黃精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

黃精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

黃精是百合科黃精屬植物的云南黃精。它有幾種花黃精。干燥的根系被稱為“大黃精”、“雞頭黃精”和“姜黃精”。黃精能夠補(bǔ)氣養(yǎng)陰,健脾,潤肺,益腎,用于脾胃虛弱,體倦乏力,口干食少,肺虛燥咳等癥。黃精主要含有多糖和皂苷類化合物,其中的皂苷類化合物可能是其降血糖、降血脂、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤和改善學(xué)習(xí)記憶等作用的活性成分。黃精的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中,僅以葡萄糖的含量作為控制黃精藥材質(zhì)量的指標(biāo),專屬性、實(shí)用性差,不能準(zhǔn)確可靠的控制藥材黃精的質(zhì)量。為此,本實(shí)驗(yàn)首次以薯蕷皂苷元和菝葜皂苷元為指標(biāo)建立黃精的薄層鑒別方法,并采用HPLC法測定黃精酸水解前后薯蕷皂苷元的含量。結(jié)果表明,該方法簡便、快捷,可靠,為黃精質(zhì)量控制提供依據(jù),也為下版藥典的增訂提供參考。1-皂苷元試劑十萬分之一電子分析天平(AUW220,SHIMADZU);高效液相色譜儀(LC-10Avp泵,SPD-10Avp紫外檢測器,CTO-10ASvp柱溫箱,SHIMADZU);KQ5200型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司);硅膠GF254(青島海洋化工有限公司);乙腈(色譜純);水為純凈水;其他試劑均為分析純;薯蕷皂苷元對(duì)照品(江蘇中醫(yī)藥研究院提供,HPLC測定純度達(dá)98%以上);菝葜皂苷元(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):110744-200407);黃精對(duì)照藥材(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):121341-200402);4批黃精藥材樣品除南京為產(chǎn)地采集之外,其余均購自各地藥材公司,經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)都述虎教授鑒定為正品。2方法和結(jié)果2.1薄層鑒別法取薯蕷皂苷元、菝葜皂苷對(duì)照品適量,用甲醇溶解配成每1ml含0.5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn),吸取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液及上述對(duì)照品溶液各10μl分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,以苯-丙酮(83∶10)為展開劑,展開,取出,晾干,噴10%磷鉬酸乙醇溶液。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。2.2hplc測量2.2.1流動(dòng)相及靈敏度色譜柱:Shim-PackVP-ODSC18(150mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(94∶6);檢測波長:203nm;靈敏度:0.04AUFS;流速:1ml/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20μl。2.2.2對(duì)照溶液的制備精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品10.13mg,置25ml的量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。2.2.3供試品溶液及方法取60℃干燥至恒重的黃精藥材粉末約2g,精密稱定,置茄形燒瓶內(nèi),精密加入乙醇50ml,搖勻,稱重,加熱回流4h,放冷,再稱定重量,用乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過。精密取續(xù)濾液20ml,蒸干,殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至1ml容量瓶中,定容至刻度,搖勻,進(jìn)樣前用0.45μm的微孔濾膜過濾,作為供試品溶液(1)。另同法取20ml續(xù)濾液,蒸干乙醇,殘?jiān)?0ml、3mol/L的鹽酸溶液溶解,沸水回流水解4h,冷卻,移至分液漏斗中,加氯仿40ml(20ml、10ml、10ml)萃取3次,合并氯仿液,用水洗滌2次,每次20ml,減壓回收氯仿至干,殘?jiān)蛹状际谷芙?移至1ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。進(jìn)樣前用0.45μm的微孔濾膜過濾,作為供試品溶液(2)。2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對(duì)照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0ml,分別置于10ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻,分別吸取不同濃度對(duì)照品溶液20μl,進(jìn)行分析測定。以對(duì)照品峰面積值為縱坐標(biāo),對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。薯蕷皂苷元回歸方程和相關(guān)系數(shù)為:Y=2548X-7635,r=0.9999,薯蕷皂苷元在0.81-8.10μg范圍內(nèi),其絕對(duì)進(jìn)樣量X(μg)與峰面積Y之間呈良好的線性關(guān)系。2.2.5儀器精密度試驗(yàn)精密吸取薯蕷皂苷對(duì)照品溶液,按上述色譜條件,重復(fù)進(jìn)樣六次,每次20μl,測定薯蕷皂苷元峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.96%,表明儀器精密度良好。2.2.6進(jìn)樣穩(wěn)定性測定取同一供試品溶液(1)和(2),分別于0、2、4、8、12h進(jìn)樣測定,其峰面積RSD為1.45%和0.69%,表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.7黃精藥材水解前后薯皂苷元含量測定取同一產(chǎn)地(安徽)樣品六份,按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液(1)和(2),并按上述色譜條件測定,測得黃精藥材水解前后薯蕷皂苷元含量分別為0.01%和0.04%,RSD為2.15%和1.92%。2.2.8供試品溶液制備取已知含量的藥材粉末1g(水解前后薯蕷皂苷元含量分別為0.01%和0.04%),精密加入對(duì)照品溶液適量,按“2.2.3”項(xiàng)下的方法操作,制備供試品溶液(1)和(2),并進(jìn)樣測定。結(jié)果水解前后的黃精樣品回收率分別為98.16%(RSD為2.61%)和100.38%(RSD為2.07%)。2.2.9峰面積及峰面積測定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣,記錄各色譜峰的峰面積,每個(gè)樣品重復(fù)2次,峰面積取平均值,按外標(biāo)法計(jì)算含量。含量測定結(jié)果見表1。3討論3.1提取方法的比較在參考有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)樣品的提取方法進(jìn)行了考察。比較了先用鹽酸水解、后用氯仿提取法和先用乙醇提取,后用鹽酸水解法以及兩相溶劑的直接水解提取法,結(jié)果表明先用乙醇提取,再用鹽酸水解,最后用氯仿萃取的方法最優(yōu)。3.2樣品提取溶劑的選擇取同一產(chǎn)地樣品分別精密加入50ml無水乙醇、甲醇、50%甲醇,以及分別加熱回流2、4、6h,比較不同溶劑、不同時(shí)間的提取效果。結(jié)果乙醇可較好去除干擾雜質(zhì),且提取完全,易回收。故選擇乙醇作為樣品提取溶液。樣品提取4h含量最大,說明提取時(shí)間增加,可能造成薯蕷皂苷脫水等副反應(yīng)的增加,最終確定提取時(shí)間為4h。3.3鹽酸加熱水解對(duì)馬鈴薯皂苷元結(jié)構(gòu)的影響參考文獻(xiàn),分別用2mol/L、3mol/L、4mol/L鹽酸水解2、4、6h,結(jié)果3mol/L鹽酸加熱水解4h效果最好,酸度過大和時(shí)間過長均能破壞薯蕷皂苷元結(jié)構(gòu)。萃取條件的考察中分別用氯仿、石油醚、醋酸乙酯直接萃取,以及氯仿回流萃取,結(jié)果表明以氯仿30ml直接萃取3次的效果最優(yōu)。3.4馬鈴薯皂苷元用量測定對(duì)南京、大連、河南等5個(gè)產(chǎn)地或商品的黃精藥材進(jìn)行了分析,結(jié)果表明,黃精藥材酸