電穿孔簡介課件

電穿孔簡介GenePulserXcell11電穿孔的工作原理是什么?電穿孔的基本原理是將細胞置于一個瞬時的高電場的環(huán)境中，此高電場的環(huán)境使得細胞膜的表面出現很多小孔，這種條件下細胞膜對于環(huán)境中分子的透性大大增加，這樣就可以將外源分子進入細胞。利用上述的原理，那么采用電穿孔的方法就可將DNA等其他類的生物分子導入細胞內部進行研究，如蛋白分子、糖類分子等等。2電穿孔的工作原理是什么?2采用電穿孔的優(yōu)點本質上屬于物理的方法，不采用任何化學試劑，因此不會對細胞產生損傷操作方便低毒性高的轉染效率使用于種類廣泛的細胞3采用電穿孔的優(yōu)點本質上屬于物理的方法，不采用任何化學試劑，因電穿孔的主要應用導入標記基因，起到標記、指示的作用導入具體的功能基因進行研究導入藥物、蛋白、抗體等其他分子對細胞的結構和功能進行研究4電穿孔的主要應用導入標記基因，起到標記、指示的作用4具體的工作原理?將細胞和外源DNA混合后一起放在電擊杯內電擊杯被加上電壓后，細胞膜進行重排，細胞表面出現很多小孔外源DNA分子通過上述形成的小孔進行細胞內部當外界的電場撤消后，細胞膜表面的小孔重新關閉，這時阻止外界的分子再進入細胞5具體的工作原理?將細胞和外源DNA混合后一起放在電擊杯內5GenePulserXcell

電穿孔系統(tǒng)6GenePulserXcell

電穿孔系統(tǒng)6主要的優(yōu)點、特點提供指數波和方波2種電穿孔條件，可對任何的真核細胞、原核細胞的電轉染實驗條件進行優(yōu)化采用Bio-Rad專利的PulseTrac電路和電弧保護設計，可確保實驗的重復性并保護樣品模塊化的設計可方便用戶根據不同的實驗要求進行選擇友好的數字化界面，可直觀的編程控制所有的參數，包括附屬模塊的參數提供多種操作模式，包括手動設置、預設模式、用戶編程等多種方式7主要的優(yōu)點、特點提供指數波和方波2種電穿孔條件，可對任何的真主要的優(yōu)點、特點：2種波型電穿孔的過程中可以有2種波型來控制外界電壓的變化TheGenePulserXcell可以提供2種波型，即指數波和方波8主要的優(yōu)點、特點：2種波型電穿孔的過程中可以有2種波型來控制ExponentialDecay電容器充電到預定的電壓(v0)放電后，即向樣品釋放脈沖，細胞表面的電壓隨時間按指數方式下降的電容器的電壓值達到峰值釋放脈沖后迅速的衰減電場強度E(V/cm)是用來描述電擊杯外界電場環(huán)境的一個參數（E=V/d）脈沖時間是一般用時間常數來進行衡量(~37%ofV0，V0/e)脈沖的時間是由電阻和電容的大小所決定的9ExponentialDecay電容器充電到預定的電壓(vGPX和指數波GPX產生指數波的電路結構Charger充電回路放電回路電容器電擊杯3ohm電阻基本電路10GPX和指數波GPX產生指數波的電路結構Charger充電回GPX和指數波GPX產生指數波的電路結構Charger充電回路放電回路電容器電擊杯3ohm電阻r充電根據具體電壓及電容的選擇，可以采用主單元或者CE模塊對電容進行充電11GPX和指數波GPX產生指數波的電路結構Charger充電回GPX和指數波GPX產生指數波的電路結構Charger充電回路放電回路電容器r電擊杯3ohm電阻放電Thechargeisdeliveredtothecuvette12GPX和指數波GPX產生指數波的電路結構Charger充電回PulseTrac電路是如何確保每次實驗電壓的精確度及實驗的重復性在每次放電前，PulseTrac電路都會預測整個放電回路的電阻值，并計算得到應該加在電容器上的電壓，確保放電后樣品上獲得的電壓和理論電壓值的一致在放電回路中3歐姆的電阻可以起到減小回路中電流的作用，適當的保護樣品注意：PulseTrac回路技術是Bio-Rad公司的專利技術，其他任何廠家都不能提供13PulseTrac電路是如何確保每次實驗電壓的精確度及實驗PC模塊的結構與原理?電流會經過電阻最小的通路PC模塊中的電阻決定了脈沖過程中的時間常數，電阻越小，放電時間越短Charger充電回路放電回路電容器Cuvette3ohm電阻rPC模塊并聯電阻當樣品的電阻遠遠大于PC模塊的電阻時，則PC模塊的電阻約等于放電回路的電阻14PC模塊的結構與原理?電流會經過電阻最小的通路Charger方波電容器的指數放電過程中被截止后就會形成方波，其時間常數遠大于脈沖時間脈沖時間就是細胞被放電的時間脈沖是可以被反復釋放的，在低壓回路最多可以重復10次，在高壓回路最多可以重復2次脈沖的間隔時間就是指2個脈沖間的時間脈沖下降是指終止電壓和起始電壓值之間的差值15方波電容器的指數放電過程中被截止后就會形成方波，其時間常數遠GPX和方波高電壓回路:

一次充電，一次脈沖。在下一次脈沖前，電容器需要重新充電

最多只能進行2次脈沖，脈沖時間為0.05–5msec，脈沖間隔為5-30sec低電壓回路:

該電路是可調的，因此可一次充電，進行多次的脈沖

最多可進行10次脈沖，脈沖時間為0.05-100msec，脈沖間隔為0.1–10sec16GPX和方波高電壓回路:16特點:PulseTrac電路和電弧保護PulseTrac電路確保樣品上所加電壓的精確度將CE模塊中的低壓電容器的精度從20%提高到10%電容器的校正方便，確保每次脈沖的精確，并且能修正隨著使用而產生的電容器指標的偏差

在每次脈沖前就能預測樣品的電阻當脈沖或電路中斷時，可進行安全的放電，確保安全電弧保護設計，確保設備和樣品的安全17特點:PulseTrac電路和電弧保護PulseTrac電什么是電弧保護?

在電擊杯中出現電阻特別小的區(qū)域時，就會形成短路，產生電弧。樣品緩沖液中的離子成分就會造成電弧現象只要上述電阻突然變小的情況被檢測到，那么電流就不會經過樣品電弧保護就是在存在短路的情況下，使電流不經過樣品，確保樣品不受強電流的損傷如果樣品量很少的話，那么產生的熱量會使得樣品蒸發(fā)如果由于樣品的低電阻而產生電弧，那么GPX會給出提示，并不能提供脈沖Ionscollectabovesample18什么是電弧保護?

在電擊杯中出現電阻特別小的區(qū)域時，就會形成特點:模塊化設計主機CE模塊PC模塊ShockPod電擊槽系統(tǒng)部件19特點:模塊化設計主機CE模塊PC模塊ShockPod電擊槽特點:友好的操作界面圖表化的操作界面可以設置所有的實驗參數，包括附屬模塊的參數20特點:友好的操作界面圖表化的操作界面可以設置所有的實驗參數特點:可選擇的程序設置HOME1.Exponentialprotocol2.Timeconstantprotocol3.Squarewaveprotocol4.Pre-setprotocols>5.Userprotocols

HOME<6.Lastpulse7.Optimize8.Datamanagement9.Measurements10.Userpreferences主菜單21特點:可選擇的程序設置HOMEHOME主菜單211.指數波程序顯示結果顯示221.指數波程序顯示結果顯示222.時間常數確定的指數波形式程序顯示結果232.時間常數確定的指數波形式程序顯示結果233.方波程序顯示結果顯示243.方波程序顯示結果顯示244.GPX內部預設程序MammalianCellsBacterialCellsFungalCellsCHOE.coliS.cerivisiaeCos7A.tumefaciensP.pastoris3T3P.aeruginosaC.albicans293S.aureusS.pombeHeLaB.cereusD.discoideumBHK21S.pyogenesA549L.plantrumCV1K562HL60JurkatHuT78對于常規(guī)的細胞，經過優(yōu)化的電穿孔條件254.GPX內部預設程序MammalianCellsBac5.用戶自儲存的程序

最多可儲存144個程序

12個人，每人12個程序

可按照名字儲存

可修改或刪除265.用戶自儲存的程序266.最后一次電穿孔的條件即使關機后，GPX還是可以調出儀器最后一次電穿孔的條件，并利用該程序進行實驗。方便實驗室最常用程序的使用276.最后一次電穿孔的條件277.實驗條件的優(yōu)化可用于方便的優(yōu)化實驗條件，可連續(xù)的對脈沖條件中的電壓某一個參數進行優(yōu)化該功能可在指數波、方波、特定時間常數的指數波模式下使用287.實驗條件的優(yōu)化可用于方便的優(yōu)化實驗條件，可連續(xù)的對脈沖8.實驗數據管理數據管理可以調出之前的100個實驗程序顯示每個程序的設置條件和結果298.實驗數據管理數據管理299.儀器的測量功能該功能使用戶可以在日常的工作中經常對GPXCE模塊電路中的電容器進行校正，確保實驗的精確，具體的步驟如下：斷開ShockPod電擊槽連接CE模塊按下操作面板上的小數點按鍵在電擊前預測樣品的電阻在實驗前，在電擊杯里加入樣品后放入ShockPod電擊槽內，在ResistanceMeasurement的菜單下按下“回車鍵”309.儀器的測量功能該功能使用戶可以在日常的工作中經常對GP10.用戶可對GPX設置