第三章+藥物的雜質(zhì)檢查

第三章藥物的雜質(zhì)檢查藥物分析Contents一般雜質(zhì)的檢查3藥物雜質(zhì)與限量1雜質(zhì)檢查方法2特殊雜質(zhì)的檢查4第一節(jié)藥物的雜質(zhì)與限量一、藥物的雜質(zhì)與純度1.純度（Purities）藥物的純凈程度2.雜質(zhì)

(Impurities)

藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害的物質(zhì)。簡言之:任何影響藥品純度的物質(zhì)。3.藥物純度與試劑純度共同點——均規(guī)定所含雜質(zhì)的種類和限量.不同點①藥物純度從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等方面考慮,只有合格品和不合格品.

②試劑純度是從雜質(zhì)可能引起的化學(xué)變化對使用的影響以及試劑的使用范圍和使用目的加以規(guī)定,它不考慮雜質(zhì)對生物體的生理作用及毒副作用.化學(xué)試劑——一般分為4個等級〔基準試劑、優(yōu)級純或特種試劑(光譜純、色譜純、農(nóng)藥殘留檢測級)、分析純和化學(xué)純〕化學(xué)試劑不能代替藥品！二、雜質(zhì)的來源雜質(zhì)的來源生產(chǎn)過程儲藏過程合成過程中，原料不純或反應(yīng)不完全，中間體、副產(chǎn)物在精制中未除盡制劑過程試劑、溶劑、還原劑殘留異構(gòu)體、多晶體使用的金屬器皿、裝置、工具引入的金屬雜質(zhì)在溫度、濕度、日光、空氣等外界條件影響下，或因微生物的作用，引起藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化生產(chǎn)過程中引入雜質(zhì)例子:雙氯非那胺主要用于治療各型青光眼（開角型、閉角型及繼發(fā)性青光眼），尤其適用于對乙酰唑胺有耐藥性的患者。7例：阿斯匹林由水楊酸乙?；频?+乙?；煌耆畻钏?雜質(zhì))+8貯藏過程中引入的雜質(zhì)例子麻醉乙醚在日光、空氣及濕氣作用下,易氧化分解為醛及有毒的過氧化物。CH3CH2OCH2CH3

CH3CHO+CH3CH(OH)-O-O-CH(OH)CH3

（二羥乙基過氧化物）藥典規(guī)定:起封后24小時內(nèi)使用易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等生產(chǎn)、貯藏過程中都引入的雜質(zhì)例子:抗甲狀腺藥卡比馬唑自然界分布廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)，它們含量的高低與生產(chǎn)工藝水平密切相關(guān)。所以也常稱為信號雜質(zhì)。是指在特定的藥物生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)，也稱有關(guān)物質(zhì)。這類雜質(zhì)隨藥物不同則不同。三、雜質(zhì)的種類如重金屬、砷鹽一般無毒，但其含量的多少可反映出藥物的純度情況。四、雜質(zhì)的限量(LimitTest)藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。通常用百分之幾（%）或百萬分之幾(ppm)

三種檢查方法比較法靈敏度法標準對照法限量檢查法操作:平行試驗

比較兩比色管的顏色或濁度,判斷雜質(zhì)限量是否符合規(guī)定。管2（對照管）管1（樣品管）

取限度量被檢雜質(zhì)的對照溶液,與一定量供試品溶液在相同條件下處理,比較反應(yīng)結(jié)果,判斷供試液中所含雜質(zhì)限度是否符合規(guī)定。對照法注意單位統(tǒng)一！限量計算公式

若用ppm表示雜質(zhì)限量則：注意:①單位是否統(tǒng)一②供試品是否有稀釋③表示方法%或ppm

在供試品溶液中加入試劑,在試驗條件下反應(yīng),不得出現(xiàn)正反應(yīng).靈敏度法比較法

取一定量供試品,在規(guī)定條件下測定待檢雜質(zhì)的參數(shù),與規(guī)定限量比較,判斷供試品中雜質(zhì)限量.示例一茶苯海明中氯化物檢查取本品0.30g

置200ml量瓶中，加水50ml、氨試液3ml和10%硝酸銨溶液6ml，置水浴上加熱5min，加硝酸銀試液25ml，搖勻，再置水浴上加熱15min，并時時振搖，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，濾過，取續(xù)濾液25ml置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀釋至50ml，搖勻，在暗處放置5min，與標準氯化鈉溶液(10μg

Cl-/ml)1.5

ml制成的對照液比較，求氯化物的限量。C=10μg/mlV=1.5mlS=?示例二

腎上腺素中酮體的檢查取本品0.2g,置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(9-2000)溶解并稀釋至刻度，搖勻，在310nm處測定吸光度不得超過0.05，酮體的百分吸收系數(shù)為435，求酮體的限量V樣品=100mlC酮體=?S樣品=0.2g示例三

對乙酰氨基酚中氯化物的檢查取對乙酰氨基酚2.0g，加水100mL加熱溶解后冷卻，濾過，取濾液25mL，依法檢查氯化物，發(fā)生的渾濁與標準氯化鈉溶液5.0mL（每1mL相當(dāng)于10g的Cl）制成的對照液比較，不得更濃。求氯化物的限量是多少？示例四

谷氨酸鈉中重金屬的檢查取本品1.0g，加水23mL溶解后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5)2mL，依法檢查，與標準鉛溶液（10gPb/1mL）所呈顏色比較，不得更深，重金屬限量為百萬分之十，求所取標準鉛溶液多少mL？習(xí)題一磷酸可待因中嗎啡的檢查取本品0.10g,加鹽酸溶液(9-1000)使溶解成5ml，加亞硝酸鈉試液2ml，放置15min，加氨試液3ml，所顯顏色與嗎啡試液[取無水嗎啡2.0mg，加鹽酸溶液(9-1000)使溶解成100ml]5.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深。問限量是多少？習(xí)題二苯巴比妥鈉中重金屬的檢查取本品2.0g,加水32ml，溶解后緩緩加入1mol/L鹽酸溶液8ml，充分振搖，靜置數(shù)分鐘，濾過，取濾液20ml，加酚酞指示液1滴與氨試液恰顯粉紅色，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水適量成25ml，依法檢查，含重金屬不得超過10ppm。試計算應(yīng)取得標準鉛溶液(每1ml相當(dāng)于10μgPb)的體積。

第二節(jié)雜質(zhì)的檢查方法一、雜質(zhì)的研究規(guī)范（一）有機雜質(zhì)在質(zhì)量標準中的項目名稱

1.以雜質(zhì)的名稱作為項目名稱25

中國藥典（2010）收載硝苯地平有關(guān)物質(zhì)中雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅱ262.以某類雜質(zhì)的總稱作為項目名稱雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不明確，如硝酸毛果蕓香堿中的“其他生物堿”3.以檢測方法作為項目名稱雜質(zhì)結(jié)構(gòu)未知，也沒有具體類別；如雜質(zhì)吸光度、溶液透光率27(二）雜質(zhì)檢查項目的確定由質(zhì)量研究和穩(wěn)定性研究中檢出的，并在批量生產(chǎn)中出現(xiàn)的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物。根據(jù)其起始原料、生產(chǎn)工藝及穩(wěn)定性情況確定。

28（三）雜質(zhì)限度的確定293031二、雜質(zhì)的常用檢查法（二）色譜方法（一）化學(xué)方法（三）光譜方法（四）其他方法1.顯色反應(yīng)：雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色

生產(chǎn)原料殺鰻劑、滅螺劑重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基2.沉淀反應(yīng)：雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀

鹽酸肼屈嗪中游離肼的檢查:生成沉淀治療高血壓、心力衰竭。水楊醛腙3.生成氣體或者滴定法生成氣體:NH3滴定法:如硫酸亞鐵中的高鐵鹽檢查碘的顯色36

1.薄層色譜法(TLC)2.高效液相色譜法(HPLC)3.氣相色譜法(GC)色譜法是雜質(zhì)檢查的首選方法37

根據(jù)藥物與雜質(zhì)對吸附劑的吸附或?qū)φ归_劑的解析能力不同(Rf值的差異),加以分離和檢查。1.薄層色譜法(TLC)38我國藥典2005年版增加了TLC系統(tǒng)適用性試驗。1.檢測靈敏度：對照品溶液稀釋若干倍，應(yīng)顯示清晰的斑點。2.比移值：供試品主斑點與對照品溶液主斑點。3.分離效能39薄層色譜法應(yīng)用(1)雜質(zhì)對照法:取供試品溶液和一定濃度雜質(zhì)對照品溶液，分別點樣于同一薄層板上展開，進行斑點定位。將雜質(zhì)斑點進行對應(yīng)比較判斷。(2)供試品溶液自身稀釋法:將一定濃度供試品溶液進行稀釋并作為對照溶液，然后與供試品溶液在同一板上展開比較。(3)雜質(zhì)對照品與供試品溶液自身稀釋對照并用法。(4)對照藥物法:采用與供試品相同藥物作為對照，比較斑點、顏色。并進行對比控制。40

根據(jù)供試品與雜質(zhì)的對照品保留時間相同測定各雜質(zhì)峰面積.2.高效液相色譜法(HPLC)411.外標法（有對照品雜質(zhì)）2.加校正因子的主成分自身對照法3.不加校正因子的主成分自身對照法（無雜質(zhì)對照品）4.峰面積歸一化法（粗略測量雜質(zhì)的含量）423.氣相色譜法(GC)檢查方法:同高效液相色譜法.——用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查,如藥物中殘留溶劑、農(nóng)藥殘留量等.標準溶液加入法（P110）434.毛細管電泳法檢查方法:同高效液相色譜法.——用于酶類藥物中酶類雜質(zhì)的檢查。441.可見-紫外分光光度法

2.紅外分光光度法

3.原子吸收分光光度法45紫外分光光度法——利用藥物和待檢雜質(zhì)對光選擇吸收性質(zhì)的差異進行.46

例：腎上腺素中腎上腺酮的檢查

規(guī)定：A310nm≯0.0547紅外分光光度法

主要用于藥物中無效或低效晶型的檢查。某些多晶型藥物由于其晶型結(jié)構(gòu)不同，一些化學(xué)鍵的鍵長、鍵角等發(fā)生不同程度的變化，從而導(dǎo)致紅外吸收光譜中某些特征峰的頻率、峰形和強度出現(xiàn)顯著差異。48

在程序控制溫度的情況下,測定物質(zhì)的物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類儀器分析方法.1.1熱重分析法

1.2差示熱分析法

1.3差示掃描量熱法1.熱分析法1.熱重分析法(TGA)供試品TGA熱重曲線WW結(jié)晶水失重臺階應(yīng)用熱天平在程序控溫的條件下測量物質(zhì)的質(zhì)量隨溫度變化的熱分析技術(shù),可計算出樣品在相應(yīng)溫度范圍內(nèi)減失質(zhì)量的百分率。

特點分析樣品用量少,適用于貴重藥材或在空氣中容易氧化藥物干燥失重測定.靈敏度高,可達1

g以下

測定速度快可用于判斷結(jié)晶水或吸附水,并推斷結(jié)晶水含量。2.差熱分析法(DTA)在程序控制溫度下，測量供試品和惰性參比物(常用石英砂、煅制MgO)之間的溫度差與溫度(或時間)關(guān)系的熱分析技術(shù)T△T供試品發(fā)生吸熱反應(yīng)溫度低于參比物質(zhì)從而產(chǎn)生吸熱峰參比物質(zhì)供試品發(fā)生放熱反應(yīng)溫度高于參比物質(zhì)從而產(chǎn)生放熱峰DTA用途(1)熔點測定熔程T△T=0(2)

定性和純度檢定——根據(jù)峰的數(shù)目、形狀、位置對供試品進行純度判別T供試品對照品ΔG1ΔG2ΔG310008006004002000WT1T2T3398838635478134226T(℃)草酸鈣(CaC2O4·H2O)的熱重曲線在溫度T1時CaC2O4·H2OCaC2O4+H2O在溫度T2時CaC2O4CaCO3+CO在溫度T3時CaCO3CaO+CO2三個失重峰，相應(yīng)產(chǎn)生兩個吸熱峰和一個放熱峰。3.差示掃描量熱法(DSC)

測量保持供試品和惰性參比物的溫度相同,系統(tǒng)所需輸給供試品或參比物的能量差隨溫度(或時間)變化的熱分析技術(shù).···樣品參比加熱爐至信號放大器加熱器導(dǎo)線爐溫控制器用于待測物質(zhì)的鑒別、晶型鑒別、純度檢查以及熔點和水分等的測定，更適合于測量物質(zhì)在物理變化或化學(xué)變化中焓的變化。應(yīng)用熱分析法檢查藥物純度的條件樣品純度在98.0%以上雜質(zhì)不與主成分反應(yīng)雜質(zhì)不與主成分形成共晶或固熔體雜質(zhì)與熔融試樣有化學(xué)相似性藥物在熔融過程中化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定藥物如存在多晶現(xiàn)象則必須全部轉(zhuǎn)變成某一晶型58《藥品檢驗操作標準》規(guī)定1.遵循平行操作原則（1）儀器的配對性如納氏比色管應(yīng)配對，刻度線高低相差不超過2mm，砷鹽檢查時導(dǎo)氣管長度及孔的大小要一致（2）對照品與供試品的同步操作2.正確的取樣及供試品的稱量范圍≤1g不超過±2%，＞1g不超過±1%3.正確的比色、比濁方法4.檢查結(jié)果不符合規(guī)定或在限度邊緣時應(yīng)對供試管和對照管各復(fù)查二份第三節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法591.原理

利用氯化物在硝酸酸性條件下與硝酸銀反應(yīng),生成氯化銀白色渾濁液,與一定量標準氯化鈉溶液在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較,判定供試品中氯化物是否符合限量規(guī)定。一、氯化物檢查法供試品稀HNO310mlH2OAgNO31ml標準溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml

暗處放置5min(避免AgCl分解)條件：硝酸酸性條件（稀硝酸10ml）反應(yīng)試劑：硝酸銀試液1.0ml雜質(zhì)對照：NaCl(10

g/ml)靈敏度范圍：50-80

g/50ml可避免弱酸銀鹽，如碳酸銀、磷酸銀及氧化銀沉淀的干擾，且可加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁。討論：選擇稀硝酸反應(yīng)條件的意義。比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。平行操作原則。3.若供試品有色，需經(jīng)處理后方可檢查。

注意：干擾及排除

（1）外消色法（2）內(nèi)消色法：倍量法供試品有色處理方法供試品溶液如帶顏色，可按中國藥典附錄所規(guī)定的方法處理。即取兩份供試品溶液，于其中一份中先加入硝酸銀試液，搖勻，放置10min，如顯渾濁，可反復(fù)濾過，至濾液澄清，即得無氯化物雜質(zhì)又具有相同顏色的澄清溶液，再在其中加入規(guī)定量的標準氯化鈉溶液與水適量使成50ml，作為對照溶液；另一份中加入硝酸銀試液與水適量使成50ml，作為供試溶液，將兩液在暗處放置5min后比較，即可消除顏色的干擾。此法又稱為內(nèi)消色法。

外消色法：加入一定的有色物，如稀焦糖等，或經(jīng)處理降低色度，不干擾測定。如高錳酸鉀中氯化物的檢測，可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。65

碘化物、溴化物中氯化物的檢查66a溶于水的有機藥物——直接檢查.c溶于稀乙醇或丙酮的有機藥物

——用該溶劑溶解后依法檢查.例：三氯叔丁醇CCl3—C(CH3)2—OH

b不溶于水的有機藥物——d雜質(zhì)中鹵素原子連接于苯環(huán)上

——先進行有機破壞,使分解后再檢查.有機藥物中氯化物的檢查二、硫酸鹽檢查法2ml40mLd.HCl25%BaCl25mlH2O50mlH2O

樣品標準溶液濃度范圍

0.1mg~0.5mgSO42-/50ml硫酸鉀溶液0.1mg/ml681.反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進行，且以50mL供試溶液中含稀鹽酸2mL為宜。

(鹽酸酸性條件防止BaCO3，BaPO4沉淀生成，pH約=1)2.供試液和對照液稀釋后，再加氯化鋇溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀。3.比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。4.供試液帶色應(yīng)先處理。測定條件三、鐵鹽檢查法1.硫氰酸鐵法

(Ch.P

和USP采用)紅色原理：鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配離子,與一定量標準鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進行比較。供試品顯色，立即與同法制成的對照溶液比較加水溶解25ml稀HCl

4ml過硫酸銨50mg加水稀釋35ml30%硫氰酸銨溶液3ml加水定容既可氧化供試品Fe2+變成Fe3+,同時可防止由于光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。比色方法：同置于白色背景上，自上向下觀察。最佳比色濃度a.儀器分析線性范圍5~90

gFe3+/50mlb.目視比色濃度范圍10~50

gFe3+/50ml2.巰基醋酸法

(BP采用)紅色枸櫞酸的作用：使枸櫞酸與鐵離子形成配位離子，以免在氨堿性溶液中產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀。巰基醋酸：還原劑本法靈敏度較高，但試劑較貴74

重金屬是指在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用呈色的金屬，重金屬存在影響藥物的穩(wěn)定性及安全性.

鉛易在體內(nèi)積蓄中毒,以Pb為代表.

四、重金屬檢查法重金屬檢查法1.第一法

硫代乙酰胺法黃色至棕黑色混懸液

硫代乙酰胺在弱酸性(pH3.5醋酸鹽緩沖液)條件下水解,產(chǎn)生H2S,與微量重金屬離子(以Pb2+為代表)生成黃色到棕黑色的硫化物混懸液,與一定量標準鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較,不得更深。77操作方法樣品管對照管78①

標準鉛溶液濃度？②

硫代乙酰胺試液？③

溶液的pH？④

供試品溶液有顏色時的處理？⑤

干擾物的排除方法？討論：79①

標準鉛溶液濃度適宜目視比色的濃度范圍

Pb2+標準溶液10

g/ml

1~2ml80②

硫代乙酰胺試液H2S試液：惡臭和毒性；不穩(wěn)定；易被空氣氧化而析出硫；濃度難以控制.

改用硫代乙酰胺為顯色劑，硫代乙酰胺在實驗條件下水解產(chǎn)生H2S,與重金屬離子反應(yīng).81pH在3.0-3.5時,呈色較完全.酸度增大,呈色變淺甚至不呈色.

溶液的pH對于金屬離子與硫化氫呈色影響較大.③

溶液的pH82④

供試品溶液有顏色時的處理a.外消色法

b.內(nèi)消色法稀焦糖溶液調(diào)節(jié)指示劑調(diào)節(jié)

——與氯化物檢查時的處理方法類似83

⑤

干擾物的排除方法干擾：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,產(chǎn)生混濁影響檢查。a.供試品中微量高價Fe3+存在如：葡萄糖酸亞鐵中重金屬的檢查.排除：加入抗壞血酸或鹽酸羥胺使

Fe3+還原為Fe2+。84b.藥物本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽劑消除干擾——加掩蔽劑KCN,使銻、鋅形成穩(wěn)定的配合物后,用第三法檢查.如：葡萄酸銻鈉中重金屬的檢查1.原理

供試品先熾灼破壞后,使有機結(jié)合的重金屬游離,再按第一法檢查.2.第二法熾灼后的硫代乙酰胺法86

2.操作

緩緩熾灼放冷H2SO40.5-1.0ml供試品炭化

加熱

HNO3500-600℃H2SO4

除盡放冷完全灰化

蒸干HCl2ml水15ml

中性按第一法檢查蒸干氨試液a.HNO3處理后，必須蒸干除盡NO.b.熾灼溫度嚴格控制：500-600℃注意：做空白試驗3.第三法

硫化鈉法原理：在堿性介質(zhì)中,以Na2S為顯色劑,使Pb2+與S2-作用生成PbS的混懸液,與一定量標準鉛溶液經(jīng)同法處理所呈顏色比較,不得更深。88

適用于難溶于稀酸但能溶解于堿性溶液的藥物中重金屬的檢查。

如：磺胺類與巴比妥類藥物。注意：Na2S對玻璃有腐蝕性,久置產(chǎn)生絮狀物,應(yīng)臨用新配。4.第四法微孔濾膜法

當(dāng)重金屬含量低(2-5

g)時,在比色管中難于目視觀察,采用本法。原理：同第一法使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上(鉛斑)提高檢查的靈敏度。902.白田道夫法1.古蔡氏法

3.Ag-DDC法4.次磷酸法五、砷鹽檢查法(一)古蔡氏法(Gutzeit)

黃色棕色黑色溴化汞試紙1.原理進而促進AsH3