微量注射氯沙坦對(duì)慢性心衰大鼠下丘腦室旁核腎側(cè)及心率、血壓和腎

微量注射氯沙坦對(duì)慢性心衰大鼠下丘腦室旁核腎側(cè)及心率、血壓和腎？

越來(lái)越多的研究表明，交感神經(jīng)系統(tǒng)過(guò)度激活可以導(dǎo)致許多心血管疾病，包括慢性心力衰竭。臨床上慢性心衰的主要特征包括慢性水鈉潴留和血漿血管緊張素Ⅱ(AngII)增高,同時(shí)伴有交感神經(jīng)系統(tǒng)的過(guò)度激活。阻斷血管緊張素Ⅱ的合成或阻滯血管緊張素Ⅱ的AT1受體可導(dǎo)致慢性心衰的交感神經(jīng)興奮性顯著降低,血漿去甲腎上腺素和腎上腺素濃度下降。室旁核(paraventricularnucleus,PVN)是調(diào)節(jié)自主神經(jīng)系統(tǒng)的重要中樞,本研究制作大鼠慢性心衰模型,利用AT1受體阻滯劑氯沙坦作用于下丘腦室旁核,記錄心率、血壓和腎交感神經(jīng)的變化,探討慢性心衰的中樞調(diào)控機(jī)制。1材料和方法1.1動(dòng)物飼養(yǎng)及分組選用8～12周齡,體重(200±20)g健康雄性SD大鼠[南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(蘇)2003-0002]。動(dòng)物喂以顆粒型大鼠飼料,自由飲水,動(dòng)物房溫度維持在18～26℃,光暗周期12:12h(7:00-19:00),實(shí)驗(yàn)前在上述條件下喂養(yǎng)3d。SD大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組、假手術(shù)組,每組5只。8周后采用stoelting大鼠腦立體定位儀進(jìn)行定位,POWERLAB/8SP(Adinstrument公司)系統(tǒng)采集、分析心率、血壓和腎交感神經(jīng)放電信號(hào)。1.2試劑氯沙坦購(gòu)自Sigma公司,將用生理鹽水溶解、配制為20nmol/μL溶液,-20℃凍存?zhèn)溆谩?.3左心肌梗死前降支手術(shù)組10%水合氯醛腹腔麻醉,行開(kāi)胸術(shù),打開(kāi)心包,結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支。假手術(shù)組同樣開(kāi)胸打開(kāi)心包,但僅在相同部位穿線并不結(jié)扎,術(shù)后肌肉注射20萬(wàn)U青霉素鈉預(yù)防感染,喂養(yǎng)8周后,射血分?jǐn)?shù)(EF)<45%為造模成功。1.4動(dòng)脈血壓監(jiān)測(cè)2%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔麻醉后,將大鼠仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上,氣管插管,分離頸外靜脈并插管,用于補(bǔ)液及追加麻醉藥;分離左側(cè)股動(dòng)脈并插管,導(dǎo)管接壓力換能器,與橋式放大器相連,POWERLAB/8SP系統(tǒng)采集信號(hào),持續(xù)監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓、平均動(dòng)脈壓和心率;然后動(dòng)物取俯臥位,利用門齒鉤、雙側(cè)耳棒將大鼠頭部固定于腦立體定向儀上,接著動(dòng)物取右側(cè)臥位,經(jīng)腰部縱行切口沿腹膜后路徑暴露左側(cè)腎臟、腎動(dòng)脈和腎神經(jīng),分離腎交感神經(jīng),浸入溫石蠟油中,安放銀絲電極,接生物電放大器,POWERLAB/8SP系統(tǒng)采集信號(hào),記錄腎交感神經(jīng)活動(dòng)(RSNA)。1.5心臟超聲指標(biāo)手術(shù)組和假手術(shù)組8周后進(jìn)行超聲心動(dòng)圖測(cè)量,在左心長(zhǎng)軸切面上測(cè)量并記錄大鼠心臟的左室內(nèi)徑(LV)、室間隔厚度(IVS)、左室后壁厚度(LVPW)、EF和左室內(nèi)徑縮短率(FS)。1.6pvn定位及開(kāi)顱體定位大鼠固定在腦立體定位儀上,沿正中矢狀線切開(kāi)頭皮,暴露顱骨,調(diào)整前囟和后囟至同一水平。PVN定位:前囟后1.8mm,中線旁開(kāi)0.4mm,深度7.9mm(Paxinos&Watson大鼠立體定位圖譜);電鉆鉆開(kāi)顱骨,微量加樣器插入到PVN內(nèi)。動(dòng)物狀態(tài)穩(wěn)定30min后,雙側(cè)PVN注射50nL氯沙坦。1.7kcl大鼠srna噪聲測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,微量注射部位注入5%的膀胺天藍(lán)50nL,10%KCl靜脈注射處死大鼠,記錄RSNA的噪聲值。取出腦組織,4%多聚甲醛固定,24h后用振動(dòng)切片機(jī)切片,厚100μm,切6片。根據(jù)圖譜在顯微鏡下微量注射點(diǎn)位置,定位不準(zhǔn)確者不列入統(tǒng)計(jì)。1.8統(tǒng)計(jì)處理spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)用(ˉx±s)表示,根據(jù)資料選擇配對(duì)或成組t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1兩組大鼠的行為指標(biāo)的比較超聲心動(dòng)圖顯示手術(shù)組較假手術(shù)組LV增加(P<0.01),EF和FS降低(P<0.01,P<0.05,表1)。2.2血壓和心率PVN注射氯沙坦后,手術(shù)組和假手術(shù)組的血壓和RSNA有降低,手術(shù)組較假手術(shù)組降低更為明顯(P<0.05),血壓和心率兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖1,表2)。3對(duì)慢性心力衰竭患者的情感興震性的作用本研究已經(jīng)顯示在慢性心衰大鼠中,AT1受體抑制劑氯沙坦作用于PVN,導(dǎo)致交感神經(jīng)活性降低,提示PVN調(diào)節(jié)交感神經(jīng)活性的神經(jīng)元在慢性心衰中起重要作用。在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎的方法制作慢性心衰模型,此方法是一種成熟的實(shí)驗(yàn)方法,已被廣泛應(yīng)用。超聲心動(dòng)圖顯示手術(shù)組較假手術(shù)組的EF和左室縮短率降低,LV增加,提示手術(shù)組心功能降低,造模成功。交感神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)過(guò)度增強(qiáng)是心衰的特征,在心衰的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。交感神經(jīng)系統(tǒng)的激活,在心力衰竭早期時(shí)有一定程度的代償作用,但長(zhǎng)期持續(xù)激活則加重心臟的負(fù)擔(dān),使病情進(jìn)一步惡化,形成惡性循環(huán),心衰時(shí)交感神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)過(guò)度增強(qiáng)是加速病情惡化并使存活期縮短的關(guān)鍵因素。已有證據(jù)表明慢性心衰發(fā)展過(guò)程中交感神經(jīng)興奮性的增高與血管緊張素Ⅱ作用于交感神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)。氯沙坦是血管緊張素II受體(AT1型)拮抗劑,可以阻斷內(nèi)源性及外源性的血管緊張素II所產(chǎn)生的各種藥理作用。本研究應(yīng)用氯沙坦,降低了交感神經(jīng)活性,對(duì)慢性心衰的治療有重要意義。PVN是調(diào)節(jié)交感神經(jīng)活動(dòng)和動(dòng)脈血壓的一個(gè)重要中樞,PVN神經(jīng)元細(xì)胞與頭端延髓腹外側(cè)區(qū)、孤束核和脊髓交感神經(jīng)節(jié)前神經(jīng)元直接聯(lián)系,一些脊髓神經(jīng)元可以接受血壓和化學(xué)物質(zhì)的刺激而將信息傳遞到PVN。PVN核團(tuán)接受很多神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié),包括腎上腺素能、乙酰膽堿能、谷氨酸、血管緊張素能遞質(zhì)。在離體實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證明一些神經(jīng)遞質(zhì),如γ-氨基丁酸、谷氨酸、一氧化氮和血管緊張素Ⅱ可以影響PVN神經(jīng)元的興奮性。在冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所導(dǎo)致的大鼠心衰模型中,PVN神經(jīng)元對(duì)交感神經(jīng)活性的增高有重要作用。研究證明大鼠心衰狀態(tài)下血管緊張素受體在PVN中有增加,因此推測(cè)PVN中血管緊張素受體介導(dǎo)的血管緊張素反應(yīng)在交感神經(jīng)活性的調(diào)節(jié)