3種采毛方式對長毛兔血清酶活性的影響

3種采毛方式對長毛兔血清酶活性的影響

毛兔子主要用于生產(chǎn)兔子的毛發(fā)，毛頭采集是水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要組成部分。目前,長毛兔采毛方式主要有刀剪毛、直接拔毛、藥物拔毛3種。不同采毛方式對產(chǎn)毛量、粗毛率等生產(chǎn)性狀的影響有一定差異,同時作為應(yīng)激源不同程度地?fù)p害兔體健康。刀剪毛留有一定長度的毛茬,其產(chǎn)毛量比拔毛要低,剪毛較少損傷皮膚,比拔毛對兔體造成的傷害和應(yīng)激要小。拔毛可以提高長毛兔產(chǎn)毛量,同時拔毛刺激了初級毛囊的發(fā)育和部分次級毛囊的擴(kuò)張,提高了粗毛比例。拔毛使得兔毛長度、整齊度等較好,等級較高,其價(jià)格也高于剪毛,很多養(yǎng)殖戶采用拔毛方式。然而拔毛對兔傷害相對較大,據(jù)國家兔體系2012年安徽省養(yǎng)兔情況調(diào)查發(fā)現(xiàn),拔毛引起的年死亡率可高達(dá)20%~30%,在炎熱和寒冷季節(jié),兔發(fā)病率和死亡率更高。究其原因可能是拔毛應(yīng)激造成長毛兔皮膚機(jī)械損傷和驚嚇,兔體內(nèi)分泌失調(diào),血液內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化,組織器官功能出現(xiàn)異常,免疫力下降,從而導(dǎo)致疾病發(fā)生。應(yīng)激較大和抗病力較弱的長毛兔,可能繼發(fā)其他疾病,甚至死亡。血液生化指標(biāo)水平反映了動物健康狀況,應(yīng)激因素可通過影響動物血液生化水平而產(chǎn)生應(yīng)激表征和疾病。然而迄今為止,長毛兔采毛方式應(yīng)激的血液生化機(jī)制的研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。皖系長毛兔是我國第一個粗毛型長毛兔新品種,由安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所經(jīng)20多年系統(tǒng)選育而成。皖系長毛兔體型中等,生產(chǎn)性能優(yōu)良,其采毛方式不限,可剪可拔,適應(yīng)性強(qiáng)。本研究擬通過不同采毛方式下對皖系長毛兔血液生化指標(biāo)影響的研究,初步揭示采毛應(yīng)激的生化機(jī)制,為針對性地做好采毛后護(hù)理、減少采毛應(yīng)激、降低采毛后發(fā)病率和死亡率,同時也為初步篩選較優(yōu)的采毛方式提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1試驗(yàn)兔的飼養(yǎng)選用年齡、體重相近,健康皖系長毛兔成年母兔30只,隨機(jī)分為3組,每組10只,預(yù)飼1周。養(yǎng)毛周期結(jié)束時,3個處理組分別采用剪毛(A組)、直接拔毛(B組)、喂藥拔毛(C組)方式采毛。A組兔毛剪光,B、C兩組半拔毛方式采毛(留頭毛、背毛、腿毛),C組拔毛前12h飼喂0.75mg地塞米松片。所有試驗(yàn)兔均飼養(yǎng)于安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)所皖系長毛兔原種場,飼養(yǎng)管理?xiàng)l件和飼料營養(yǎng)水平相同,單籠飼養(yǎng),定量采食,自由飲水。在試驗(yàn)兔采毛前、采毛后0h、4h、8h、24h、48h用真空采血管(不含抗凝劑)進(jìn)行耳緣靜脈采血,每次約5mL,4℃冷藏過夜后2500r/min離心10min,然后小心吸取上層血清分裝到1.5mL滅菌離心管,保存于-20℃,備用。1.2方法1.2.1健康記錄1.2.2抗氧化指標(biāo)測定選用的8個血液生化指標(biāo)及其測定方法分別如下:GLU采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法,CHO采用膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法,TG采用磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法,ALP采用對硝基酚磷酸鹽連續(xù)監(jiān)測法,LDH采用L-P法,ALT、AST、CK均采用酶學(xué)速率法進(jìn)行測定。定量測定試劑盒均購自南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司,指標(biāo)測定均使用D240全自動生化分析儀(神州英諾華,南京),按試劑盒說明操作。測定前使用朗道控制血清水平2(RAN-DOX,UK)對儀器和指標(biāo)分別進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)控,每份樣品同一指標(biāo)測定均設(shè)定3個重復(fù)。1.2.3多重比較分析對儀器分析產(chǎn)生數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)并剔除異常數(shù)據(jù),然后進(jìn)行單因素方差分析,多重比較采用Duncan法,當(dāng)P<0.05時差異顯著,結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析使用SAS9.1。2結(jié)果與分析2.1般情況測試采毛前,各組兔精神狀態(tài)良好,活潑,眼睛有神,開籠門兔即在籠內(nèi)轉(zhuǎn)圈,后肢活動有力;采食、飲水正常;各組兔精神良好,表現(xiàn)健康,無異常。采毛后,剪毛組采食量無明顯變化,而且無明顯異常表現(xiàn)。兩拔毛組長毛兔拔毛當(dāng)天幾乎都食欲廢絕,少量飲水;第2天少量采食,直到第3~4天才基本恢復(fù)食欲;活動減少,常呆立不動,被抓時極度驚恐。各種采毛應(yīng)激均未造成試驗(yàn)兔死亡,而且試驗(yàn)過后食欲更加旺盛。2.2指標(biāo)的生化指標(biāo)2.2.1glu、ca水平由表1和圖1可知,剪毛組血清GLU水平雖然在剪毛后8h和24h均顯著高于48h(P<0.05),但采毛后各時間均與剪毛前無顯著差異(P>0.05)。直接拔毛組拔毛后GLU即顯著上升,達(dá)3組峰值,4h恢復(fù)到拔毛前水平(P>0.05),8h又有明顯上升,24h后重新恢復(fù)到拔毛前水平。喂藥組GLU水平在拔毛后即顯著上升,8h達(dá)峰值,而24h下降到拔毛前水平;48h雖與24h無差異,卻稍高于拔毛前(P<0.05)。采毛前喂藥組GLU即顯著低于剪毛組(P<0.05);直接拔毛組采毛后即顯著高于剪毛組和喂藥組(P<0.05);而后,除24h剪毛組與喂藥組有差異外(P<0.05),其他時刻3組間均無差異(P>0.05)。剪毛組、直接拔毛組血清CHO水平在采毛后4h即顯著降低,直到48h時還未恢復(fù)。而喂藥組采毛后兩天內(nèi)CHO水平都無明顯變化。除采毛前和采毛后0h喂藥組CHO顯著低于剪毛組、直接拔毛組外,而后3組間趨于一致。剪毛組、直接拔毛組血清TG水平采毛前后均無明顯變化,而喂藥組采毛后即開始上升,4h明顯上升(P<0.05),8h達(dá)峰值,而后下降,到48h恢復(fù)到采毛前水平;采毛前和采毛后48h時3組間無顯著差別,其他時刻喂藥組TG值均顯著高于其他兩組(P<0.05)。2.2.2各組單次采毛后24h的采動過程5個血清酶活性指標(biāo)變化結(jié)果如表2和圖2。對于ALP,3組變化相似,采毛后均呈持續(xù)下降趨勢,8h均顯著低于采毛前水平(P<0.05),之后保持穩(wěn)定,3組直到48h也未恢復(fù)到采毛前水平(P<0.05)。3組間各時刻均無明顯差異(P>0.05)。對于LDH,剪毛組采毛后即顯著上升,8h即恢復(fù)到采毛前水平。直接拔毛組拔毛后4h內(nèi)升高明顯,而8h內(nèi)即恢復(fù)。喂藥組拔毛后即顯著升高達(dá)3組峰值(P<0.05),但4h內(nèi)即恢復(fù)到采毛前水平,8h內(nèi)迅速下降。剪毛與直接拔毛兩組間采毛前后均無明顯差異,而喂藥組采毛前、后均顯著高于其他兩組(P<0.05),到4h3組間無差異(P>0.05);8~48h剪毛組與兩個拔毛組之間均無顯著差異(P>0.05),而直接拔毛組均高于喂藥組(P<0.05)。對于ALT,剪毛組采毛后24h無明顯變化,而48h時顯著高于采毛前(P<0.05)。直接拔毛組拔毛后4h內(nèi)無明顯變化,而8~48h均高于采毛前水平(P<0.05)。喂藥組拔毛后4h顯著高于采毛前水平(P<0.05),而后出現(xiàn)波動,但48h時恢復(fù)到采毛前水平。采毛后4h喂藥組均高于直接拔毛組(P<0.05)和剪毛組(P>0.05),48h剪毛組顯著高于喂藥組(P<0.05),其他時間3組均無顯著差異(P>0.05)。對于AST,剪毛組采毛后有所上升,8h時高于采毛前水平(P<0.05)。直接拔毛組和喂藥組變化相似,均先上升并分別在4h和采毛后顯著高于采毛前水平(P<0.05),后下降并分別在24h、48h恢復(fù)到采毛前水平。3組在采毛前無明顯差異(P>0.05),采毛后48h差異不顯著且均恢復(fù)到采毛前水平,但采毛后4~24h拔毛兩組AST水平顯著高于剪毛組,拔毛兩組變化較剪毛組劇烈。對于CK,剪毛組采毛后即明顯上升,24h達(dá)峰值,48h恢復(fù)。直接拔毛組拔毛后4h開始顯著上升,24h達(dá)峰值,而后顯著下降,但48h還沒恢復(fù)到采毛前水平。喂藥組采毛后急劇上升(P<0.05),而后立即下降,4h即恢復(fù)到采毛前水平。采毛前喂藥組顯著高于剪毛組(P<0.05),而直接拔毛組與其他兩組均差異不顯著(P>0.05);采毛后喂藥組即顯著高于其他兩組(P<0.05),但4h開始喂藥組與剪毛組無明顯差異(P>0.05);而直接拔毛組4h后均高于其他兩組,4h顯著高于喂藥組(P<0.05),8h、24h顯著高于其他兩組(P<0.05),兩拔毛組峰值遠(yuǎn)高于剪毛組,變化比剪毛組劇烈。3討論3.1拔毛兔的應(yīng)激應(yīng)激是動物機(jī)體在受到外界異常刺激時所作出的一系列非特異的適應(yīng)性和防御性應(yīng)答反應(yīng)。家兔具有膽小怕驚的生物學(xué)特性,而采毛過程由于涉及保定、剪毛或拔毛導(dǎo)致的不適或疼痛,以及皮膚微循環(huán)出血等,因而對長毛兔造成不同程度的應(yīng)激。長毛兔在拔毛后常表現(xiàn)出食欲減退、精神沉郁、生理機(jī)能紊亂等癥狀,嚴(yán)重時可導(dǎo)致死亡。本研究發(fā)現(xiàn)長毛兔采毛后表現(xiàn)不同程度的應(yīng)激現(xiàn)象。剪毛兔應(yīng)激較小,僅剪毛當(dāng)天食欲稍有下降,而且少有異常表現(xiàn)。兩組拔毛兔拔毛當(dāng)天幾乎都食欲廢絕,第2天僅少量采食,直到第3~4天才基本恢復(fù)食欲;活動減少,極度驚恐;甚至少數(shù)長毛兔有干糞和拉稀現(xiàn)象;不過,各種采毛方式應(yīng)激均未造成試驗(yàn)兔死亡,而且試驗(yàn)過后的觀察發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)用兔比未采毛兔食欲更加旺盛,這可能是由于采毛后兔體毛囊重建、處于生長期和拔毛應(yīng)激后的補(bǔ)償效應(yīng),也與試驗(yàn)后良好護(hù)理有關(guān)。3.2應(yīng)激對德系長毛兔血清生化指標(biāo)的影響血液是動物體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分,血液成分的變化反映了機(jī)體的健康狀況。應(yīng)激因素顯著影響動物血液生化指標(biāo)。文鳳云等研究了高溫對獺兔血液生化指標(biāo)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn):高溫導(dǎo)致血清葡萄糖、甘油三酯含量顯著升高,總膽固醇含量降低;血清鈣離子和無機(jī)磷降低,氯化物和鉀離子含量升高。李艷軍等研究了熱應(yīng)激條件下添加中藥渣對獺兔血液生化指標(biāo)的影響,結(jié)果表明:對照組血清葡萄糖水平較低,CHO、TG、TP較高,但均不顯著(P>0.05);BUN、CK、AST、ALT水平較高,總蛋白、白蛋白、球蛋白及白球比與實(shí)驗(yàn)組對比無明顯差異。劉慶華等研究了不同溫度和持續(xù)時間對獺兔血清抗氧化指標(biāo)的影響,高溫(35℃和40℃)導(dǎo)致MDA、T-AOC降低,T-SOD升高;40℃時,持續(xù)時間越長(0.5~6h)T-SOD越高,其他兩者水平先上升后重新回到應(yīng)激狀態(tài)。浙江師范大學(xué)生物系曾就劇冷、噪音、急性組織損傷和燙傷等不同應(yīng)激對德系長毛兔血清銅、鋅水平的影響進(jìn)行了系列研究,結(jié)果顯示銅、鋅水平均受到各種應(yīng)激影響,但其作用模式(或升高或降低)和應(yīng)激反應(yīng)持續(xù)時間各有不同,可能不同應(yīng)激方式的作用機(jī)制存在一定差異。本課題組前期對皖系長毛兔在熱應(yīng)激條件下性能表現(xiàn)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn):35℃高溫導(dǎo)致皖系長毛兔血清葡萄糖、甘油三脂、膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶均顯著升高,同時使得產(chǎn)毛量顯著降低,死亡率明顯升高,血清生化指標(biāo)的變化可能是造成熱應(yīng)激表征的重要原因。本研究對長毛兔經(jīng)3種方式采毛后的8個血清生化指標(biāo)的變化規(guī)律和3組間各生化指標(biāo)水平差異性進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清GLU水平不受剪毛影響,但兩種拔毛方式均顯著影響GLU水平且直接拔毛組在24h即恢復(fù),而喂藥拔毛組48h未能恢復(fù)采毛前水平。血清CHO受剪毛和直接拔毛顯著影響而持續(xù)降低,但不受喂藥拔毛影響。血清TG水平只受喂藥拔毛影響,而48h可恢復(fù)到采毛前水平。蘇聯(lián)科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)剪毛導(dǎo)致卡拉庫爾羊血清GLU上升以及CHO降低,這與本研究GLU不受剪毛影響不同,但CHO的應(yīng)激反應(yīng)與本研究結(jié)果相一致。本研究5個血清蛋白酶活性指標(biāo)均受到3種采毛方式的應(yīng)激影響,ALP在3種方式采毛后的變化模式相似,采毛后均持續(xù)降低、反應(yīng)持續(xù)時間久,說明ALP為采毛應(yīng)激的敏感指標(biāo)。ALT和AST是肝臟功能的重要指標(biāo),本研究中3組長毛兔ALT和AST在采毛后均顯著上升,剪毛組AST應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)度明顯低于兩拔毛組,AST可作為拔毛應(yīng)激指標(biāo);而剪毛組和直接拔毛組ALT未在48h內(nèi)恢復(fù)正常水平,而喂藥拔毛組ALT恢復(fù)采毛前水平,可能地塞米松發(fā)揮了抗過敏作用。3組兔采毛后LDH均顯著升高,48h內(nèi)恢復(fù)到采毛前水平,喂藥組上升幅度明顯大于其他兩組。CK主要存在于肌肉,各組長毛兔血清CK水平均明顯上升,可能因?yàn)椴擅珪r兔肌肉緊張所致,不過只有直接拔毛組48h未恢復(fù),而喂藥拔毛組48h內(nèi)恢復(fù)正常,可能地塞米松緩解了應(yīng)激;兩拔毛組CK應(yīng)激水平明顯高于剪毛組,因而CK也可以考慮作為拔毛應(yīng)激指標(biāo)。比較不同采毛方式對生化指標(biāo)影響差異表明,剪毛對GLU、AST和CK等影響明顯較小,總體而言拔毛應(yīng)激較大,而喂藥組可能因?yàn)榈厝姿筛弊饔脤DH、TG等指標(biāo)的影響比直接拔毛更為顯著。另外,采毛前大部分生化指標(biāo)起始值相似,表明長毛兔樣品整齊,喂藥拔毛組LDH、CHO明顯高于其他組,該組GLU和CK顯著高于剪毛組,可能這些生化指標(biāo)對地塞米松藥物敏感,這與白衛(wèi)兵等的研究結(jié)果相似。但Gentry等對新西蘭兔的研究表明,地塞米松模擬應(yīng)激只顯著提高了血清GLU水平,而對CHO、LDH、AST及CPK濃度沒有影響?？赡艿厝姿蓪@些生化指標(biāo)的影響存在品種間差異。4拔、剪、拔、毛應(yīng)激血糖受兩種拔毛方式的顯著影響,血清CHO受剪毛和直接拔毛影響,而TG