高效液相色譜法測定藤茶的二氫楊梅素

高效液相色譜法測定藤茶的二氫楊梅素

藤茶是青桃科蛇葡萄糖植物的結(jié)實莖和葉，主要分布在廣西、湖南、福建等地。藤茶色綠起白霜,具有清熱解毒、抗菌消炎、祛風除濕、強筋健骨的功效,常用于心腦血管疾病、高血壓等病證的防治。藤茶中含有大量的黃酮類化合物,并以二氫楊梅素(DMY)為主。二氫楊梅素具有抗衰老、抗高血壓、保肝護肝等功能。目前,測定藤茶中二氫楊梅素含量的方法很多,產(chǎn)地主要來自貴州、湖南、廣西,我們用HPLC法對廣西桂林產(chǎn)藤茶中的二氫楊梅素的含量進行了測定。1儀器和試劑盒1.1準對照品的測定藤茶(廣西桂林干燥藥材);二氫楊梅素標準對照品(中國食品藥品檢定研究院);甲醇、乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化鐵為分析純;甲醇、磷酸為色譜純;實驗用水為超純水。1.2實驗設(shè)備和設(shè)備戴安Ultimate3000高效液相色譜分析儀(美國Dionex公司);鼓風干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司);KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);ZF-2型三用紫外儀分析儀(上海市安亭電子儀器廠);預制薄層板(青島海洋化工廠分廠)。2方法和結(jié)果2.1供試品溶液的制備取藤茶20mg,料液比1∶35,加入甲醇超聲提取30min,3次,過濾濃縮,加入甲醇定容至10mL,0.45μm濾膜過濾,得供試品溶液。2.2對照溶液的制備2.3苯甲酰胺酸甲酯標準品溶液的制備吸取供試品溶液、二氫楊梅素對照品溶液10μL分別點于同一硅膠G板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以3%FeCl3乙醇溶液,在檢測波長254nm處檢視,供試品色譜在與對照品相應的位置上顯相同顏色的斑點。2.4條件12.5方法研究2.5.1系統(tǒng)適用性測試按2.1項制備供試品溶液,按2.4項色譜條件測定峰面積,二氫楊梅素對照品溶液和藤茶供試品溶液的色譜圖,見圖1、圖2。2.5.2對照品溶液的制備精密吸取二氫楊梅素對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1mL至1mL瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,得不同濃度的對照品溶液。取上述對照品溶液,按2.4項色譜條件進行測定,以峰面積(Y)對進樣量(X)進行線性回歸,得線性回歸方程:Y=40.333X-0.0901r=0.9998結(jié)果表明二氫楊梅素在1.31~6.55μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.5.3精密度測試2.5.4進樣測定精密吸取2.2項的對照品溶液,避強光放置,按2.4項色譜條件,每隔2h進樣測定1次,每次進樣5μL,測定二氫楊梅素的峰面積,結(jié)果表明在24h內(nèi)測得的峰面積無明顯變化,RSD為2.50%。2.5.5重復試驗精密稱取藤茶6份,按2.1項制備供試品溶液,按2.4項色譜條件測定峰面積,結(jié)果顯示重復性較好,RSD為1.90%。2.5.6加樣回收率試驗精密稱取已知二氫楊梅素含量的藤茶20mg9份,分別加入1.31mg/mL二氫楊梅素對照品1.80、2.25、2.70mL,按2.1項、2.4項色譜條件測定,計算加樣回收率,結(jié)果見表1。2.6藤茶中二氫楊樹氧基的含量精密稱取20mg藤茶樣品6份,按2.1項方法制備供試品溶液,按2.4項色譜條件進行測定,結(jié)果藤茶中二氫楊梅素的含量為29.55%。3討論3.1氫楊樹葉片的檢測經(jīng)DAD全波長掃描后,二氫楊梅素對照品在290nm處有最大吸收,故確定290nm作為二氫楊梅素的檢測波長。實驗考察甲醇∶0.05%磷酸流動相的比例(25∶75、35∶65、40∶60、55∶45、90∶10),結(jié)果顯示,甲醇∶0.05%磷酸流動相的比例為35∶65時,出峰時間短,且無雜質(zhì)干擾。3.2氫楊樹巖樣的制備實驗中分別考察了提取溶劑、料液比、提取時間、提取次數(shù)對樣品提取率的影響,提取溶劑體積分數(shù)太低時,所提取的水溶性雜質(zhì)較多;料液比增加時,二氫楊梅素提取量也在不斷增加。當達到飽和時,既使繼續(xù)提高料液比,所提取的二氫楊梅素不會繼續(xù)增加反而下降。綜合考慮節(jié)能環(huán)保等因素,最終確定供試品溶液的制備方法為:藤茶20mg,以料液比1∶35加入甲醇超聲30min,重復提取3次。精密稱取二氫楊梅素對照品0.0131g,置10mL瓶中,加甲醇定容,制成含二氫楊梅素1.31mg/mL的對照品溶液。色譜柱:迪馬C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-0.05%磷酸溶液(35∶65);流速:0.8mL/min;柱溫: