免疫學(xué)課件：免疫血清學(xué)技術(shù)

第13章免疫學(xué)技術(shù)概論重點(diǎn)免疫學(xué)技術(shù)類型影響免疫血清學(xué)反應(yīng)的因素第1節(jié)免疫血清學(xué)技術(shù)概述免疫血清學(xué)技術(shù)類型：凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、標(biāo)記抗體技術(shù)（免疫熒光抗體技術(shù)、免疫酶標(biāo)記技術(shù)、放射免疫測定）、中和試驗(yàn)等血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性和交叉性抗原與抗體結(jié)合機(jī)理血清學(xué)反應(yīng)的影響因素：電解質(zhì)、溫度、酸堿度帶現(xiàn)象：前帶后帶第2節(jié)細(xì)胞免疫檢測技術(shù)

檢測機(jī)體血液中的T細(xì)胞數(shù)量E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)T細(xì)胞酸性α醋酸萘酯酶測定

檢測機(jī)體血液中T細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)T細(xì)胞活化試驗(yàn)第3節(jié)血清學(xué)技術(shù)的應(yīng)用及發(fā)展趨勢疫病診斷動(dòng)植物生理活性物質(zhì)研究物種及微生物鑒定動(dòng)植物形狀的免疫標(biāo)記生物制品研究致病機(jī)理研究分子生物學(xué)研究發(fā)展趨勢第14章凝聚性試驗(yàn)

第1節(jié)凝集試驗(yàn)

直接凝集試驗(yàn)：顆粒性抗原間接凝集試驗(yàn)：間接血凝實(shí)驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、炭素凝集試驗(yàn)直接凝集試驗(yàn)：顆粒性抗原基本原理：電解質(zhì)顆粒性抗原+相應(yīng)抗血清抗原顆粒凝集(細(xì)菌、紅細(xì)胞)

比例適合凝集原凝集素過多前帶現(xiàn)象（稀釋血清）方法：玻片法、試管法、微量法間接凝集試驗(yàn)：基本原理可溶性抗原（或抗體）+惰性載體（聚苯乙烯乳膠微粒、炭粒、綿羊紅細(xì)胞等）抗原（或抗體）致敏載體

抗原（抗體）致敏載體+相應(yīng)抗體（或抗原）被動(dòng)載體凝集（間接乳膠凝集、間接炭素凝集、間接紅細(xì)胞凝集等）第2節(jié)沉淀實(shí)驗(yàn)

電解質(zhì)可溶性抗原+免疫血清出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象(血清蛋白、病毒)（抗體）比例適合

沉淀原沉淀素

比例不適合

不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象容易過多后帶現(xiàn)象（稀釋）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)雙向單擴(kuò)散（輻射擴(kuò)散）雙向雙擴(kuò)散免疫電泳對流免疫電泳火箭免疫電泳環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理：小試管內(nèi)，下層沉淀素與上層沉淀原在界面應(yīng)，形成白色沉淀環(huán)。用途：檢測皮毛中的炭疽桿菌抗原（Ascoli試驗(yàn)）免疫熒光抗體技術(shù)原理：異硫氰酸熒光素（FITC）原理：熒光素（F）+AbAbF(FITC)

AbF+AgAg-AbF紫外光Ag-AbF標(biāo)記抗體的制備：抗原免疫動(dòng)物抗體提取IgG標(biāo)記標(biāo)記抗體的提純標(biāo)記抗體的鑒定熒光抗體染色：標(biāo)本制備染色（直接法、間接發(fā)）應(yīng)用：用AbF檢測抗原（定性、定位）特點(diǎn)：敏感，需熒光顯微鏡免疫酶標(biāo)記技術(shù)原理：常用標(biāo)記酶：辣根過氧化物酶（HRP）酶標(biāo)抗體的制備：抗原免疫動(dòng)物抗體提取IgG標(biāo)記（戊二醛法、過碘酸鈉法）標(biāo)記抗體的提純標(biāo)記抗體的鑒定常用免疫酶技術(shù)：免疫酶組織化學(xué)染色技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）應(yīng)用：放射免疫分析原理：競爭性RIA固相夾心RIAAg*(F)+Ab

Ag*-Ab(B)+Ag

Ag-Ab標(biāo)記用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫測定、固相非競爭放射免疫測定應(yīng)用：用于藥物、激素、酶、腫瘤抗原等測定

中和試驗(yàn)（病毒、毒素中和試驗(yàn)）原理：病毒與抗血清中抗體特異結(jié)合后失去感