免疫組化在病毒學中的應(yīng)用

免疫組化法在病毒學上的應(yīng)用摘要:免疫組化法是將抗原抗體反應(yīng)的專一性和顯微形態(tài)學相結(jié)合，以研究組織或細胞中抗原定位的一種技術(shù)。在病毒學研究中，通過采用免疫組化技術(shù)可結(jié)合形態(tài)病變，快速、特異的檢測各種病毒對組織細胞的感染并了解其致病機理。本文將結(jié)合實例對免疫組化法的原理和其發(fā)展以及在病毒學上應(yīng)用的特點作簡要介紹。關(guān)鍵詞：免疫組化；病毒學；檢測免疫組化，是應(yīng)用免疫學基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應(yīng)使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究的技術(shù)。具有特異性強、敏感度高、定位準確、形態(tài)與功能相結(jié)合的特點。免疫組化法在病毒學上有著廣泛的應(yīng)用。利用免疫組化法對受病毒感染的組織進行檢測，可明確發(fā)現(xiàn)病原體抗原的部位并對其定位，從而了解病毒的存在及其感染機體后的分布情況。1.免疫組化法概述1.1基本原理免疫組化是目前生命科學研究中應(yīng)用最廣泛的方法，利用抗體與抗原的結(jié)合具有高度特異性的特點，采用一直的抗體檢測組織或細胞的抗原物質(zhì)，以期確定組織或細胞是否存在未知抗原，并進行抗體的定性、定位或定量的研究[1,2]。它將免疫學、組織學、生物化學等學科的理論和技術(shù)有機的結(jié)合起來[3]。免疫組織化學技術(shù)是用顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項技術(shù)。按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。主要步驟為先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第一抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。1.2主要特點免疫學的基本原理決定了免疫組織化學技術(shù)具有高度特異性，因此，免疫組織化學技術(shù)參考文獻[1]馬貴平，李冰玲，田海燕，劉來福免疫細胞化學法檢測牛腦組織中BSE病原[J].動物醫(yī)學進展，2002,23(2):33-36.[2]Shan-RongShi,RichardCote,J,ClIveR.Taylor,AntigenRetrievalImmunohistoche-mistey:Past,PresentandFuture[J].TheJournalofHistochemistryandCytochemsitry,1997,45(3):327-343.[3]張靜;新城疫病毒的分離鑒定和免疫組化法檢測的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學;2008.[4]沈卓民.實用組織學技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1998.[5]孟慶媛,劉東璞,郭夢凡,林明華,王抒.免疫組織化學染色技術(shù)實際應(yīng)用體會[J].黑龍江醫(yī)藥科學,2006,(1):82-83.[6]劉復生.免疫組織化學[J].癌癥進展,2004,(3):46-48.[7]黃曉赤，羅克樞.免疫組織技術(shù)的臨床應(yīng)用概況[J]，中華病理學雜志，2003,29(5):310-313.[8]羅偉,王廷華,趙匡彥.Ⅰ抗孵育時間對免疫組織化學實驗結(jié)果的影響[J].四川解剖學雜志,2004,12(2):100-101.[9]畢曉芳,陳利萍,方虹.不同抗原修復方法對免疫組化染色結(jié)果的影響[J].寧夏醫(yī)學雜志,2006,28(01):50-51.[10]駱新蘭，蔡秀珍，劉艷輝.不同的抗原修復條件對免疫組織化學染色結(jié)果的影響[J].中華病理學雜志,2005,34(7):52-54.[11]周曉鴿,王鵬,陸鳴.加熱抗原修復對內(nèi)源性生物素蛋白結(jié)合物的影響及其對策[J].中華病理學雜志,2002,31(9):491-496.[12]倪燦榮,戴益民.防止免疫組化染色中脫片的方法和使用體會[J].臨床與實驗病理學雜志,1989,5(3):183-184.[13]孟如松,施華強.免疫組化技術(shù)背景的非特異性著色[J].空軍總醫(yī)院學報,1989,5(3):171-172.[14]李維華.免疫組化技術(shù)在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用[J].人民軍醫(yī),1997,40(10):612.[15]同濟醫(yī)科大學及中山醫(yī)科大學病理學教研室.外科病理學(上冊)(第2版)[M].武漢:湖北科學技術(shù)出版社,1999.339.[16]黃進,周曉軍,張?zhí)?丙型肝炎病毒的免疫組化檢測技術(shù)[J];江蘇醫(yī)藥;1994年09期.[17]于品;佘銳萍;夏抗抗;李文貴;丁葉;岳卓;韓德平;;免疫組化法檢測大鼠肝臟組織中的乙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒[J];中國動物檢疫;2010年09期.ImmunohistochemicalmethodintheapplicationofvirologyStudent:NiXintao(072001221)Abstact:Immunohistochemicalmethodisakindoftechnologythatcombinesthespecificityofthetigenantibodyresponseandthemicromorphologicaltoresearchorganizationorcellpositioning.Invirologystudy,immunohistochemicaltechniquescanbecombinedwithformlesions,rapid,specificdetectionofvariousvirusinfectionofcellsandthepathogenesismechanismcanalsobeunderstoodbythismethod.Thispaperwillgiveabriefintroductionaboutimmunohistochemicalmethodcombinedw