流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定曲克蘆丁

流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定曲克蘆丁

特洛伊木瓜的貨物被稱為維腦路通，化學(xué)名稱為3、4和7-3。氨基黃酮5-羥基黃酮的英香劑。它可以抑制血小板的聚集，防止血栓形成，對(duì)抗5-羥色胺。這是治療閉塞性腦病的常用藥物。文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定曲克蘆丁的方法有紫外分光光度法、薄層色譜法、熒光法、電化學(xué)伏安法和高效液相色譜法?；瘜W(xué)發(fā)光分析法以其靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單而越來(lái)越受到人們的青睞。我們?cè)谠贙IO4-HCl-MnSO4-吐溫-80體系中,不加任何發(fā)光試劑,建立了膠束化學(xué)發(fā)光法測(cè)定曲克蘆丁的方法。近期我們研究發(fā)現(xiàn),曲克蘆丁對(duì)Luminol-K2S2O8化學(xué)發(fā)光體系有強(qiáng)烈的抑制作用,基于此,結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù),建立了流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定曲克蘆丁含量的新方法。該法靈敏度高,線性范圍寬,而且操作簡(jiǎn)單快速,節(jié)省試劑。方法用于曲克蘆丁片劑和注射液中曲克蘆丁的含量測(cè)定,結(jié)果滿意。1實(shí)驗(yàn)部分1.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制BPCL微弱發(fā)光測(cè)量?jī)x(中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所);蘭格蠕動(dòng)泵(保定蘭格恒流泵有限公司);六通注射閥;BPCL數(shù)據(jù)獲取和處理軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的采集、處理在WindowsXP界面下的BPCL軟件來(lái)完成。整個(gè)分析系統(tǒng)如圖1所示。曲克蘆丁(中國(guó)生化藥物檢測(cè)所)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取7.42mg曲克蘆丁,加入適量水溶解,待溶解完全后,轉(zhuǎn)入100mL棕色容量瓶,搖勻,用水定容,配成1.0×10-4mol/L曲克蘆丁溶液,用時(shí)逐級(jí)稀釋;NaOH(天津市化學(xué)試劑三廠);Lumi-nol1.0×10-2mol/LLuminol(Sigma公司)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取1.722gLuminol和4.0gNaOH,用水溶解后轉(zhuǎn)入1L容量瓶中,搖勻,定容,配成1.0×10-2mol/L溶,放置3d后使用,用0.1mol/LNaOH逐級(jí)稀釋到所需濃度;K2S2O8標(biāo)準(zhǔn)溶液:0.1mol/L,使用時(shí)逐級(jí)稀釋;所用試劑均為分析純,水為二次去離子水。1.2流通池的分析按圖1所示流路,將各輸液管插入相應(yīng)溶液,開啟蠕動(dòng)泵,將K2S2O8溶液和載流(水)以穩(wěn)定的流速通過(guò)相應(yīng)的管道進(jìn)入分析系統(tǒng),待基線平穩(wěn)后,通過(guò)注射閥分別將水和Luminol(或樣品和Luminol)混合溶液注入載流水中,與K2S2O8溶液匯流后進(jìn)入流通池中產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào),分別記錄空白I0和試樣IS,以其差值■I(■I=I0-IS)進(jìn)行分析。2結(jié)果與討論2.1混合液與樣品溶液的混合考察了K2S2O8、Luminol、樣品和載流的不同混合方式對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響,發(fā)現(xiàn)將樣品通過(guò)載流注入K2S2O8和Luminol的混合溶液,其基線不穩(wěn),重現(xiàn)性差,且較浪費(fèi)Luminol溶液。而將Luminol和樣品溶液注入載流水中,與K2S2O8溶液混合,基線穩(wěn)定,空白值低,信號(hào)值高,重現(xiàn)性好,節(jié)省試劑。故采用圖1所示的流路。實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)輸液管內(nèi)徑為0.8mm,采樣管50μL,閥池距25cm,流速為10mL/min時(shí),發(fā)光信號(hào)有較好信噪比。2.2ks2o8濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響K2S2O8是該化學(xué)發(fā)光體系的氧化劑,其濃度對(duì)體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度影響比較大。在固定NaOH濃度為0.1mol/L,Luminol濃度為1.0×10-4mol/L,曲克蘆丁濃度為6.7×10-6mol/L的條件下,考察了K2S2O8的濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明,隨著K2S2O8濃度的增加,發(fā)光強(qiáng)度增加,當(dāng)K2S2O8濃度為5.0×10-3mol/L時(shí),化學(xué)發(fā)光分析信號(hào)最大。實(shí)驗(yàn)中選用K2S2O8濃度為5.0×10-3mol/L。2.3抑制性因素的測(cè)定在堿性條件下,曲克蘆丁對(duì)K2S2O8-Luminol化學(xué)發(fā)光體系才能產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制作用。在曲克蘆丁濃度為6.7×10-6mol/L的條件下,試驗(yàn)了NaOH的濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響,當(dāng)NaOH濃度為0.125mol/L時(shí),化學(xué)發(fā)光分析信號(hào)最大。實(shí)驗(yàn)中選用NaOH濃度為0.125mol/L。2.4luminol濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響曲克蘆丁水解反應(yīng)時(shí)分布的影響曲克蘆丁曲克蘆丁相系中長(zhǎng)片膜分析,見表1.Luminol的濃度是影響曲克蘆丁測(cè)定的重要因素,其值太大時(shí)空白與信號(hào)的差值太小,反之測(cè)定曲克蘆丁的靈敏度低。當(dāng)曲克蘆丁濃度為6.7×10-6mol/L,試驗(yàn)了Luminol的濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。發(fā)現(xiàn)Luminol濃度增加,發(fā)光強(qiáng)度隨之增加,基線也隨之升高,但當(dāng)濃度大于1.0×10-4mol/L時(shí),分析信號(hào)趨于平穩(wěn)?？紤]到試劑消耗,實(shí)驗(yàn)中選用Luminol濃度為1.0×10-4mol/L。2.5體系的線性關(guān)系在選擇的最佳條件下,曲克蘆丁的濃度在1.0×10-7~6.7×10-5mol/L范圍內(nèi)時(shí)與體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度有良好的線性關(guān)系。為提高測(cè)定的精密度和準(zhǔn)確度,標(biāo)準(zhǔn)曲線按不同數(shù)量級(jí)分段繪制,見表1。方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%(n=11,c=4.0×10-7mol/L),按IUPAC規(guī)定,計(jì)算得曲克蘆丁的檢出限為8.0×10-8mol/L。2.6曲克蘆丁的測(cè)定試驗(yàn)了曲克蘆丁中可能存在的無(wú)機(jī)離子與有機(jī)物對(duì)本方法的干擾情況。結(jié)果表明,對(duì)6.7×10-6mol/L的曲克蘆丁,以測(cè)定相對(duì)誤差不超過(guò)±5%計(jì),以下物質(zhì)的允許存在量為:1000倍的K+、Na+、Cl-、NO3-,100倍量的Ca2+、CO32-、SO42-,10倍的Zn2+等常見無(wú)機(jī)離子對(duì)測(cè)定不干擾;100倍的淀粉,50的檸檬酸,50倍的C2O42-,20倍的葡萄糖、蔗糖均不干擾測(cè)定。2.7測(cè)試液的配制取曲克蘆丁片劑10片,研細(xì),準(zhǔn)確稱取曲克蘆丁粉末60mg,用適量水溶解,定容于100mL容量瓶,配制成6.0×10-4g/mL的曲克蘆丁儲(chǔ)備液,逐級(jí)稀釋配成一定濃