遺傳病診斷張課件

14遺傳病診斷6、法律的基礎(chǔ)有兩個(gè)，而且只有兩個(gè)……公平和實(shí)用?！?、有兩種和平的暴力，那就是法律和禮節(jié)?！璧?、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序?！獊喞锸慷嗟?、上帝把法律和公平湊合在一起，可是人類卻把它拆開?！椤た茽栴D10、一切法律都是無用的，因?yàn)楹萌擞貌恢鼈?，而壞人又不?huì)因?yàn)樗鼈兌兊靡?guī)矩起來?！轮円怂?4遺傳病診斷14遺傳病診斷6、法律的基礎(chǔ)有兩個(gè)，而且只有兩個(gè)……公平和實(shí)用?！?、有兩種和平的暴力，那就是法律和禮節(jié)?！璧?、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亞里士多德9、上帝把法律和公平湊合在一起，可是人類卻把它拆開?！椤た茽栴D10、一切法律都是無用的，因?yàn)楹萌擞貌恢鼈?，而壞人又不?huì)因?yàn)樗鼈兌兊靡?guī)矩起來?！轮円怂古R床遺傳Clinicalgenetics臨床遺傳學(xué)clinicalgenetics：是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的重要組成部分，其內(nèi)容是運(yùn)用醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)理論知識(shí)，通過家系調(diào)查和各項(xiàng)臨床檢查來診斷、治療和預(yù)防遺傳病。14遺傳病診斷6、法律的基礎(chǔ)有兩個(gè)，而且只有兩個(gè)……公平和實(shí)1遺傳病診斷張課件2遺傳病診斷張課件3遺傳病診斷張課件4遺傳病診斷張課件5一、常規(guī)臨床診斷（一）、采集病史家史：親緣關(guān)系、婚姻關(guān)系、發(fā)病情況、繪系譜婚史：婚齡、次數(shù)、配偶情況、近婚生育史：育齡、子女?dāng)?shù)、流、死產(chǎn)史、產(chǎn)傷病毒感染一、常規(guī)臨床診斷（一）、采集病史6（二）、癥狀與體征1.智力低下、2.特殊面容、3.特殊氣味4.耳聾、5.肝脾腫大、6.皮膚毛發(fā)異常7.肢體畸形、8.生殖器變化、9.生長發(fā)育遲緩（三）、臨床輔助檢查（二）、癥狀與體征7二、系譜分析pedigreeanalysis繪制系譜應(yīng)注意：1.系統(tǒng)、完整系譜成員應(yīng)調(diào)查三代以上，（包括死者）凡有近親婚配、死胎、流產(chǎn)和嬰兒死亡等，也須詢問清楚，記錄在系譜中。2.去偽存真注意區(qū)別病人和家屬所提供信息的真?zhèn)巍?.注意新的基因突變沒有家族史的先證者應(yīng)考慮是新的基因突變。

例如：假肥大型肌營養(yǎng)不良（DMD）約有1/3的病例為新的基因突變引起的。一般認(rèn)為是由于患者母親卵子形成過程中X染色體上DMD基因突變所致。二、系譜分析pedigreeanalysis繪制系譜應(yīng)注意8對系譜的分析要注意區(qū)別：1.孟德爾遺傳病2.非孟德爾遺傳病3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病對系譜的分析要注意區(qū)別：91.孟德爾遺傳病包括AD遺傳病、AR遺傳病、XD遺傳病、XR遺傳病、YL疾病等。系譜分析對這類疾病的分析非常有用，分析時(shí)要考慮到某些疾病的遺傳異質(zhì)性、不規(guī)則外顯、外顯不全和延遲顯性等情況，可能會(huì)造成一些臨床假象，由于遺傳的異質(zhì)性可能將不同的遺傳病誤認(rèn)為同一種遺傳病進(jìn)行分析。1.孟德爾遺傳病102.非孟德爾遺傳?、倬€粒體遺傳?。壕€粒體基因突變所致的遺傳病只通過母系遺傳，女性患者的子女都可能患病。線粒體遺傳病表現(xiàn)為晚發(fā)、進(jìn)行性。②多基因病：其家族性聚集性可能類似于孟德爾遺傳，但不嚴(yán)格遵循孟德爾分離規(guī)律。2.非孟德爾遺傳病113.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾?、倩蚪M印記來自雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不是等同的，這些等位基因在傳遞上符合孟德爾規(guī)律，但在表達(dá)方面受傳遞的雙親性別影響,因而產(chǎn)生母源印記或父源印記時(shí)，在系譜分析中要加以注意。②動(dòng)態(tài)突變在孟德爾遺傳疾病中，突變后的基因在世代傳遞中穩(wěn)定存在，但在三核苷酸重復(fù)序列擴(kuò)展所致的遺傳病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復(fù)單元的數(shù)目發(fā)生改變。3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病12三、細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics檢查（一）、CS檢查—核型分析又稱核型分析（karyotapeanalysis)，即通過血液或組織培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本，進(jìn)而顯帶、顯微攝影，分組排列對比分析。是確診染色體病的主要方法。隨著顯帶技術(shù)的應(yīng)用以及高分辯率染色體顯帶技術(shù)的出現(xiàn)和改進(jìn)，能更準(zhǔn)確地判斷和發(fā)現(xiàn)更多的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常綜合征，還可以發(fā)現(xiàn)新的微畸變綜合征。三、細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics檢查（一）、CS檢查13CS檢查指征：①智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。②夫婦中有染色體異常，如平衡結(jié)構(gòu)重排、嵌合體等。③家族中已發(fā)現(xiàn)染色體異常或先天畸形個(gè)體。④多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫。⑤原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者。⑥35歲以上的高齡孕婦。⑦有兩性內(nèi)外生殖器畸形者。⑧身材高大，性情粗暴的男性⑨惡性血液病患者⑩長期接受X線、電離輻射的人員CS檢查指征：①智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。14（二）、性染色質(zhì)檢查：性染色體數(shù)目異常。不分裂細(xì)胞：X染色體數(shù)=X染色質(zhì)數(shù)+1Y染色體數(shù)=Y染色質(zhì)數(shù)遺傳病診斷張課件15（三）、染色體原位雜交insituhybridizationofchromosome用標(biāo)記的DNA片段與玻片上的細(xì)胞、染色體或間期核的DNA或RNA雜交，在不改變原來結(jié)構(gòu)的情況下，研究核酸片段的位置、相互關(guān)系。染色體熒光原位雜交

fluorescenceinsituhybridization,FISH（三）、染色體原位雜交insituhybridizati16遺傳病診斷張課件17X染色體Y染色體13號(hào)染色體18號(hào)染色體21號(hào)染色體X染色體Y染色體13號(hào)染色體18號(hào)染色體21號(hào)染色體1813號(hào)染色體21號(hào)染色體13號(hào)染色體21號(hào)染色體19SpectralKaryotyping(SKY)NormalmaleSpectralKaryotyping(SKY)Norm20TumorcellfromfemaleTumorcellfromfemale2124colorsFISH24colorsFISH22四、生化檢查1.Pr和酶的分析確定單基因病2.代謝產(chǎn)物的檢測反映酶活性四、生化檢查1.Pr和酶的分析確定單基因病23基因診斷特點(diǎn):①針對直接病因診斷。②特異性強(qiáng),靈敏度高。③適應(yīng)性強(qiáng),診斷范圍廣,因基因探針可為任何來源、任何種類,其探針序列可為未知或已知,待檢測的目的基因可為一個(gè)特定基因或基因組合。④目的基因是否處于活化狀態(tài)均可,無組織和發(fā)育特異性,因此可用于檢測一些具有組織表達(dá)特異性和分化階段表達(dá)特異性的基因。五、基因診斷(genediagnosis）基因診斷特點(diǎn):五、基因診斷(genediagnosis）24（一）基因診斷的基本技術(shù)*分子雜交技術(shù)*聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)*DNA序列測定技術(shù)*基因芯片技術(shù)（一）基因診斷的基本技術(shù)25分子雜交技術(shù)molecularhybridization

原理：雙鏈DNA在加熱到一定溫度以上或在堿性溶液中會(huì)變性成為兩條單鏈，互補(bǔ)的兩條DNA單鏈在一定條件下結(jié)合成為雙鏈。即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。分子雜交技術(shù)26聚合酶鏈反應(yīng)及相關(guān)技術(shù)

（polymerasechainreaction,PCR聚合酶鏈反應(yīng)及相關(guān)技術(shù)

（polymerasechain27例：診斷Barts胎兒水腫綜合癥。1）建立反應(yīng)體系2）DNA擴(kuò)增3）電泳檢測待測DNAα基因引物dTNPTaq酶950C→560C→720C

變性退火延伸α基因例：診斷Barts胎兒水腫綜合癥。待測DNAα基因引物dTN28

DNA測序技術(shù)(DNAsequenceing）

Maxan和Gilbert首先建立了化學(xué)方法，Sanger建立了DNA測序的酶學(xué)方法。最新的DNA自動(dòng)測序法以不同熒光色素標(biāo)記的四種不同脫氧核苷酸為原料進(jìn)行酶促合成反應(yīng)，經(jīng)過凝膠電泳分離，應(yīng)用激光分析及計(jì)算機(jī)處理就能直接讀出堿基順序。極大地推進(jìn)了生命科學(xué)的發(fā)展和人類基因組計(jì)劃的進(jìn)程，而且測序的長度可以達(dá)到1000bp以上。DNA測序技術(shù)(DNAsequenceing）29基因芯片技術(shù)

基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律地排列固定于支持物上，形成矩陣點(diǎn)。樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)記分子，然后按堿基配對原理進(jìn)行雜交，再通過熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描，并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對每一探針上的熒光信號(hào)做出比較和檢測，得出所要的信息?；蛐酒夹g(shù)30遺傳病診斷張課件31遺傳病診斷張課件32（二）基因診斷的途經(jīng)1.直接診斷——檢測突變基因

直接診斷是直接檢測致病突變的基因。它通常使用基因本身或緊鄰的DNA序列作為探針，或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以探查基因無突變、缺失等異常及其性質(zhì)，這稱為直接基因診斷，它適用已知基因異常的疾病。（二）基因診斷的途經(jīng)33當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,或者對致病基因以及分子機(jī)制已完全了解,或者對致病基因以及分子機(jī)制部分了解但已知其中規(guī)律,可應(yīng)用此途徑。當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,342.間接診斷——基因連鎖分析當(dāng)致病基因雖然已知但其異常尚屬未知或突變類型較多時(shí)；或致病基因本身尚屬未知時(shí)，但被檢測基因有緊密連鎖的DNA多態(tài)標(biāo)記，可以通過對受檢者及其家系進(jìn)行連鎖分析，以推斷前者是否獲得了帶有致病基因的染色體。

2.間接診斷——基因連鎖分析35連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性位，特別是基因突變部位或緊鄰的多態(tài)性位點(diǎn)作為標(biāo)記。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP等技術(shù)均可用于連鎖分析。連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性36（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些異常大體可分為基因缺失和突變兩大類型。根據(jù)對基因異常類型的了解，可以采用不同的診斷方法。（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同37

遺傳的基因診斷方法基因異常方法探針、引物或限制酶基因缺失基因組DNA印跡雜交\PCR擴(kuò)增缺失基因的探針引物包括缺失或在缺失部位內(nèi)點(diǎn)突變RFLP分析\ASO雜交突變導(dǎo)致其切點(diǎn)消失的限制酶PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析正常和異常的ASO探針（RFLP、SSCP、DGGE）引物包括突變部位基因已知基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性基因內(nèi)或旁但異常不明（RFLP、SSCP、AMP－FLP）側(cè)序列探針或引物連鎖分析基因未知與疾病連鎖的多態(tài)性，與疾病連鎖的多態(tài)如SSCP、AMP－FLP連鎖分析，位點(diǎn)探針或引物RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析遺傳的基因診斷38（四）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用例：Hbs病β6GAG（谷）→GTG（纈）MstⅡ可識(shí)別并切割βA:CCTGAGG序列不能切割βs:CCTGTGG序列此切點(diǎn)消失（四）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用例：Hbs病39IVS-Ⅰ1.15kbMstⅡ切點(diǎn)

1.15kb0.2kbHbA1.35kbA→THbS

1.15kb1.35kb0.2kb正常雜和體HbS病失IVS-Ⅰ1.15kbMstⅡ切點(diǎn)1.15kb0.2kb40第三節(jié)產(chǎn)前診斷（prenataldiagnosis)產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷（intrauterinediagnosis）是對胚胎或胎兒在出生前是否患有某種遺傳病或先天畸形作出準(zhǔn)確的診斷。第三節(jié)產(chǎn)前診斷（prenataldiagnosis)產(chǎn)411．35歲以上的高齡孕婦或夫婦一方有明顯致畸因素接觸史；2．夫婦之一有染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常者；或曾生育過染色體病患兒的孕婦；3．已知或推測孕婦是AR或XR攜帶者；曾生育過某種單基因遺傳病患兒的孕婦；4．曾生育過先天畸形（尤其是神經(jīng)管畸形）的孕婦；5．有原因不明的自然流產(chǎn)，畸胎，死產(chǎn)及新生兒死亡的孕婦。一、產(chǎn)前診斷的對象1．35歲以上的高齡孕婦或夫婦一方有明顯致畸因素接觸史；一42㈠儀器診斷包括：①X線檢查②超聲波檢查③胎兒鏡檢查㈡細(xì)胞學(xué)方法（染色體檢查；染色質(zhì)檢查）

㈢生物化學(xué)方法（蛋白質(zhì)或酶檢查；代謝產(chǎn)物檢查）

㈣分子生物學(xué)方法（基因分析）二、產(chǎn)前診斷的方法㈠儀器診斷二、產(chǎn)前診斷的方法43三、產(chǎn)前診斷的標(biāo)本及采集技