微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)市賽一等獎(jiǎng)

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用巴斯德法國，微生物學(xué)家失敗的原因：發(fā)酵物中混入了雜菌在實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)純凈的微生物，需要為培養(yǎng)物提供怎樣的條件呢？一、需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件配制培養(yǎng)基二、需要確保其他微生物無法混入進(jìn)行無菌操作微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單,個(gè)體多數(shù)十分微小通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)且體內(nèi)一般不含有葉綠素不能進(jìn)行光合作用原核生物一、基礎(chǔ)知識：真核生物細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通常用適當(dāng)染料染色后顯微鏡觀察常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)葡萄球菌大腸桿菌霍亂弧菌細(xì)菌放線菌結(jié)構(gòu)：原核細(xì)胞分支狀的菌絲（營養(yǎng)（基內(nèi)）菌絲、氣生菌絲）鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素應(yīng)用:真菌是一種真核生物，通常又分為三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）是動(dòng)物界中最低等的一類真核單細(xì)胞動(dòng)物，個(gè)體由單個(gè)細(xì)胞組成。原生動(dòng)物草履蟲變形蟲一、基礎(chǔ)知識：（一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定等。（2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。1培養(yǎng)基的類型和用途標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理狀態(tài)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離,鑒定,計(jì)數(shù)半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少菌種保存液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)成分合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn),降低成本用途，功能鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)成分菌種的選擇，分離選擇培養(yǎng)基應(yīng)用加入鏈霉素加入高濃度食鹽不加氮源含碳酸鈣的培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基抑制細(xì)菌，分離酵母菌、霉菌等真菌分離金黃色葡萄球菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物含碳酸鈣培養(yǎng)基開始全是白色。乳酸菌生成的乳酸與碳酸鈣反應(yīng)生成乳酸鈣，周圍形成透明圈。其他部位還是白色。觀察透明圈的大小，就可以知道產(chǎn)乳酸情況了，可篩選高產(chǎn)的乳酸菌菌株。

分離乳酸菌2特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3功能：1定義：菌落鑒定菌種的重要依據(jù)單個(gè)或少數(shù)菌體在固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體記號筆在皿底標(biāo)記2培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)1水2碳源3氮源4無機(jī)鹽還需滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。生長因子即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、堿基,如培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素霉菌:酸性細(xì)菌:中性或微堿性培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無氧的條件⑴基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源無機(jī)：有機(jī)：CO2、CO32-、HCO3-糖類，牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無機(jī)：有機(jī)：N2（固氮菌）、NH3（硝化細(xì)菌）、NH4＋、NO3-等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方牛肉膏蛋白胨NaCl將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。配方中的各成分為微生物提供了哪些營養(yǎng)？碳源、氮源、磷酸鹽和維生素碳源、氮源和維生素?zé)o機(jī)鹽H、O1獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵2應(yīng)該從哪些方面避免雜菌污染呢？二無菌技術(shù)對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸。超凈工作臺（１）消毒：2消毒與滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。（2）滅菌的定義：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物。不包括芽孢（惡劣環(huán)境下，細(xì)菌產(chǎn)生的抗逆性很強(qiáng)的休眠體）和孢子（脫離親本后能發(fā)育成新個(gè)體的生殖細(xì)胞）常用方法對象消毒煮沸消毒法：在100℃下煮沸5-6min一般物品巴氏消毒法：70-75℃煮30min或在80℃下煮15min一些不耐高溫的液體,如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如酒精擦拭雙手，氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30W紫外燈照射30min。照射前，適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果接種室、接種箱、超凈工作臺等3常用的消毒與滅菌的方法常用方法對象滅菌灼燒滅菌：酒精燈火焰的充分燃燒層接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具高壓蒸汽滅菌：壓力為100in培養(yǎng)基的滅菌2滅菌的方法：1無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。三、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計(jì)算－稱量－溶化－滅菌－倒平板滅菌前調(diào)PH1培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染?？諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。5如何檢驗(yàn)制備的培養(yǎng)基滅菌是否合格？如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1—2天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備成功；否則需要重新制備。（二）、純化大腸桿菌接種方法有：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法:1為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第一次灼燒每次劃線前灼燒劃線結(jié)束灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的微生物，使每次劃線的微生物來自上次劃線末端2在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。4不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基的原因？為了不影響對菌落形態(tài)的觀察和特征鑒別；一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的。3稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。一系列的梯度稀釋涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)聯(lián)系平板劃線法稀釋涂布平板法可以分離微生物，可以觀察菌落特征可以分離微生物，可以觀察菌落特征。可以計(jì)數(shù)較麻煩不能計(jì)數(shù)目的：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便純化平板劃線法稀釋涂布平板法平板劃線法為什么不能計(jì)數(shù)？平板劃線法取菌種時(shí)數(shù)量就是未知的,灼燒接種環(huán)的時(shí)候殺死菌類的數(shù)量也是未知的。1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。結(jié)果分析與評價(jià)2在培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。后的菌落大小不同,菌落分布位置相同原因是時(shí)間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；4在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了不同形態(tài)的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。菌種的保藏1、臨時(shí)保藏法對象：溫度：缺點(diǎn)：2、甘油管藏法：對象：溫度：頻繁使用的菌種4℃（冰箱）容易被污染或產(chǎn)生變異長期保存的菌種-20℃（冷凍箱）課題延伸日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？微生物生長需要水、空氣、適宜的溫度。食品保存可以通過干燥、真空、冷藏等方法來阻止微生物生長。2．相同點(diǎn)：三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng)。不同點(diǎn)：無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件，而其他兩種技術(shù)都要求嚴(yán)格的無菌條件。3．巴斯德設(shè)計(jì)了一個(gè)鵝頸瓶，現(xiàn)稱巴斯德燒瓶。燒瓶有一個(gè)彎曲的長管與外界空氣相通。瓶內(nèi)的溶液加熱至沸點(diǎn)，冷卻后，空氣可以重新進(jìn)入，但因?yàn)橛邢蛳聫澢拈L管，空氣中的塵埃和微生物不能與溶液接觸，使溶液保持無菌狀態(tài)，溶液可以較長時(shí)間不腐敗。如果瓶頸破裂，溶液就會很快腐敗變質(zhì)，并有大量的微生物出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)得到了令人信服的結(jié)論：腐敗物質(zhì)中的微生物是來自空氣中的微生物，這個(gè)實(shí)驗(yàn)也導(dǎo)致了巴斯德創(chuàng)造了一種有效的滅菌方法——巴氏滅菌法。巴氏滅菌法又稱低溫滅菌法，先將要求滅菌的物質(zhì)加熱到70-75℃煮30min鐘或80℃煮15min，這樣既不破壞營養(yǎng)成分，又能殺死細(xì)菌，巴斯德發(fā)明的這種方法解決了酒質(zhì)變酸的問題，拯救了法國釀酒業(yè)?，F(xiàn)代的食品工業(yè)多采取間歇低溫滅菌法進(jìn)行滅菌。微生物的培養(yǎng)基礎(chǔ)知識實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果分析與評價(jià)培養(yǎng)基定義：分類：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基無菌技術(shù)培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法定義：消毒與滅菌常用消毒滅菌方法制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌課堂小結(jié)95%酒精靠近細(xì)菌時(shí)，瞬間就會把細(xì)菌蛋白質(zhì)凝固破壞，在細(xì)菌周圍形成一層由凝固蛋白質(zhì)組成的保護(hù)膜，使酒精分子不能進(jìn)入細(xì)菌，達(dá)不到殺死細(xì)菌的作用。75%酒精由于酒精濃度減少，當(dāng)酒精分子靠近細(xì)菌時(shí)不能瞬間使細(xì)菌蛋白質(zhì)凝固，從而形不成保護(hù)膜，酒精分子可以進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部從而起到殺菌作用。霉菌的菌落特征因種而異菌落液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：是否運(yùn)動(dòng)無動(dòng)力有動(dòng)力彌散固體培養(yǎng)基：菌落