多肽的制備及其活性研究進(jìn)展

多肽的制備及其活性研究進(jìn)展多肽的制備及其活性研究進(jìn)展多肽的制備及其活性研究進(jìn)展.合用文檔.多肽的制備及其功能活性的研究進(jìn)展大綱：科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)生物體內(nèi)存在多種擁有生理活性的多肽物質(zhì)，它們擁有不同樣的結(jié)構(gòu)和功能活性。人體攝入的蛋白質(zhì)經(jīng)酶水解后，主要以肽的形式被消化吸取。幾乎所有細(xì)胞都受多肽調(diào)治，它擁有調(diào)治機(jī)體生理功能和為機(jī)體供應(yīng)營養(yǎng)的雙重見效。人們已從包括人、植物、動(dòng)物在內(nèi)的各種生物體中分別出各種活性多肽，而且對(duì)多肽的性質(zhì)、制備方法、分別純化方法、判斷技術(shù)、功能活性及應(yīng)用等方面進(jìn)行了大量的研究，并獲取了必然的見效。本文介紹了活性多肽的制備方法及其活性研究現(xiàn)狀，對(duì)多肽的多種功能活性進(jìn)行了介紹，歸納了不同樣本源多肽的制備方法和其功能活性研究進(jìn)展。要點(diǎn)詞：多肽；功能活性；分別純化前言近來幾年來，多肽在生物體內(nèi)的生理功能碰到越來越多的重視。大量研究結(jié)果說明，蛋白質(zhì)由于其分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，攝人人體后不易被消化吸取，進(jìn)而影響了其生理功能和營養(yǎng)價(jià)值的有效發(fā)揮。多肽是比蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)簡單，分子量小，由2～16個(gè)氨基酸經(jīng)過肽鍵連接的一類化合物，按氨基酸組成數(shù)目可人為分為短肽(2～5個(gè)氨基酸)，多肽(6～16個(gè)氨基酸)。多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)?？茖W(xué)發(fā)現(xiàn)，幾乎所有細(xì)胞都受多肽調(diào)治，如：細(xì)胞分化、神經(jīng)激素遞質(zhì)調(diào)治、免疫調(diào)治等均與活性多肽親近相關(guān)，它擁有調(diào)治機(jī)體生理功能和為機(jī)體供應(yīng)營養(yǎng)的雙重見效。由于多肽擁有調(diào)治植物神經(jīng)系統(tǒng)、活化細(xì)胞免疫機(jī)能、改進(jìn)心血管功能和抗衰老等生理活性，這為..合用文檔.開發(fā)肽藥物、肽類保健食品供應(yīng)了理論依據(jù)?？梢?，進(jìn)行多肽的研究和開發(fā)有著十分重要的研究意義和應(yīng)用遠(yuǎn)景【1】。一，多肽的制備方法目前，國內(nèi)外制備多肽的方法主要有：蛋白酶水解法、化學(xué)合成法、基因重組法、分別提取法等。酶法生產(chǎn)功能性多肽應(yīng)用較為寬泛。龔吉軍等人[3]利用茶籽蛋白酶酶解制備菜籽多肽，確定了最正確條件，此條件下氨基酸態(tài)氮生成率可達(dá)34．64％，制備的茶籽多肽對(duì)超氧自由基和羥基自由基擁有強(qiáng)烈的去除作用；李書國等人[4]研究了酶法生產(chǎn)大豆多肽的加工工藝，分別獲取貞潔的酸性水解物溶液，水解率高達(dá)95％；班玉鳳等人[5]研究了Alcalase水解大豆蛋白制備大豆蛋白寡肽的方法，確定了酶解的最正確條件，其水解液的水解度到達(dá)了24．1％；劉大川等[6]也利用堿性蛋白酶對(duì)富硒菜籽分別蛋白酶解制備蛋白肽，水解度達(dá)32．51％，制得的富硒菜籽蛋白肽分子量分布較好，幾乎完好部是小分子多肽，分子量均在1500D以下。以下是幾種方法優(yōu)缺點(diǎn)的歸納。1，化學(xué)水解：酸解，堿解，酸解法水解度不易控制，簡單使氨基酸碰到破壞；堿解法能使L-氨基酸形成D-氨基酸，可能存在營養(yǎng)和毒理方面有害的效應(yīng)，對(duì)于食品多肽的生產(chǎn)缺乏取。所以這兩種方法都很少被使用破壞L型氨基酸，2，酶法水解：能在必然條件下進(jìn)行定位水解產(chǎn)生特定的肽，且易于控制水解進(jìn)度，而且擁有高度的專一性，一般不會(huì)致使?fàn)I養(yǎng)方面的損失，也不會(huì)產(chǎn)生毒理學(xué)上的問題，同時(shí)酶作用擁有特異性，可在平易..合用文檔.條件下進(jìn)行，所以能較好的滿足肽的生產(chǎn)需要。3，發(fā)酵法：直接利用微生物發(fā)酵過程中產(chǎn)生的蛋白酶降解蛋白，可到達(dá)較高的水解率，該技術(shù)的要求相對(duì)較高，對(duì)菌種的依賴性較大，，實(shí)質(zhì)也是酶解。目前采用很多的是酶法。酶法因其水解條件平易，水解度易控制，無環(huán)境污染的特點(diǎn)，備受尊敬。而酶解法中雙酶或多酶共同水解的方式又多被采用。由于這種方式生產(chǎn)下的水解液水解度大、苦味低、多肽種類多?，F(xiàn)在蛋白質(zhì)的水解一般都用酶法水解，在多肽的生產(chǎn)中酶的選擇是要點(diǎn)，它不但影響最后產(chǎn)品的得率，反響速度，而且直接影響產(chǎn)品的風(fēng)味和理化特點(diǎn)，現(xiàn)有的酶解工藝多采用單酶水解，易產(chǎn)生苦，澀等不良風(fēng)味影響了食用的要求，所以平時(shí)采用復(fù)合酶水解，例如：內(nèi)肽酶和端肽酶，alcalase與flavourzyme得組合酶等。在蛋白質(zhì)的酶解過程中水解度的控制是十分重要的參數(shù)由于過分的水解會(huì)產(chǎn)生苦味肽，影響水解蛋白在食品中的應(yīng)用【7】。多肽制備的一般步驟：原料-前辦理-提蛋白-無聊-蛋白粉-酶解滅酶-離心分別-多肽液-無聊-多肽粉。二，多肽含量的測定雙縮脲法雙縮脲反響：在強(qiáng)堿性溶液中雙縮脲與硫酸銅反響可生成紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，在540納米處測吸光值。凡擁有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵都可發(fā)生雙縮脲反響2.OPA法〔鄰苯二甲醛法〕；使用于乳源性的多肽測定，反響試劑：..合用文檔.含有25ml100mM的硼砂2．5m120(w／w)SDS、40ragOPA(鄰苯二甲醛溶于lml甲醇、1o0lp一巰基乙醇用去離子水定容至50ml，用不同樣濃度的胰蛋白酶水解的酪蛋胨(多肽)來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，50／11樣品溶液與2ml試劑室溫下反響2rain，在340nm下比色，查標(biāo)準(zhǔn)曲線即能夠獲取多肽的含量。紫外吸取法；蛋白質(zhì)溶液在238nm處的光吸取的強(qiáng)弱，與肽鍵的多少成正比，所以此法合用于多肽的含量測定。所以能夠用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液配制一系列5O～500fg／ml濃度的5．0ml蛋白質(zhì)溶液，測定238nm的光吸取值A(chǔ)238，以A238為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知樣品的濃度即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得。多種有機(jī)物，如醇、酮、醛、醚、有機(jī)酸、酰胺類和過氧化物等都有攪亂作用。所以最好用無機(jī)鹽，無機(jī)堿和水溶液進(jìn)行測定。假設(shè)含有有機(jī)溶劑，可先將樣品蒸干，或用其他方法除掉攪亂物質(zhì)，爾后用水、稀酸和稀堿溶解后再作測定【8】。三多肽的分別純化隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的睜開，用于蛋白質(zhì)及多肽分別純化的方法日益先進(jìn)。常用的提取分別法包括：化學(xué)萃取法(如：醇法、丙酮法)、陰陽離子交換吸附柱、Sephadex凝膠過濾柱、凝膠電泳、高效液相色譜(HPLC)、高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)等方法。Chen等人[9]利用水醇提取法，結(jié)合離子交換、凝膠過濾和RP—HPLC從人參中分別到六種含僅氨基酸的小肽。郝林琳等人[10]采用醋酸溶液和乙醇提取了6支鮮二杠馬鹿茸的骨干頂部、中部、根部3個(gè)部位的多肽。金聲等人[11]將..合用文檔.罌粟的花粉水提取液經(jīng)H+型陽離子交換柱，Sephadex凝膠過濾柱和HPLC系統(tǒng)提取分別獲取了四種多肽。四多肽的活性研究易消化吸取作用過去人們認(rèn)為，人體主若是以氨基酸的形式吸取蛋白質(zhì)，但現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)人體攝入的蛋白質(zhì)經(jīng)消化道中的酶水解后，主要以寡肽的形式被消化吸取，以游離氨基酸形式吸取的比率很小，所以，多肽比完好游離氨基酸更易更快地被機(jī)體吸取利用，且蛋白質(zhì)以多肽的形式被吸取，也有利于最大限度地利用其生物活性功能。特別對(duì)于消化功能受損的人群，他們的食品蛋白質(zhì)的吸取碰到嚴(yán)重限制和影響，蛋白質(zhì)、氨基酸循環(huán)被破壞，體內(nèi)不能夠合成多肽，假設(shè)直接服用多肽即可補(bǔ)充蛋白質(zhì)，又能夠保持正常的代謝平衡。降血壓作用AcEI控制肽能控制血管緊張素轉(zhuǎn)變酶(ACE)的活性，而血管中的AcE能使血管緊張素Ⅱ生成，進(jìn)而引起末梢血管縮短致使血壓高升?？梢夾cEI控制肽能夠間接阻攔血管緊張素Ⅱ的生成，進(jìn)而起到降低人體血壓的作用，是預(yù)防和治療高血壓的有效多肽類物質(zhì)。江南大學(xué)劉萍等人利用酶法水解玉米蛋白粉生產(chǎn)降血壓肽，結(jié)果說明堿性蛋白酶水解玉米蛋白獲取的水解液在水解度為15.96%時(shí)水解液的ACE控制率最高，IC50值為0.125mg\ml【12】。張焱等人利用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和堿性蛋白酶分別水解大豆蛋白，制備具有ACE控制活性的大豆多肽，結(jié)果說明堿性蛋白酶是最正確的水解酶，..合用文檔.當(dāng)酶與底物比為2.0，反響時(shí)間為80分鐘，溫度為55℃時(shí)可制備出高ACE控制活性的大豆多肽【13】。降血脂和降膽固醇作用人們?cè)缭?0世紀(jì)初就觀察到植物蛋白的水解產(chǎn)物蛋白肽擁有比植物蛋白自己更有效的降血脂、降膽圄醇的作用。有研究解析，多肽能刺激甲狀腺激素分泌增加，促進(jìn)了膽固醇的膽汁酸化，使糞便排泄膽固醇增加，進(jìn)而起到降低血液膽固醇的作用。好多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)說明：大豆多肽中，分子相對(duì)質(zhì)量大于5000D的局部擁有明顯降低膽固醇的作用；而且只對(duì)膽固醇值高的人有降低膽固醇的作用，對(duì)正常人沒影響心?？挂鹱饔每咕挠址Q為微生物肽或肽抗生素，是指存在于生物體內(nèi)擁有抵抗外界微生物傷害，除掉體內(nèi)突變細(xì)胞的一類由生物細(xì)胞特定基因編碼產(chǎn)生的小分子多肽?？咕氖莿?dòng)物機(jī)體擁有天然免疫力的重要原因，對(duì)動(dòng)物的非獲取性免疫擁有特別意義。它們的堿性基團(tuán)和微生物的細(xì)胞膜有著很強(qiáng)的親和性，可經(jīng)過增加細(xì)胞膜的通透性殺死微生物。西南大學(xué)食品學(xué)院霍健聰?shù)热耍阂詭~下腳料為原料，制備多肽亞鐵螯合物，并研究亞鐵鰲合物的抑茵活性[14]。利用風(fēng)味酶和動(dòng)物復(fù)合蛋白酶雙酶法制備水解液，采用氯化亞鐵螯合。以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等為測試菌株，，采用牛津杯雙層平板法確定亞鐵螯合物的抑茵中濃度及商議pH和溫度對(duì)亞鐵螯合物抑菌活性的影響。結(jié)果說明：(1)最正確酶解條件為帶魚下腳料蛋白用量4．1g／100mL，溫..合用文檔.度4O℃，復(fù)合比l：1，酶量6×10IU／100mL，pH7；(2)帶魚下腳料蛋白最正確螯合條件為：pH7，時(shí)間15min，溫度20℃，抗壞血酸用量0．1％；(3)抑菌活性試驗(yàn)結(jié)果說明：亞鐵螯舍物對(duì)所采用的測試菌株除一般變形桿菌外都有必然抑菌作用，其中對(duì)巨大芽胞桿菌抑茵見效最好；在酸性條件下抑茵活性依舊較高，但在堿性環(huán)境中抑菌活性明顯降低；在較低溫度下保持抑茵活性，但高溫辦理后抑菌活性明顯降低。亞鐵螯合物對(duì)各測試菌株除一般變形桿菌之外均有較強(qiáng)的抑菌活性，是一種對(duì)細(xì)菌較為廣譜的抑菌劑?？寡趸饔每寡趸远嚯氖巧锘钚噪牡囊环N?？寡趸瘷C(jī)理包括經(jīng)過給抗氧化酶供應(yīng)氫、緩沖生理pH、螯合金屬離子和捕捉自由基等路子起到抗氧化作用?？茖W(xué)研究說明自由基可引起蛋白質(zhì)傷害、脂質(zhì)過氧化、核酸傷害等，進(jìn)而引起各種疾病。而抗氧化多肽擁有去除自由基、防范脂質(zhì)過氧化等作用，將其增加到功能保健食品中，擁有預(yù)防多種疾病的作用?？寡趸远嚯倪€能夠作為天然抗氧化劑防范油脂氧化，緩衰老的作用。河南工業(yè)大學(xué)史軍，王金水等人[15]利用花生蛋白經(jīng)過堿性蛋白酶ALCALASE、復(fù)合蛋白酶PROTAMEX水解獲取活性肽溶液．經(jīng)過單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)獲取各個(gè)因素的優(yōu)化組合，并進(jìn)一步研究活性肽的抗氧化特點(diǎn)．結(jié)果說明，ALCALAsE對(duì)花生蛋白的水解能力優(yōu)于PROTAMEX；花生肽擁有較強(qiáng)的抗氧化性及有效去除羥自由基的能力。促進(jìn)礦物質(zhì)吸??；某些蛋白肽可經(jīng)過與人體必需的礦物離子形成螯合物，使鈣、..合用文檔.鐵等離子保持在可溶狀態(tài)，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體對(duì)礦物質(zhì)的吸取。如將從牛乳中提取的酪蛋白磷酸肽CPP，也稱為促鈣吸取肽，增加到少兒和婦女及老年食品中，那么可促進(jìn)鈣的吸取。近一個(gè)世紀(jì)的研究說明，肽是由20個(gè)天然氨基酸以不同樣的組成和排列方式組成的二肽到復(fù)雜的線性和環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同樣肽類總稱，是源于蛋白質(zhì)的多功能化合物?；钚噪膶挿捍嬖谟谧匀唤缰?，生物體好多活性物質(zhì)都以肽的形式存在，沒有肽，就沒有活性，沒有生命[16]?？茖W(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)了擁有免疫調(diào)治、激素調(diào)治、酶調(diào)治、抗病毒、降血壓和降血脂等功能性肽[17-18]。由于功能性肽的特別功能，使得人們對(duì)它的需求增加，現(xiàn)在已提取出的多種功能性肽多用于醫(yī)用和保健，如功能性大豆蛋白肽已經(jīng)用于降血脂。陪同著需求，人們對(duì)肽的結(jié)構(gòu)和功能研究也逐漸深入。..合用文檔.參照文件勵(lì)建榮，封平．功能肽的研究進(jìn)展．食品科學(xué)，2004，25：415—419孔令明,等.多肽的功能活性與研究進(jìn)展[J].中國食品增加劑,2021,03，71-73.龔吉軍。李忠海，鐘海雁，等．茶籽多肽的制備及抗氧化活性研究．食品研究與開發(fā)，200r7，28(10)：59—6l李書國，陳輝，杜進(jìn)民，等．大豆多肽的功能特點(diǎn)及加工工藝．糧油食品科技，2000，8(1)：14一15班玉鳳，朱海峰，孫明珠．Alc出∞水解大豆蛋白制備大豆蛋白寡肽的研究．現(xiàn)代食品科技。20cr7，23(11)：5l一53[6】劉大川，周俊梅，張寒俊．富硒菜籽蛋白肽的制備工藝研究．中國糧油學(xué)報(bào)，2006，21(3)：245—249李志忠，袁惠君，張丙云。等．大豆多肽的功能與開發(fā)研究．甘肅科技，2006，22(4)：179—181劉揚(yáng)，等.多肽含量的測定方法的比較[J].內(nèi)蒙古石油化工，2021，〔5〕:65.[9]chenZk,fancx,Isolationandcharacterrisationofagroupofoligerpeptidesrelatedtooxidizedblutathionefroomtherootpanaxginseng.JpeptideRes,1998，52：137—142[10】郝林琳，劉松財(cái)，張明軍，等．鮮馬鹿茸不同樣部位多肽的提取及含量比較．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，200r7，29(4)：378..合用文檔.—380金聲，許家喜．罌粟花粉中水溶性肽的分別純化、序列測定和合成研究．化學(xué)學(xué)報(bào)，1995，53：822—827劉萍，等.酶解玉米降血壓肽的研究[J].食品工業(yè)科技,2006,2705〕117-119.張焱，等.堿性蛋白酶水解大豆多肽及控制ACE見效的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35(20)：6004—6006.霍健聰，等.多肽亞鐵螯合物制備及抑菌活性研究[J].提取與活性，2021,25,(1):86-89史軍，等.花生蛋白酶解條件及活性肽抗氧化特點(diǎn)研究[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006，27〔6〕：38-39.徐秀璋．蛋白質(zhì)序次分技術(shù)[M]．北京：科學(xué)技術(shù)初版社，1984．李越希，黃培