流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報

流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報技術(shù)審評指導(dǎo)原那么一、前言本指導(dǎo)原那么旨在為注冊申請人預(yù)備及撰寫流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料提供指導(dǎo)，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料進行技術(shù)審評提供參考。本指導(dǎo)原那么是對流式細胞儀配套用檢測試劑的同樣規(guī)定，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性擬定其中內(nèi)容與否合用，假設(shè)不合用，需具體敘述理由及對應(yīng)的科學(xué)根據(jù)，并根據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。本指導(dǎo)原那么是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文獻，但不涉及注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足有關(guān)法規(guī)規(guī)定的其它辦法，也能夠采納，但需要提供具體的研究資料和驗證資料，有關(guān)人員應(yīng)在遵照有關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原那么。本指導(dǎo)原那么是在現(xiàn)行法規(guī)和原則體系以及現(xiàn)在認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和原則的不停完善，以及科學(xué)技術(shù)的不停進展，本指導(dǎo)原那么有關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)節(jié)。二、合用范疇流式細胞分析是一種在功效水平上對單細胞或其它生物粒子進行定量分析的檢測手段，能夠在短時內(nèi)高速分析大量細胞或生物粒子的物理和化學(xué)特點參數(shù)。流式細胞分析要緊靠流式細胞儀和多個特定發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體試劑組合檢測來實現(xiàn)。流式細胞儀是集電子技術(shù)、運算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論等技術(shù)原理于一體進行流式細胞分析的儀器，其工作原理為：將待測細胞或微粒進行特異性染色標(biāo)記后制成單細胞或微粒的懸液標(biāo)本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流淌室，用不含細胞或微粒的緩沖液〔鞘液〕在高壓下從鞘液管噴出，包繞著細胞或微粒高速流淌形成圓形流束〔鞘流〕，依次通過流式細胞儀的檢測區(qū)域。被熒光染色的細胞在激光束的照耀下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。前向散射光〔forwardscatter,FSC〕和側(cè)向散射光〔sidescatter,SSC〕檢測器把散射光信號轉(zhuǎn)換成電信號，熒光那么被聚光器收集，不同顏色熒光被雙色反光鏡轉(zhuǎn)向不同的光電倍增管檢測器，把熒光信號轉(zhuǎn)換成電信號。散射光信號和熒光信號通過放大后，再通過數(shù)據(jù)化解決輸入電腦并儲存，根據(jù)散射光和熒光信號對細胞或微粒進行分類或計數(shù)。其中，F(xiàn)SC反映了細胞體積的大小，SSC那么反映細胞部分構(gòu)造的信息；熒光信號強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其細胞內(nèi)、核內(nèi)物質(zhì)的濃度。臨床流式細胞分析是將流式細胞分析技術(shù)與辦法應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，與臨床疾病的診療、分型、治療、預(yù)后及防止等相結(jié)合的綜合應(yīng)用學(xué)科。其應(yīng)用范疇廣泛，涉及細胞生物學(xué)、血液免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、感染性疾病、造血干細胞移植、器官移植等多個方面。臨床流式細胞分析規(guī)定實驗人員對整個分析系統(tǒng)、多個有關(guān)實驗技術(shù)和辦法有進一步明白得和把握，并能對檢測成果予以合理的醫(yī)學(xué)闡明。本指導(dǎo)原那么中〝流式細胞儀配套用檢測試劑〞是指標(biāo)記有熒光類物質(zhì)〔如熒光素、量子點等〕、針對各類血細胞或組織細胞分化抗原的單克隆抗體試劑以及有關(guān)的質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，這些抗體與血細胞或組織細胞的各類抗原分子特異性結(jié)合，與對應(yīng)流式細胞儀配套使用，對人血液、骨髓液、其它體液或組織標(biāo)本中的被標(biāo)記細胞或分子進行分類和計數(shù)。由于多方面差別，本文內(nèi)容將不涉及預(yù)期用途為運用流式細胞術(shù)進行特異性目的細胞分選的檢測試劑。本指導(dǎo)原那么合用于進行初次注冊申報和有關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。三、差不多規(guī)定〔一〕綜述資料綜述資料要緊涉及產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、辦法學(xué)特點、生物安全性評判、研究成果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情形介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合?體外診療試劑注冊治理辦法〔試行〕?〔下列簡稱?辦法?〕和?體外診療試劑注冊申報資料形式與差不多規(guī)定?〔國食藥監(jiān)械[]609號〕的有關(guān)規(guī)定?！捕钞a(chǎn)品闡明書闡明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、實驗操作辦法、檢測成果闡明以及有關(guān)本卷須知等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員對的操作、臨床大夫針對檢查成果給出合理醫(yī)學(xué)闡明的重要根據(jù)，也是體外診療試劑注冊申報的重要文獻之一。流式細胞儀檢測專業(yè)性較強，對產(chǎn)品闡明書的編制進行必要的指導(dǎo)顯得更為重要。該類產(chǎn)品闡明書除對單克隆抗體試劑做必要的介紹外，還應(yīng)對樣本采集、樣本解決及儲存、儀器校準(zhǔn)、檢測質(zhì)量操縱、成果分析等有關(guān)環(huán)節(jié)做具體描述，以確保分析成果的精確性和可重復(fù)性。產(chǎn)品闡明書的格式應(yīng)符合?體外診療試劑闡明書編寫指導(dǎo)原那么?的規(guī)定，境外試劑的中文闡明書除格式規(guī)定外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文闡明書的一致性及完整性，翻譯力求精確且符合中文體現(xiàn)適應(yīng)。產(chǎn)品闡明書的全部內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的有關(guān)研究成果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，那么應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明文獻的有關(guān)信息。結(jié)合有關(guān)法規(guī)規(guī)定及流式細胞分析的特性，下面對流式細胞儀配套用檢測試劑闡明書的重點內(nèi)容作具體闡明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完畢闡明書編制。1.【產(chǎn)品名稱】單色試劑通用名稱建議采用下列命名方式：被檢標(biāo)志物名稱+檢測試劑盒〔流式細胞儀法-熒光素〕。多色試劑的命名能夠結(jié)合靶抗原、目的細胞或組織、熒光素及臨床預(yù)期用途等信息綜合進行鑒定。2.【預(yù)期用途】應(yīng)最少涉及下列幾部分內(nèi)容：〔1〕合用的樣本類型：如血液、骨髓液、其它體液或組織細胞等，并明確對所需抗凝劑的規(guī)定?！?〕待測靶抗原的特點介紹，如分子構(gòu)造、分子量、產(chǎn)生和代謝要緊途徑、體現(xiàn)細胞等?！?〕與被檢標(biāo)志物有關(guān)的臨床背景介紹、正常體現(xiàn)情形、專門體現(xiàn)的要緊疾病等?！?〕強調(diào)：實驗操作人員應(yīng)同意過流式細胞儀檢測的專業(yè)培訓(xùn)，含有有關(guān)的實驗操作資格，實驗室應(yīng)含有合理的生物安全防備設(shè)施及防護程序。3.【要緊構(gòu)成成分】〔1〕要緊是對特定熒光素標(biāo)記的單克隆抗體特點的描述，應(yīng)涉及抗體特異性〔CD標(biāo)志〕，雜交瘤細胞，免疫球蛋白特點〔Ig鏈〕，熒光激發(fā)及發(fā)射波長，偶聯(lián)的熒光素，抗體濃度以及其它非抗體成分構(gòu)成及濃度。〔2〕如涉及多個不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體，那么應(yīng)對不同的抗體分別列表詳述上述特點?！?〕建議將實驗需要但本試劑盒未提供的要緊材料進行列舉：如與之配套使用的紅細胞溶解試劑，稀釋劑，細胞/血球計數(shù)儀等。4.【儲存條件及使用期】涉及試劑盒的效期穩(wěn)固性、開封穩(wěn)固性、運輸穩(wěn)固性等有關(guān)試劑儲存的重要信息；如有必要,應(yīng)注明試劑表面變化或變質(zhì)時情形的描述及有關(guān)警示。5.【樣本規(guī)定】樣本采集和解決的目的是獲得平均的單細胞或其它生物微粒的懸液，同時必須盡量確保其活力和完整性。樣本操作不適宜過分，幸免對其構(gòu)造和抗原性造成破壞。故有關(guān)流式細胞分析而言，樣本解決對實驗成果至關(guān)重要，應(yīng)盡量減少由于樣本采集或解決不當(dāng)對實驗造成的妨礙。在產(chǎn)品闡明書中應(yīng)重點對下列內(nèi)容予以明確：〔1〕所需的樣本量、采樣辦法〔對抗凝劑或抗凝管的規(guī)定〕及樣本采集的本卷須知，盡量引述有關(guān)原則操作規(guī)程?！?〕樣本解決：溶血洗滌〔或非洗滌〕、細胞分離和提純描述、離心和固定等辦法；樣本儲存、轉(zhuǎn)運的條件和辦法?！?〕染色前穩(wěn)固性：即采樣后在合理的儲存條件下，多長時刻內(nèi)必須進行抗體標(biāo)記〔染色〕；如果不同抗凝劑樣本的穩(wěn)固時刻有差別，那么應(yīng)分別進行敘述。〔4〕染色后穩(wěn)固性：即樣本在完畢抗體標(biāo)記后至上機分析前能夠穩(wěn)固儲存的條件及期限，最佳結(jié)合染色前穩(wěn)固性的規(guī)定對上機分析前的穩(wěn)固性進行綜合敘述?！?〕幸免使用的樣本類型，如有微生物污染、乳糜、凝集或細胞活力不達原則等，在同樣情形下應(yīng)幸免使用上述樣本，除非樣本有不可替代性，那么應(yīng)闡明解決該種樣本的辦法，并應(yīng)在成果報告時明示?！?〕達成最對的染色成效所規(guī)定的目的細胞濃度、計數(shù)辦法及有關(guān)本卷須知?！?〕樣本解決過程可能對細胞活性造成一定妨礙而造成活性細胞的比例減少，如果細胞活性對實驗成果的闡明專門重要，生產(chǎn)商需提供細胞活性的評定辦法，幸免非活性細胞的非特異性結(jié)合從而妨礙檢測成果?！?〕優(yōu)化為最對的染色成效所需注意的重要信息；其它有關(guān)樣本采集、解決及儲存的本卷須知。6.【合用機型】全部合用的儀器型號，如對配套用軟件有規(guī)定也應(yīng)做闡明，并提供與儀器或軟件有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)顧客操作。7.【檢查辦法】有關(guān)流式細胞分析而言，實驗操作環(huán)節(jié)對實驗成果的妨礙至關(guān)重要，因此，應(yīng)具體闡明達成最對的染色成效的實驗操作各個環(huán)節(jié)，涉及：〔1〕試劑使用條件：溫度/濕度條件〔如有必要〕、試劑用量、染色時刻、與否需無菌操作等?！?〕簡述實驗開始前流式細胞儀的設(shè)立辦法，校準(zhǔn)及質(zhì)控程序?！?〕具體敘述實驗操作環(huán)節(jié)、本卷須知。如對比的設(shè)定方式及類別〔同型陰性對比、陽性對比、正常人血細胞對比等〕，設(shè)門辦法舉例及代表性數(shù)據(jù)圖示；靶細胞分類計數(shù)的辦法及環(huán)節(jié)、運算公式以及有關(guān)本卷須知?！?〕校準(zhǔn)：合用校準(zhǔn)品的生產(chǎn)公司、產(chǎn)品名稱及貨號等具體信息，校準(zhǔn)品的使用辦法、舉薦的校準(zhǔn)周期及有關(guān)本卷須知?！?〕質(zhì)量操縱：合用質(zhì)控品的生產(chǎn)公司、產(chǎn)品名稱及貨號等具體信息，如果質(zhì)控品和病人樣本的使用辦法不同，生產(chǎn)商應(yīng)注明必要的指導(dǎo)和闡明。建議在質(zhì)量操縱環(huán)節(jié)注明下列字樣：〝如果質(zhì)控成果與預(yù)期不符，實驗室應(yīng)重復(fù)實驗以確保成果的可靠性。如不能獲得可靠性成果，那么不應(yīng)出具檢測報告。〞實驗室應(yīng)負(fù)責(zé)質(zhì)量操縱失敗的解決方案。8.【參考值〔參考范疇〕】應(yīng)注明待測標(biāo)記細胞或分子在慣用樣本類型的正常參考值〔范疇〕，簡樸介紹設(shè)定該參考值〔范疇〕所選健康人群的特點，如有必要，需對不同年紀(jì)段人群、不同性別或含有明確地理差別人群的參考值分別進行詳述。建議注明下列字樣〝由于地理、人種、性別及年紀(jì)等差別，建議各實驗室建立自己的參考值〔范疇〕〞。9.【檢查成果的闡明】由于流式細胞儀分析技術(shù)的專業(yè)性較強，檢測過程中的妨礙因素較多且同一分析目的在不同人群的體現(xiàn)復(fù)雜多樣，因此，流式細胞檢測的數(shù)據(jù)分析、成果闡明和出具臨床報告經(jīng)常含有較大的挑戰(zhàn)性，成果闡明不當(dāng)可能對病人的診治造成專門大妨礙。建議負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)闡明和出具報告的實驗人員需通過正規(guī)的技術(shù)培訓(xùn)且有一定的臨床體會，兩者結(jié)合有助于對實驗數(shù)據(jù)做出合理的醫(yī)學(xué)闡明。產(chǎn)品闡明書中的本部分內(nèi)容應(yīng)對上述情形進行必要的建議，還應(yīng)對設(shè)門辦法、數(shù)據(jù)分析、專門值解決、臨床有關(guān)提示等內(nèi)容做出合明白得釋。10.【檢查辦法局限性】〔1〕本試劑盒的檢測成果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反映等情形綜合考慮?！?〕使用該試劑的其它限制，如樣本、儲存辦法、儲存時刻，專門患者可能顯現(xiàn)的不對的成果，儀器設(shè)立不當(dāng)?shù)姆恋K等?！?〕與否與經(jīng)其它試劑或儀器獲得的同類數(shù)據(jù)具直截了當(dāng)可比性。11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述下列性能指標(biāo)：〔1〕周密度：簡要闡明周密度評判的辦法，建議以列表的方式列出批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、運行內(nèi)/運行間周密度等信息，以原則差〔SD〕和變異系數(shù)〔CV〕的形式表達周密度研究成果。〔2〕線性：涉及細胞計數(shù)濃度范疇和待測目的物陽性細胞比例濃度范疇兩類，申請人應(yīng)對適于待測標(biāo)記物的最少一種指標(biāo)進行合理驗證，簡要注明實驗辦法、所用儀器及軟件等信息。〔3〕對比實驗研究：簡要介紹參比試劑〔辦法〕的信息、所采納的統(tǒng)計學(xué)辦法及統(tǒng)計分析成果、圖示?！?〕分析特異性：有關(guān)交叉反映和干擾因素的驗證信息或風(fēng)險分析。如：對溶血、高脂、黃疸等內(nèi)源性干擾因子的濃度限值規(guī)定，樣本中可能存在某些內(nèi)生物質(zhì)與待測抗原有相似化學(xué)構(gòu)造或抗原表位，如本身抗體、蛋白、激素或近期服用的某些藥品〔如生物制劑〕，這些物質(zhì)可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反映而妨礙檢測成果，如未進行有關(guān)研究也應(yīng)提供有關(guān)警示闡明。12.【本卷須知】應(yīng)最少涉及下列內(nèi)容：〔1〕生物安全性警告：接觸到的臨床樣本、質(zhì)控/校準(zhǔn)品、實驗廢棄物等材料應(yīng)當(dāng)作為潛在傳染物進行解決，同時采納符正當(dāng)規(guī)的防止方法對其解決?！?〕有關(guān)儀器設(shè)立的警示，如：流式細胞儀未經(jīng)對的校準(zhǔn)、熒光滲漏未行合理賠償以及檢測區(qū)域〔設(shè)門〕未精擬定位，那么可能產(chǎn)生錯誤的檢測成果。〔3〕有關(guān)試劑預(yù)備的本卷須知：如冷藏避光儲存、切勿冷凍、使用前復(fù)原室溫等。〔4〕針對某些白細胞濃度過高或過低的情形，在樣本解決時需采納的專門解決方式，如血樣稀釋或細胞濃縮等操作?！?〕試劑專門成分或操作使用試劑危害性的警告及本卷須知：如疊氮化鈉、甲醛等；使用不當(dāng)?shù)慕鉀Q方式?！?〕確保明驗成果精確的其它操作本卷須知?！踩硵M定產(chǎn)品原則及編制闡明擬定產(chǎn)品原則應(yīng)符合?辦法?和?體外診療試劑注冊申報資料差不多規(guī)定?的有關(guān)規(guī)定。另外，有關(guān)國產(chǎn)第三類體外診療試劑，應(yīng)參考?中國生物制品規(guī)程?〔〕，將擬申報產(chǎn)品的要緊原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于原則正文后，并在正文的〝產(chǎn)品分類〞項中引出該附錄內(nèi)容。該類產(chǎn)品注冊檢測的技術(shù)規(guī)定要緊涉及：精確度、線性、周密度、染色穩(wěn)固性等有關(guān)指標(biāo)，具體規(guī)定的設(shè)立應(yīng)參考有關(guān)的國家/行業(yè)原則〔如有〕執(zhí)行，公司原則規(guī)定不得低于國家/行業(yè)原則規(guī)定。〔四〕注冊檢測有關(guān)初次注冊產(chǎn)品，申請人擬定申報產(chǎn)品的產(chǎn)品原則后，應(yīng)當(dāng)在國家食品藥品監(jiān)督治理局承認(rèn)的、含有對應(yīng)承檢范疇的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行持續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。有關(guān)差不多有國家參考品的流式細胞檢測項目，在注冊檢測時應(yīng)采納對應(yīng)的國家參考品進行,有關(guān)現(xiàn)在尚無國家參考品的項目，生產(chǎn)公司應(yīng)建立自己的質(zhì)控體系并提供對應(yīng)的內(nèi)部參考品?！参濉骋o原材料研究資料應(yīng)提供要緊原材料如單克隆抗體、標(biāo)記熒光素的選擇、來源、制備過程、質(zhì)量原則和質(zhì)檢報告等研究資料。假設(shè)要緊原材料為公司自行生產(chǎn)，那么應(yīng)詳述原材料〔要緊是單克隆抗體〕的制備及生產(chǎn)過程、雜交瘤細胞的選擇、技術(shù)指標(biāo)、質(zhì)量操縱、國際有關(guān)權(quán)威機構(gòu)〔如國際人類白細胞分化抗原協(xié)作組織，HLDA〕的認(rèn)證情形〔如有〕等；如要緊原材料來自外購，那么應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的有關(guān)單克隆抗體和/或雜交瘤細胞的性能分析或檢查證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的規(guī)定以及申請人擬定該抗體作為要緊原材料的根據(jù)。對熒光染色辦法、染料選擇根據(jù)、標(biāo)記熒光穩(wěn)固性，多色標(biāo)記中熒光的交叉重疊驗證等研究。質(zhì)控品、校準(zhǔn)品原料選擇、制備、定值過程及實驗資料；校準(zhǔn)品溯源性文獻等?！擦骋o生產(chǎn)工藝及反映體系的研究資料1、生產(chǎn)工藝的研究資料要緊包含：〔1〕要緊生產(chǎn)工藝介紹，能夠圖表方式〔工藝流程圖〕表達?！?〕生產(chǎn)工藝中核心環(huán)節(jié)的質(zhì)量操縱規(guī)定及質(zhì)控辦法。〔3〕生產(chǎn)商所采納的生產(chǎn)工藝和辦法的驗證資料。2、反映體系的研究資料要緊包含：〔1〕反映原理介紹?！?〕產(chǎn)品闡明書中描述的所選反映條件各環(huán)節(jié)的分析性能數(shù)據(jù)，例如需要的樣本體積，樣本的解決、儲存時刻，反映時刻、溫度的擬定，抗體的用量〔重要〕，與否需反向加樣、溶血/洗滌操作，去除干擾等?！?〕應(yīng)闡明配合該產(chǎn)品所使用的分析辦法并進行驗證，如不同平臺辦法、不同軟件分析、操作本卷須知等。〔4〕不同合用機型的反映條件如果有差別應(yīng)分別詳述?！?〕質(zhì)量操縱：同型陰性對比、正常成人樣本對比、商業(yè)化陽性質(zhì)控品、熒光信號與散射光結(jié)合對各細胞群確實認(rèn)等?！财摺撤治鲂阅茉u定資料申請人應(yīng)提交公司在產(chǎn)品研制或成品驗證時期對試劑盒進行的全部性能驗證的研究資料，有關(guān)每項性能的評判，都應(yīng)涉及研究目的、實驗設(shè)計、可同意原則、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計辦法等具體資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，涉及實驗地點〔實驗室〕、合用儀器、所用軟件、臨床樣原來源等。對用于多色流式細胞分析的試劑〔如CD3/CD4/CD8淋巴細胞亞群檢測試劑〕，其待測每個指標(biāo)〔如CD3、CD4和CD8三個指標(biāo)〕及要緊組合形式的全部分析性能均應(yīng)分別進行有關(guān)的驗證。分析性能評判的實驗辦法能夠參考有關(guān)的CLSI-EP文獻或國內(nèi)有關(guān)體外診療產(chǎn)品性能評定的文獻進行。1.精確度對測量精確度的評判要緊涉及：與國標(biāo)品〔和/或國際原則品〕的偏差分析和辦法學(xué)比對兩種辦法，公司可根據(jù)實際情形選擇合理辦法進行研究?！?〕國家〔國際〕原則品的檢測及偏倚情形如果研究項目有對應(yīng)國家〔國際〕原則品，那么使用國家〔國際〕原則品進行驗證，重點觀看對對應(yīng)原則品檢測成果的偏差情形。〔2〕辦法學(xué)比對采納國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比辦法，與擬申報試劑同時檢測一批樣品，從測定成果間的差別理解擬申報試劑與參比辦法間的偏倚。如偏倚專門小或在承諾的誤差范疇內(nèi)，闡明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定成果差不多相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)闡明，擬申報試劑與參比辦法相比可不能產(chǎn)生差別成果。辦法學(xué)比對時，公司應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行申報試劑和參比試劑產(chǎn)品闡明書的規(guī)定，著重注意質(zhì)量操縱、樣本采集及解決、實驗參數(shù)設(shè)立等事項；濃度分布范疇及可同意原則、合理的統(tǒng)計學(xué)分析等要素均應(yīng)在注冊文獻中予以闡明。2.周密度：周密度是指在規(guī)定的檢測條件下，互相獨立的測試成果間的一致程度，本類試劑的周密度評判要緊考慮細胞計數(shù)成果和熒光強度兩方面。建議采納多個水平的質(zhì)控物質(zhì)用于細胞計數(shù)周密度的評判，各個濃度均應(yīng)在試劑盒的線性范疇內(nèi)且有一定的臨床意義〔醫(yī)學(xué)決定水平〕，普通涉及該檢測指標(biāo)的正常范疇、專門低值和高值樣本。公司可根據(jù)不同情形，采納質(zhì)控品、特定細胞株、正?；?qū)ｉT人群樣原來做周密度評定。有關(guān)質(zhì)控品或校準(zhǔn)品的周密度評判，應(yīng)涉及其全部質(zhì)控或校準(zhǔn)項目，如熒光信號及散射光規(guī)定等。在進行周密度評判時，除申報試劑本身的妨礙外，還應(yīng)對操作者、合用機型、不同軟件及實驗地點等要素進行有關(guān)的驗證。公司應(yīng)制訂合理的周密度評判方案，例如：在每個合用機型上進行最少20天〔工作日〕的持續(xù)檢測，每天最少由2人完畢許多于2次的完整運行，每天內(nèi)兩次運行間的時刻間隔許多于3小時，從而對批內(nèi)/批間、日間、運行內(nèi)/運行間、不同操作者間的周密度以及各變量綜合的總周密度進行評判。3.線性范疇：本類產(chǎn)品線性要緊涉及稀釋細胞濃度范疇和標(biāo)記抗體陽性細胞的百分率范疇兩種線性范疇。公司可根據(jù)實際需要及以往的研究適應(yīng)自行選擇其中一種對線性的規(guī)定進行驗證。公司應(yīng)對每個測量參數(shù)建立合理的線性范疇，在建立一種參數(shù)的線性范疇時，應(yīng)當(dāng)盡量將預(yù)期測定范疇加寬，在合理范疇內(nèi)選擇7-11個濃度水平，每個水平2-4份復(fù)制液，取每個濃度水平重復(fù)測量的均值用于線性回來分析，根據(jù)實驗成果逐步減少數(shù)據(jù)點直至體現(xiàn)出最寬的線性范疇，如采納回來辦法統(tǒng)計線性分析的成果，那么擬合回來直線的鑒定系數(shù)〔R2〕應(yīng)不不大于0.95。建立稀釋細胞濃度線性范疇時，所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡量與臨床實際檢測的樣本相似，建議采納混合血漿或自體血漿進行稀釋，同時應(yīng)考慮多倍稀釋可能造成的基質(zhì)效應(yīng)。有關(guān)標(biāo)記抗體陽性細胞百分率的線性范疇，建議公司選擇經(jīng)確認(rèn)的陽性細胞株和陰性細胞株按照恒定的細胞總數(shù)將兩種細胞進行不同比率的混合，陽性細胞數(shù)與陰性細胞數(shù)比例能夠從0%到100%不等，從而確認(rèn)合理的有關(guān)陽性細胞百分率的線性范疇。4.分析特異性〔1〕采納多個辦法對申報抗體與靶抗原結(jié)合的特異性驗證研究，如采納競爭性克制法、抗體與抗原純品的結(jié)合研究、免疫印跡技術(shù)或胞膜抗原的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)等辦法對抗原抗體結(jié)合的特異性進行有關(guān)的驗證；有關(guān)靶抗原的細胞或組織分布特異性的研究，如抗體與不同細胞系的反映譜等?！?〕交叉反映性：通過實驗或風(fēng)險分析驗證所申報單克隆抗體除與目的抗原的結(jié)合外，與否與樣本中可能存在其它內(nèi)生或外源物質(zhì)發(fā)生交叉反映，如：與待測抗原有相似化學(xué)構(gòu)造或抗原表位的蛋白、激素或近期服用的某些藥品等?！?〕干擾：本處所指的干擾是指通過生產(chǎn)商指定的樣本解決辦法后，檢測時與否還存在其它妨礙成果的干擾因素或干擾物質(zhì)。如有，生產(chǎn)商應(yīng)進行闡明并驗證〔使用醫(yī)學(xué)有關(guān)水平的干擾物濃度進行驗證〕；另外，亦建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(〝最差條件〞)條件下進行評判?！舶恕硡⒖贾怠卜懂牎硵M定資料研究資料應(yīng)具體描述用于參考值〔范疇〕擬定健康人群的地區(qū)、年紀(jì)、性別等特點，并對統(tǒng)計分析辦法進行具體闡明。能夠參考國內(nèi)或國際有關(guān)參考值〔范疇〕制訂的指南文獻舉薦的辦法進行。不同種族、年紀(jì)或性別人群如有明顯差別應(yīng)分別進行有關(guān)的統(tǒng)計分析并設(shè)立不同的參考值〔范疇〕?！簿拧撤€(wěn)固性研究資料穩(wěn)固性研究資料要緊涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)固性和合用樣本的穩(wěn)固性研究。前者要緊涉及實時穩(wěn)固性〔使用期〕、高溫加速破壞穩(wěn)固性、運輸穩(wěn)固性以及開瓶穩(wěn)固性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)固性研究方案。穩(wěn)固性研究資料應(yīng)涉及研究辦法的擬定根據(jù)、具體的實施方案、具體的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。有關(guān)實時穩(wěn)固性研究，應(yīng)提供最少三批樣品在實際儲存條件下儲存至成品使用期后的研究資料。樣本穩(wěn)固性要緊考慮染色前和染色后穩(wěn)固性，前者是指樣本采集后至染色〔標(biāo)記〕前的穩(wěn)固性，后者是指染色〔標(biāo)記〕后到上機分析前的穩(wěn)固性。樣本染色前、染色后穩(wěn)固性需結(jié)合試劑的穩(wěn)固性研究綜合進行考慮，建議在試劑實時〔效期〕穩(wěn)固性的終止日期后開展樣本穩(wěn)固性的研究，如此能夠代表最差條件的穩(wěn)固性。能夠在合理的溫度范疇內(nèi)選擇多個時刻點，每間隔一定的時刻段對采集樣本或標(biāo)記后樣本進行陽性細胞比例〔或絕對數(shù)〕及熒光強度變化率的分析驗證，從而確認(rèn)樣本染色前和染色后的合理儲存條件和使用期。試劑穩(wěn)固性和樣本穩(wěn)固性兩部分內(nèi)容的研究成果均應(yīng)在闡明書【儲存條件及使用期】和【樣本規(guī)定】兩項中進行具體闡明?！彩撑R床實驗研究1.樣本例數(shù)考慮到流式細胞儀配套用檢測試劑種類繁多、臨床用途廣泛但要緊原材料、生產(chǎn)工藝及檢測原理等專門相似的特點，該類試劑臨床實驗研究的總樣本數(shù)為許多于500例。2.臨床研究單位的選擇流式細胞儀配套用檢測試劑的臨床研究應(yīng)在三家以上〔含三家〕省級醫(yī)療衛(wèi)生單位進行，有關(guān)專門使用目的產(chǎn)品能夠在對應(yīng)的市級以上?？漆t(yī)院或其它診療機構(gòu)開展臨床研究。建議在國內(nèi)不同都市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地區(qū)代表性；臨床研究單位須含有流式細胞儀專業(yè)的技術(shù)人員及對應(yīng)的儀器設(shè)備，確保該項研究的實施。實驗操作人員應(yīng)有足夠的時刻熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)〔儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等〕，熟悉評判方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處在有效的質(zhì)量操縱下，定時對儀器進行校準(zhǔn)，最大程度確保明驗數(shù)據(jù)的精確性及可重復(fù)性。流式細胞儀檢測的專業(yè)性較強，實驗操作人員須同意過流式細胞儀技術(shù)的專業(yè)培訓(xùn)，并通過考核合格后上崗，含有實驗室檢測和臨床病情相結(jié)合的流式細胞儀有關(guān)的檢測體會。3.研究辦法〔1〕境內(nèi)已有同類試劑同意上市產(chǎn)品的臨床研究：選擇中國境內(nèi)已同意上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采納擬申報產(chǎn)品〔下列稱考核試劑〕與之進行對比實驗研究，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。〔2〕境內(nèi)尚無同類試劑同意上市的產(chǎn)品臨床研究：能夠選擇國外已上市、普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采納考核試劑與之進行對比實驗研究，證明本品與對比試劑等效或優(yōu)于對比試劑。同時，還應(yīng)結(jié)合每個患者的臨床病情對申報試劑的檢測成果進行綜合鑒定，如有必要，需對研究對象進行有關(guān)的跟蹤監(jiān)測研究，以綜合評判申報試劑的檢測成果，驗證其與臨床病情的一致性。4.實驗方案臨床實驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢查醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)立應(yīng)差不多一致，且確保在整個臨床實驗過程中遵照預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。擬定嚴(yán)格的病例納入/排除原則，任何差不多入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)統(tǒng)計在案并明確闡明緣故。整個實驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完畢，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，專門是數(shù)據(jù)收集過程。5.臨床病例選擇絕大多數(shù)采納流式細胞儀辦法檢測的血細胞或組織細胞抗原有關(guān)疾病診療的敏捷度和特異性較低，與器官/組織定位、疾病良惡性分辨以及與病情的進展程度雖有一定關(guān)聯(lián)但多無明確的量值-病情有關(guān)關(guān)系，并且，多數(shù)情形下，該類試劑在用于病變的診療時需要多個標(biāo)記物組合檢測才干體現(xiàn)其臨床意義。因此，在進行臨床研究時，除有針對性選擇目的性較強的病例外，還應(yīng)選擇部分其它有關(guān)的抗原體現(xiàn)類似或需鑒別診療的病例。臨床研究實驗中應(yīng)涉及對部分來自健康人群的樣本作為正常對比。驗證試劑的正常參考值〔范疇〕，比較正常組和疾病構(gòu)成果，方便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出全方面分析。建議對健康人群例數(shù)的選擇以不超出120例為宜。有關(guān)臨床意義有待明確或發(fā)病率極低〔陽性樣本較難獲得〕的試劑，可適宜增加正常樣本數(shù)。不管是健康人群或不同病種的患者，每一組受試者的最小入選人數(shù)均須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的差不多規(guī)定。6.成果差別樣本的驗證數(shù)據(jù)分析時，有關(guān)兩種試劑的檢測成果有明顯差別或與臨床方案中的原則顯現(xiàn)偏差的樣本，臨床實驗研究人員應(yīng)對差別緣故進行合理分析，涉及樣本解決、檢測操作、設(shè)門/分析過程中可能顯現(xiàn)的干擾或錯誤，差別樣本亦可能由于樣本的個體差別所致。如果經(jīng)綜合分析無法確認(rèn)差別緣故，且偏差樣本有統(tǒng)計學(xué)意義，那么應(yīng)進行必要的重復(fù)檢測并采納公認(rèn)的〝金原則〞辦法或第三方試劑進行復(fù)核。7.統(tǒng)計辦法：對臨床實驗成果的統(tǒng)計應(yīng)選擇適宜的統(tǒng)計辦法，如有關(guān)分析、線性回來、生存分析、ROC曲線分析等。有關(guān)對比實驗的等效性研究，最慣用是對實驗試劑和對比試劑的兩組檢測成果的有關(guān)及線性回來分析，如合用，應(yīng)重點觀看有關(guān)系數(shù)〔r值〕或鑒定系數(shù)〔R2〕、回來方程斜率〔b〕及y軸截距〔a〕等指標(biāo)。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢查假設(shè)，即評判實驗試劑與對比試劑與否等效的原則。8.臨床實驗成果報告根據(jù)?體外診療試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原那么?的規(guī)定，臨床實驗報告應(yīng)當(dāng)對實驗的整體設(shè)計及各個核心點予以清晰、完整的敘述，應(yīng)當(dāng)對整個臨床實驗實施過程、成果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)涉及必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析辦法。建議在臨床總結(jié)報告中對下列內(nèi)容進行詳述?！?〕臨床實驗總體設(shè)計及方案描述=1\*GB3①臨床實驗的整體治理情形、臨床研究單位選擇、臨床要緊研究人員介紹等差不多情形介紹。=2\*GB3②病例納入/排除原則、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)及健康人群的選擇原則。=3\*GB3③樣本類型，樣本的收集、解決及儲存等。=4\*GB3④統(tǒng)計學(xué)辦法、統(tǒng)計軟件、評判統(tǒng)計成果的原則?！?〕具體的臨床實驗情形=1\*GB3①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、使用期及所用機型等信息；考核試劑該批次自檢或經(jīng)其它機構(gòu)檢測合格情形；參比試劑的境內(nèi)外同意情形等信息。=2\*GB3②對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情形進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及比例。=3\*GB3③質(zhì)量操縱，實驗人員培訓(xùn)、儀器日常愛惜、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情形，對檢測周密度、質(zhì)控品回收〔或測量值〕、抽查成果評定。=4\*GB3④具體實驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長久儲存、成果不一致樣本的校驗等?！?〕統(tǒng)計學(xué)分析=1\*GB3①數(shù)據(jù)預(yù)解決、差別數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及與否納入最后數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對專門值或缺失值的解決、研究過程中與否涉及對方案的修改。=2\*GB3②有關(guān)性和一致性分析能夠采納線性回來的方式驗證兩種試劑成果的有關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式列出回來分析的擬合方程，其中：y是考核試劑成果，x是參比試劑成果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是鑒定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%〔或99%〕置信區(qū)間，定量值成果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差別。另外考慮到某些檢測指標(biāo)在不同的樣本濃度區(qū)間、不同年紀(jì)段人群或不同疾病來源的樣本可能有較明顯的差別，因此，如有必要，建議以上述有關(guān)要素為根據(jù)分組并對各組數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計分析，以更加好的驗證兩種試劑的有關(guān)性?！?〕討論和結(jié)論對總體成果進行總結(jié)性描述并簡要分析實驗成果，對本次臨床研究有無專門闡明，最后得出臨床實驗結(jié)論。

四、名詞闡明1.精確度〔accuracy〕：一種測量值與可同意的參考值間的一致程度。2.周密度〔precision〕：在規(guī)定條件下，互相獨立的測試成果之間的一致程度。周密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)辦法得到的測量不周密度的數(shù)字形式表達，如原則差〔SD〕和變異系數(shù)〔CV〕。3.線性〔linearity〕：在給定測量范疇內(nèi)，給出的測量成果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一種測量系統(tǒng)的測量示值或測量成果相有關(guān)樣本的賦值符合直線的屬性。4.分析特異性〔analyticalSpecificity〕：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其它物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。普通以一種被評定的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)有關(guān)濃度值水平的分析干擾程度〔潛在干擾物涉及干擾物和交叉反映物〕。

五、參考文獻：1.?體外診療試劑注冊治理辦法〔試行〕?〔國食藥監(jiān)械[]229號〕。2.?體外診療試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原那么?〔國食藥監(jiān)械[]240號〕。3.?體外診療試劑闡明書編寫指導(dǎo)原那么?〔國食藥監(jiān)械[]240號〕。4.EP9-A2：MethodComparisona