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文檔簡介
第五章生物制品制造新技術主要講一些生物制品中一些新疫苗、新診斷劑及抗體的概念及原理。第一節(jié)基因工程疫苗
指DNA重組技術研制的疫苗,包括將保護性抗原基因在原核細胞或真核細胞中表達的重組亞單位疫苗;及病毒或細菌的活載體疫苗,基因缺失疫苗,DNA疫苗等。一、重組亞單位疫苗將編碼微生物保護性抗原的基因?qū)氲皆思毎蛘婧思毎?,使其表達分泌性保護性多肽抗原,加佐劑而成。優(yōu)點:A、安全、無病原性,無熱源質(zhì)和負作用。B、可用于不好培養(yǎng)的微生物疫苗制備(圓環(huán)病毒、附紅細胞體)。缺點:研究困難,價格貴。已經(jīng)生產(chǎn)的有:口蹄疫多肽疫苗,炭疽三聯(lián)毒素,皰疹病毒亞單位疫苗,激素亞單位疫苗(生長抑制激素14肽)。二、重組活體載體疫苗將保護性抗原基因轉(zhuǎn)移到活載體中表達的活疫苗。理想的載體是弱毒疫苗病毒和疫苗細菌,病毒有痘病毒,腺病毒,皰疹病毒等。一般大病毒做載體可以插入25kb的基因,小病毒僅插入2kb,故大病毒可插入多種保護性抗原基因,制成多價疫苗。非復制性疫苗(稱活-死疫苗):載體病毒半復制,無排毒危險,但可以表達目的抗原。如金絲雀痘病毒可表達新城疫HF基因。重組載體病毒活疫苗:雞痘病毒可表達多種病毒的保護性抗原基因。重組載體細菌活疫苗:如卡介苗,沙門氏菌,李氏桿菌等載體。三、基因缺失疫苗切除病毒強毒基因而制成的活疫苗,如切除偽狂犬病毒TK基因,其次還有自然缺失弱毒疫苗,如Barth-k61,以及雙基因缺失gG,gE,有利于區(qū)別野毒抗體。基因添加疫苗:插入基因,使微生物變異為弱毒疫苗,也可能是插入破壞病原基因作用。四、基因疫苗有DNA和RNA疫苗,是保護性抗原基因與載體結合,注入機體表達,不與宿主染色體整合。步驟:a、目的基因提??;b、選擇載體;c、測序確定整合;d、體外試驗;e、動物試驗;f、結構評價。自殺DNA疫苗:注入體內(nèi)的DNA疫苗,在復制幾代后自動停止,安全,不會與宿主染色體整合。五、多肽疫苗用化學或基因工程合成保護性抗原多肽,加載體和佐劑制成。
六、轉(zhuǎn)基因植物疫苗將某種基因?qū)胫参镏斜磉_,食用植物就被免疫,也叫食用疫苗,如:果蔬疫苗。導入方式:1、穩(wěn)定整合表達:基因直接整合在植物上表達,并能遺傳下代。2、瞬時表達:基因整合病毒,病毒感染植物,然后表達。第二節(jié)診斷制劑
疫病診斷最重要,新型診斷試劑開發(fā),彌補了臨床診斷的不足。一、重組表達抗原是制備出高純度的診斷抗原方法。步驟:將編碼特定抗原的基因插入質(zhì)粒,再轉(zhuǎn)入宿主細胞表達,然后提取出來做診斷抗原。二、核酸圖譜分析將被測核酸提取、切割、酶切、電泳等方法,進行分析診斷。有核酸電泳圖譜;核酸酶切圖譜、寡核苷酸指紋圖譜等三、核酸探針用已知核酸片段同位素標記為核酸探針,與樣品核酸雜交(互補結合),然后檢測互補雙鏈中有效放射同位素。四、聚合酶鏈反應(PCR)是DNA體外擴增技術:以單鏈DNA為模板,在DNA聚合酶作用下,在引物上不斷延伸,加入有4種堿基(dNTP—三磷酸脫氧核苷酸),不斷互補成DNA雙鏈,然后高溫解鏈—降溫退火—延伸,試驗不斷反復,DNA擴增數(shù)百萬倍,然后電泳來診斷。五、基因芯片也叫DNA芯片,是指將許多特定寡核苷酸片段作為探針,有規(guī)律排列固定在支撐物上,加檢測標本,相同DNA會結合成雙鏈(雙鏈吸收光譜和單鏈不一樣),然后用激光共聚焦熒光檢測系統(tǒng),對芯片掃描,記錄分析。第三節(jié)抗體工程技術
一、單克隆抗體(一)概念:具有產(chǎn)生抗體的B
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