高百分率用藥后平均熱痛閾值—用藥前平均痛閾痛閾提高百分率=用藥前平均痛閾值2耳腫脹法2.2.1分組取雄性小鼠25±8g，32只，隨機(jī)分為4組，編號(hào)，每組8只。2.2.2給藥1組生理鹽水空白對(duì)照組（按0.1mg/10g灌胃生理鹽水），2組阿司匹林陽性對(duì)照組（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3組元胡止痛片低劑量組（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4組元胡止痛片高劑量組（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。2.2.3測(cè)量每組給藥30分鐘后，給小鼠的右耳前后涂上二甲苯0.1ml/只，30分鐘后處死小鼠，沿耳廓對(duì)稱剪下兩只耳殼，用yls-25a電動(dòng)耳腫打耳器取耳片，稱重，以兩耳重量差計(jì)算腫脹度。2.2.4計(jì)算腫脹率腫脹率（%）=［右耳片重（mg）-左耳片重（mg）］/左耳片重（mg）X100%2.3醋酸扭體法2.3.1分組取雄性小鼠40±10g，32只，隨機(jī)分為4組，編號(hào)，每組8只。2.2.2給藥1組生理鹽水空白對(duì)照組（按0.1mg/10g灌胃生理鹽水），2組阿司匹林陽性對(duì)照組（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3組元胡止痛片低劑量組（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4組元胡止痛片高劑量組（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。給藥1h后給每組小鼠按0.1ml/10g腹腔注射0.6%的醋酸（臨用前新鮮配制）。2.2.3觀察5min后記錄15分鐘內(nèi)各小鼠出現(xiàn)“扭體反應(yīng)”的次數(shù)。3結(jié)果3.1熱板法表1元胡止痛片對(duì)小鼠的痛閾影響（x?s，n=8）*100%組別生理鹽水空白對(duì)照組阿司匹林陽性藥對(duì)照組低濃度元胡止痛片對(duì)照組高濃度元胡止痛片對(duì)照組給藥劑量給藥60min后給藥15min后（s）給藥30min后（s）給藥90min后（s）mg/10g（s）**0.124.68±12.9029.52±19.4223.61±1.2837.82±22.0121.75±15.26 16.54±9.8520.96±8.6915.76±2.76*23.81±19.6614.90±2.77*30.72±16.10 18.73±3.8123.85±18.250.61.318.75±17.1016.64±6.3819.17±6.43**,60分鐘時(shí)各組出現(xiàn)顯著差異，p<0.01*,1生理鹽水空白對(duì)照組vs2阿司匹林陽性對(duì)照組，p<0.05 *,1生理鹽水空白對(duì)照組vs3低濃度元胡溶液組，圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看p<0.05圖1元胡止痛片給藥60分鐘后對(duì)小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)的鎮(zhèn)痛作用的影響耳腫脹法表3元胡止痛片對(duì)小鼠的抗炎作用（x?s,n=8）組別生理鹽水空白對(duì)照組給藥劑量mg/10g0.1腫脹率（%） 62±3367±4672±32 64±50阿司匹林陽性藥對(duì)照組4低濃度元胡止痛片對(duì)照組0.6高濃度元胡止痛片對(duì)照組1.3圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看圖2元胡止痛片對(duì)小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)抗炎作用的影響醋酸扭體法表2元胡止痛片對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用（x?s，n=8）組別生理鹽水空白對(duì)照組給藥劑量mg/10g0.1扭體次數(shù)*15±182±3‘20±1933±24阿司匹林陽性藥對(duì)照組4低濃度元胡止痛片對(duì)照組0.6高濃度元胡止痛片對(duì)照組1.3*,小鼠鎮(zhèn)痛作用出現(xiàn)顯著差異，p<0.052阿司匹林陽性對(duì)照組vs4高濃度元胡溶液組,p<0.05圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看圖3元胡止痛片對(duì)小鼠扭體實(shí)驗(yàn)的鎮(zhèn)痛作用影響結(jié)果分析討論參考文獻(xiàn)：[1]李見春，黃繼漢，桂常青,鄭青山?元胡止痛栓鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[j].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004(04) [2]唐嵐.元胡止痛分散片藥學(xué)研究[j].成都中醫(yī)藥大學(xué),2002徐叔云(aufy)，卞如濂(banrl),陳修(chenx).藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)?第3版[m].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002．886，911，934，1408．楊巧芳，孟慶剛.炎癥動(dòng)物模型探要[j].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2008,26(3):516[5]林定齊?非甾體類抗炎藥及解熱鎮(zhèn)痛藥用藥情況分析[j]當(dāng)代醫(yī)學(xué)2012(02)劉和莉，李月玲，薛永志.不同溫度和醋酸濃度對(duì)小鼠扭體疼痛模型的影響[j].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012(02)中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))[m].1994；87篇四：藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(3)模版藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)(人體解剖部分)報(bào)告(3)圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看篇五：藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)流式細(xì)胞術(shù)背景：細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(ps)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸又脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的ps從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。annexinv是一種分子量為35-36kd的ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的ps高親和力特異性結(jié)合。ps外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，dna片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得annexinv與ps的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。檢測(cè)原理：用標(biāo)記了fitc的annexinv作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合annexinv-fitc。正常細(xì)胞核早期凋亡的細(xì)胞膜是完整的，propidiumiodide(pi)是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，pi能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。將annexinv與pi匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與annexinv-fitc和pi結(jié)合顯色，而pi則被排除在活細(xì)胞(fitc陰性)和早期凋亡細(xì)胞(fitc陽性)之外。在沒有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的最后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被fitc和pi結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，左下象限顯示活細(xì)胞，為(fitc-/pi-)；右上象限是非活細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，為(fitc+/pi+)；而右下象限為凋亡細(xì)胞，顯現(xiàn)(fitc+/pi-)。樣品染色：1、 離心收集懸浮細(xì)胞，棄培養(yǎng)基。貼壁細(xì)胞用不含edta的胰酶消化后離心(300g*8min),收集細(xì)胞。胰酶消化時(shí)間不宜過長，以防引起假陽性。2、 用冷pbs洗滌細(xì)胞兩次，盡可能吸盡pbs。3、用400ul(200ul)1xannexinv結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約1x10*6cells/ml。4、在細(xì)胞懸浮液中加入5ulannexinv-fitc染色液，輕輕混勻后于2-8度避光條件下孵育15分鐘。5、加入10ulpi染色液后輕輕混勻于2-8度避光條件下孵育5分鐘。6、立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)。注意事項(xiàng)：1、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。2、細(xì)胞處理要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。3、 annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時(shí)間。有必要時(shí)可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。4、 由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速和動(dòng)態(tài)的過程，因此最好在染色后立即進(jìn)行分析。5、 使用annexinv-fitc試劑盒檢測(cè)凋亡需要針對(duì)活細(xì)胞。不需要固定細(xì)胞，固定操作會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。6、 如果細(xì)胞樣品中含有血小板，如血液樣品，請(qǐng)使用含有edta的緩沖劑并200g離心洗去血小板。因?yàn)檠“搴衟s,能與annexinv結(jié)合。7、 流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量應(yīng)不低于1x10*5。8、 如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意用pbs洗凈去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解annexinv-fitc,最終導(dǎo)致染色失敗。9、 對(duì)于貼壁細(xì)胞，消化是一個(gè)關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡時(shí)如有漂浮細(xì)胞，需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色；處理貼壁細(xì)胞時(shí)要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞，胰酶的消化時(shí)間過短，細(xì)胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細(xì)胞膜的損傷，pi攝入過多；消化時(shí)間過長，細(xì)胞膜同樣易造成損傷，甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與annexinv-fitc的結(jié)合。消化時(shí)將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖使胰酶與細(xì)胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時(shí)間，待細(xì)胞空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中應(yīng)不用edta，edta影響annexinv與ps的結(jié)合。10、 成功的檢測(cè)凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類型、細(xì)胞膜上ps的密度、發(fā)生凋亡時(shí)ps翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時(shí)間以及實(shí)驗(yàn)過程中機(jī)械損傷的程度等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對(duì)試驗(yàn)成功與否至關(guān)重要。務(wù)必根據(jù)每次實(shí)驗(yàn)樣本類型和操作流程對(duì)這些步驟進(jìn)行優(yōu)化。11、 有極少數(shù)細(xì)胞株其細(xì)胞膜上ps的密度極低，難以染色，此時(shí)不適合用annexinv方法檢測(cè)凋亡。細(xì)胞、組織基因組dna提取試劑盒(離心柱型)樣品預(yù)處理：動(dòng)物組織：1、 切取5-20mg的動(dòng)物組織材料，在液氮中將組織研磨成粉末，并轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中。2、 然后加400ulaclsolution入和10ul的proteinasek。如有凝結(jié)塊，可以用槍頭吹吸打碎。3、 震蕩混勻1分鐘，然后置于55c放置20分鐘一3小時(shí)，在此期間間或取出混勻，有助于充分裂解。裂解完全的樣品應(yīng)澄清透明。不同來源的組織，完全裂解時(shí)間可能差異較大。4、 取出樣品，待降至室溫時(shí)輕輕震蕩混勻。嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)尾巴：1、從動(dòng)物尾部末端切取0.5—1cm的組織材料，在液氮中將組織研磨成粉末，并轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中。2、然后加入400ulaclsolution和10ul的proteinasek。3、震蕩混勻1分鐘，然后置于55c水浴10—20分鐘，在此期間可以適當(dāng)取出混勻，有助于充分裂解。4、取出樣品，待降至室溫時(shí)輕輕震蕩混勻。培養(yǎng)成熟的動(dòng)物細(xì)胞：1、在500~1000rpm下離心約3~5分鐘，收集細(xì)胞。2、加入400ulaclsolution和10ul的proteinasek。3、震蕩混勻1分鐘，然后置于55c水浴10—20分鐘，在此期間可以適當(dāng)取出混勻，有助于充分裂解。4、取出樣品，待降至室溫時(shí)輕輕震蕩混勻。dna提?。航?jīng)過上面預(yù)處理的樣品按照下面步驟提取基因組dna。5、 在經(jīng)過預(yù)處理好的樣品中，依次加入300ulextsolution和300ulabsolution,用力搖勻，然后12000rpm離心5分鐘。溶液將分層，上層為藍(lán)色的抽屜層，下層為透明水相，兩層溶液中間可能會(huì)有部分沉淀層，dna在下層水相中。注：如樣品量較少或溶液澄清不粘稠，可不添加extsolution，只添加300ulabsolution,搖勻后離心。6、 將槍頭穿過上層溶液，深入到下層溶液，將下層溶液仔細(xì)吸出到gencleancolumn中，盡量避免吸到上層溶液及中間層的沉淀。7、 8000rpm離心1分鐘，取下gencleancolumn，倒掉收集管中廢液。8、 將gencleancolumn放回收集管中，加入500ulwashsolution,8000rpm，室溫離心1分鐘。9、 重復(fù)步驟8一次。10、 取下genclean柱，棄去收集管中的廢液。將柱放回收集管中，12000rpm,室溫離心1分鐘，以除去殘留washsolution。11、 將柱放入新的潔凈1.5ml的離心管中，在柱中央加入50~100ulelutionnbuffer,室溫或55c放置2分鐘。然后12000rpm,室溫離心1分鐘。離心管中的液體即為基因組dna。根據(jù)用途，樣品可于4c或-20c保存。乳酸脫氫酶（ldh）測(cè)定試劑盒一、 試劑盒組成及配制：試劑一：基質(zhì)緩沖液試劑二：輔酶1，配制：每支粉劑加1.3ml雙蒸水溶解，溶解后冷凍可保存2周，如需多次使用建議分裝冷凍。試劑三：2,4-二硝基苯肼試劑四：4mol/lnaoh，0.4mol配制：10倍稀釋。試劑五：2umol/l丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液。二、 測(cè)定步驟：圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看三、 計(jì)算及舉例：血清中l(wèi)dh活性（u/l）=測(cè)定od值-對(duì)照od值/標(biāo)準(zhǔn)od值-空白o(hù)d值x標(biāo)準(zhǔn)品濃度xnx1000（n為待測(cè)樣本測(cè)定前稀釋倍數(shù)）乳酸脫氫酶釋放率=培養(yǎng)基中酶活性/培養(yǎng)基中酶活性+細(xì)胞層酶活性。試驗(yàn)中需要同時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)基和細(xì)胞裂解后細(xì)胞懸液中的乳酸脫氫酶。四、測(cè)定原理：ldh乳酸圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看丙酮酸37c水浴丙酮酸+2,4-二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（紅棕色）堿性根據(jù)比爾定律，可測(cè)乳酸脫氫酶活性。五、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：1、前處理：將2umol/ml的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品用雙蒸水分別200倍、100倍、50倍、20倍、10倍、5倍、2倍稀釋后按照操作表制作標(biāo)準(zhǔn)曲線?；靹?，室溫放置5分鐘，波長450nm，酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。免疫細(xì)胞化學(xué)（免疫熒光染色）一、試劑及材料：六孔板、蓋玻片、移液槍、槍頭、丙酮、pbs、tritonx-100、h2o2、bsa、一抗、二抗、濕盒、甘油。二、方法：將已滅菌的蓋玻片置于6孔培養(yǎng)板中，按10*4~10*5/ml的密度將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中進(jìn)行爬片，培養(yǎng)6~12小時(shí)，待細(xì)胞貼壁后，3~5天進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定。pbs清洗時(shí)將玻片置于小培養(yǎng)皿中。步驟如下：1、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.2、 95%酒精（或冰丙酮等其它固定劑）固定15min.3、 空氣干燥5min。4、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min。5、 0.3%tritonx-100（pbs配）孵育1次15min.6、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.7、 3%h2o2（pbs配）孵育15min.8、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.9、 5%bsa（,pbs配）封閉標(biāo)本3min.10、 一抗（1%bsa配，1:100~1:200）4c過夜。陰性對(duì)照最好用一抗來源血清，否則用pbs液（濕盒）11、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.12、 二抗孵育（濕盒）1%bsa配，30min，避光；13、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min，dapi染核5min，pbs清洗標(biāo)本3次，各3mino 14、95%甘油封片防止熒光猝滅。注意：沖洗時(shí)只需輕輕震蕩培養(yǎng)皿（易脫片）加一抗、二抗后沖洗時(shí)第一次需將玻片傾斜。核蛋白提取試劑盒一、產(chǎn)品組成：提取液a、提取液b、蛋白酶抑制劑混合物、磷酸酶抑制劑混合物。1、 蛋白酶抑制劑混合物避免反復(fù)凍融；2、 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。3、蛋白提取液、磷酸酶抑制劑2~8c保存；4、蛋白酶抑制劑-20c保存。二、使用方法：使用注意事項(xiàng)：1、 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。2、 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20c冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程需保持樣品處于低溫。3、 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。4、 可以根據(jù)自己試驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。5、 western試驗(yàn)內(nèi)參可以選用lamina、laminb、tbp、histonh3.細(xì)胞蛋白的提?。?、 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液a和b中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。2、 取5~10x10*6個(gè)細(xì)胞，在4c，500xg條件下離心2~3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。3、 用冷pbs洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。4、 每20ul細(xì)胞壓積中加入200ul冷的提取液a,高速渦旋震蕩15秒或吹打混勻，置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋震蕩或吹打混勻。5、 再次高速渦旋震蕩5秒，然后在4c，12000g條件下離心5分鐘。6、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80冰箱保存?zhèn)溆谩?、 沉淀用pbs洗滌一次，然后再4c，12000g條件下離心5分鐘，棄上清。8、 在沉淀中加入200ul冷的提取液b,高速渦旋震蕩15秒。9、 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋震蕩15秒。10、 在4c，12000g條件下離心10分鐘。11、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。12、 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠卧囼?yàn)。注：a..細(xì)胞數(shù)量根據(jù)試驗(yàn)情況調(diào)整，每次的提取液用量并不是一定的，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。b.建議用bca法進(jìn)行蛋白定量。c,蛋白樣品-80存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。組織蛋白的提?。?、 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液a和b中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。2、 取適量組織樣本剪碎，加冷pbs，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體（或用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。3、 在4c，500g條件下離心2-3分鐘，棄上清。4、每20ul細(xì)胞壓積中加入200ul冷的提取液a，高速渦旋震蕩15秒或吹打混勻， 置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋震蕩或吹打混勻。5、 再次高速渦旋震蕩5秒鐘，然后在4c，12000g條件下離心5分鐘。6、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80冰箱保存?zhèn)溆谩?、 沉淀用pbs洗滌一次，然后在4c，12000g條件下離心5分鐘，棄上清。8、在沉淀中加入200ul冷的提取液b，高速渦旋震蕩15秒。9、置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋震蕩15秒。10、在4c，12000g條件下離心10分鐘。11、快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。12、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。注：a,用液氮研磨的方法更佳。b建議用bca方法進(jìn)行蛋白定量。c,蛋白樣品-80存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。篇六：藥理實(shí)驗(yàn)報(bào)告1圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看中樞藥物篩選與有效性研究設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看圖片已關(guān)閉顯示，點(diǎn)此查看題目：作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮藥物ld50的測(cè)定。姓名：何嘉?。ò鄤e，實(shí)驗(yàn)組別,學(xué)號(hào)全號(hào)）藥物制劑12（1）班實(shí)驗(yàn)2組1203502116【摘要】目的：作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物通?？煞秶愖饔糜谥袠猩窠?jīng)系統(tǒng)的藥物主要影響遞質(zhì)和受體而發(fā)揮作用，而其藥理效應(yīng)主要表現(xiàn)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的增強(qiáng)或抑制；通過觀察動(dòng)物的藥物反應(yīng)，可初步區(qū)分藥物的特性。通過藥物ed50或者ld50的測(cè)定，分析其有效性和安全性。中樞神經(jīng)興奮藥是一類能選擇性興奮中樞神經(jīng)藥物，提高其功能活動(dòng)的藥物。按中樞興奮藥物的特點(diǎn)劃分：1神經(jīng)振奮藥；2蘇醒藥；3改善腦代謝的藥物。1中樞興奮藥物的作用部位可隨劑量的增加而擴(kuò)大，大劑量可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的廣泛興奮導(dǎo)致驚厥。我們采用平均分配法測(cè)量藥物的ld0、ld100的大致區(qū)間，再在正式試驗(yàn)中測(cè)量小鼠的死亡率，從而得到藥物具體的ld50。小鼠的注射方式都為腹腔注射。從結(jié)果我們可以判斷出來，預(yù)實(shí)驗(yàn)中可判斷l(xiāng)d0為20%稀釋母液，ldl00為60%稀釋母液，該興奮藥的半數(shù)致死量為…從而我們得出結(jié)論：該興奮藥的半數(shù)致死量為?。【關(guān)鍵詞】中樞神經(jīng)興奮藥平均分配法腹腔注射半數(shù)致死量量效關(guān)系、八.、■前言現(xiàn)今社會(huì)人們對(duì)健康的要求有了更高的要求，作為治療、預(yù)防和診斷疾病的藥物，人們對(duì)它的安全性的研究技術(shù)也不斷發(fā)展。對(duì)制藥行業(yè)來說，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（cns）藥物或許是最具挑戰(zhàn)性，同時(shí)又是回報(bào)最豐厚的市場(chǎng)之一。快速增的cns藥物市場(chǎng)中，仍有許多尚未得到滿足的臨床需求以及新的治療方法，近年來,研究人員針對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的特點(diǎn)開發(fā)了多種療效高、使用方便的藥物新制劑，對(duì)人類治療中樞系統(tǒng)疾病有重要的作用。作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物主要是影響遞質(zhì)和受體，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)不但神經(jīng)遞質(zhì)種類較多,而且神經(jīng)激素及神經(jīng)調(diào)質(zhì)等亦起重要作用。目前作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物種類很多，如抗焦慮藥、抗抑郁藥、催眠藥、抗震顫麻痹藥和抗精神失常藥等。這類藥物用藥時(shí)間長，副作用出現(xiàn)頻率高，有可能出現(xiàn)不可逆的后遺癥；有的藥物過量服用，還能引起致死性中毒。對(duì)此必須高度重視。一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)如何篩選有效的藥物，通過設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)鍛煉和提高科學(xué)研究的思維方式、1庫寶善主編，神經(jīng)精神藥理學(xué)，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2006,1藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則和方案。最終達(dá)到提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題、提出問題、分析問題和解決問題能力，提高學(xué)生的自學(xué)能力、實(shí)踐能力和團(tuán)隊(duì)協(xié)作能力，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維和創(chuàng)新能力。二.實(shí)驗(yàn)原理作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物主要影響遞質(zhì)和受體而發(fā)揮作用，而其藥理效應(yīng)主要表現(xiàn)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的增強(qiáng)或抑制，通過觀察動(dòng)物的藥物反應(yīng)，可初步區(qū)分藥物的特性。通過藥物ed50或ld50的測(cè)定，分析其有效性和安全性。藥物給藥藥劑量與動(dòng)物死亡率間呈正態(tài)分布。以對(duì)數(shù)劑量為橫坐標(biāo)、累加死亡率為縱坐標(biāo)作圖，即可得到一對(duì)稱s型曲線，其兩端較平坦，中間較陡，說明兩端處劑量稍有變化時(shí)死亡率的改變不易表現(xiàn)出來，在50%死亡率處斜率最大，該處劑量稍有變化時(shí)，其死亡