五鶴續(xù)斷洗脫液抗衰老作用及其機制

五鶴續(xù)斷洗脫液抗衰老作用及其機制

五鶴延續(xù)是四川可持續(xù)科學的延續(xù)根，因為它起源于湖北省五峰縣和鶴峰縣。其性苦、微溫,臨床上主要用于治療跌打損傷、骨折、腰椎骨質增生、先兆性和習慣性流產(chǎn)等癥。其化學成分含皂苷、揮發(fā)油類、生物堿類和維生素E等。湖北的五鶴續(xù)斷資源極為豐富,在民間已有廣泛應用,有廣闊的藥用開發(fā)價值。研究發(fā)現(xiàn)五鶴續(xù)斷根的水提液中存在著抗體、補體多糖、免疫調節(jié)活性的高分子活性成分及維生素E,其所含維生素E具有抗衰老以延長壽命、改善學習記憶力、降低膽固醇、抗腫瘤等作用。目前有關五鶴續(xù)斷抗衰老作用機制的研究尚缺乏較完整的實驗報道,為此,我們采集本地區(qū)五鶴續(xù)斷進行抗衰老作用的實驗研究,旨在為進一步研制開發(fā)該藥提供實驗數(shù)據(jù)。1材料和方法1.1實驗材料1.1.1實驗動物2月齡昆明種小鼠30只,體質量(20.0±2.1)g,雌雄各半,由華中科技大學同濟醫(yī)學院提供。1.1.2洗脫溶液的制備五鶴續(xù)斷由恩施自治州中藥材生產(chǎn)GAP示范基地提供,取五鶴續(xù)斷干燥1kg打粉、過篩,用95%乙醇提取3次,再經(jīng)大孔樹脂吸附65%的乙醇洗脫,得洗脫液瓶裝密封備用。D-半乳糖由上海恒信化學試劑有限公司生產(chǎn),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)測定試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.1.3主要設備電子分析天平,GL-20GII型高速低溫離心機,UV-2450分光光度儀。1.2方法1.2.1頸背皮下注射5%d-半乳糖鹽水組30只小鼠隨機分為五鶴續(xù)斷組、模型組、對照組,每組10只,雌雄各半。除對照組外,另兩組均每天頸背部皮下注射5%D-半乳糖生理鹽水溶液0.025ml/g,對照組每天頸背部皮下注射等量的生理鹽水,連續(xù)注射42d。造模同時開始灌胃給藥,五鶴續(xù)斷組按20g/kg體重給藥,對照組與模型組每天灌服等量生理鹽水,連續(xù)用藥42d。1.2.2小鼠器官指數(shù)測定將各組小鼠稱重,摘眼球取血后,脫頸椎處死取出脾臟、胸腺、雙側睪丸或雙側卵巢并分別稱重,計算小鼠器官指數(shù),即器官指數(shù)=器官質量(mg)/鼠體質量(g)。1.2.3血清離心率摘取小鼠眼球取血約1ml,用高速低溫離心機以3200r/min離心4min,取血清置于4℃冰箱儲存待測。SOD、GSH-Px和MDA含量測定按試劑盒說明書進行。1.3統(tǒng)計學處理所有數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理,計量資料用均數(shù)±標準差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有顯著性。2結果2.1丸指數(shù)和卵巢指數(shù)與對照組比較,模型組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、睪丸指數(shù)和卵巢指數(shù)明顯降低(P<0.05);與模型組比較,五鶴續(xù)斷組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、睪丸指數(shù)和卵巢指數(shù)明顯升高(P<0.05)。見表1。2.2gsh-px和mda含量的比較SOD、GSH-Px及MDA含量的影響與對照組比較,模型組小鼠血清中SOD、GSH-Px的含量明顯較低(P<0.05),MDA含量明顯高于對照組(P<0.05);與模型組比,五鶴續(xù)斷組小鼠血清中SOD、GSH-Px的含量明顯升高(P<0.05),MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)。見表2。3皇病人與免疫增強作用機制研究表明,免疫系統(tǒng)從根本上參與正常脊椎動物的老化,是老化過程中的調節(jié)裝置,生物體依賴于免疫系統(tǒng)防御疾病,衰老與免疫功能的降低程度平行,病死率與免疫功能成負相關。據(jù)此Walford提出衰老的免疫學說,認為衰老是一種流行性免疫病。本實驗結果顯示,模型組小鼠的胸腺指數(shù)或脾臟指數(shù)明顯低于對照組和五鶴續(xù)斷組,提示胸腺和脾臟重量的降低、萎縮,功能衰退,五鶴續(xù)斷組明顯提高了衰老模型小鼠的胸腺指數(shù)或脾臟指數(shù)。而胸腺為中樞淋巴器官,具有重要的免疫調節(jié)作用,能夠分泌多種細胞因子,促進T細胞成熟,在建立自身免疫耐受和維持免疫自穩(wěn)方面發(fā)揮重要作用。脾臟屬于外周免疫器官,也具有重要的免疫功能。有學者認為胸腺和脾臟重量指數(shù)的改變能夠反映機體免疫功能的狀態(tài)。本實驗結果表明五鶴續(xù)斷在一定程度上可增加免疫器官的質量,預防胸腺、脾臟萎縮,具有免疫增強作用。因此五鶴續(xù)斷抗衰老作用機制可能與預防免疫器官萎縮、提高免疫功能有關。1985年Finch等人提出,衰老可以被認為是神經(jīng)指導下的內分泌激素隨齡衰減而引起的身體各部的功能逐漸喪失,即所謂神經(jīng)內分泌衰老學說。其中主要是:下丘腦-腺垂體-中心控制荷爾蒙的分泌變化,繼而影響身體各個系統(tǒng)的正常功能。本實驗中模型組小鼠的睪丸指數(shù)和卵巢指數(shù)明顯低于對照組和五鶴續(xù)斷組,提示睪丸和卵巢指數(shù)的降低、萎縮,功能衰退,五鶴續(xù)斷組明顯提高了衰老模型小鼠的睪丸指數(shù)或卵巢指數(shù),說明五鶴續(xù)斷在一定程度上可延遲性腺的萎縮,維持生殖功能,其作用機制可能與下丘腦-腺垂體-性腺軸有關。1956年DenhamHarman提出衰老的自由基學說,認為衰老過程中的退行性變化是由于細胞線粒體呼吸氧化代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基損傷DNA、蛋白質和脂質造成的機體各組織器官的老化。生物正常代謝過程所產(chǎn)生的氧自由基,如能及時被機體防御系統(tǒng)所清除,就不會造成危害,反之,若不被完全清除,蓄積的自由基就會攻擊生物大分子,使之遭到損傷,導致人體衰老。生化研究還發(fā)現(xiàn)SOD和GSH-Px廣泛存在于生物體各組織細胞中,是生物活性氧的重要清除劑酶類之一,SOD能促使過氧化物游離基轉化成過氧化氫,GSH-Px為生物體中清除過氧化氫和其他有機過氧化物的脫毒酶。MAD為自由基作用于脂質發(fā)生過氧化反應的終產(chǎn)物,會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合,且具有細胞毒性。因此提高SOD和GSH-Px的活性,降低MAD的生成,是延緩衰老的重要途徑之一,本實驗發(fā)現(xiàn)五鶴續(xù)斷洗脫液能提高衰老模型小鼠血清SOD和GSH-Px的活性,降低MDA含量,說明五鶴續(xù)斷洗脫液可提高機體防御系統(tǒng)清除氧自由基的能力,避免脂質過氧化物對細胞結構和功能的破壞,從而發(fā)揮其抗氧化、抗