四逆散有效部位抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究

四逆散有效部位抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究

第四逆散是消除肝氣郁結(jié)的基本方法。目前，逍遙散和柴胡疏肝散被用作抑郁癥的常用方劑。我們運(yùn)用大孔樹脂吸附技術(shù)、分離制備了四逆散抗抑郁有效部位,并采用慢性應(yīng)激大鼠模型,運(yùn)用高效液相色譜、電化學(xué)方法,研究了四逆散有效部位對(duì)大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響。為了進(jìn)一步明確該有效部位的抗抑郁效果,我們觀察了四逆散有效部位對(duì)行為絕望和藥物作用小鼠抑郁模型的影響,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1材料和方法1.1電子溫度ws玻璃量筒(分別為高25cm、直徑10cm和高40cm、直徑18cm),小鼠自主活動(dòng)監(jiān)測(cè)儀(MUROMA-CHIKIKAICO.,LTD.TOKYO),1/100s秒表,攝像機(jī),電子溫度計(jì)。四逆散由柴胡、白芍、枳實(shí)、甘草等比例構(gòu)成,藥材均購(gòu)自北京同仁堂集團(tuán),有效部位由上述藥物水煎后,過AB-8型大孔樹脂,收集稀醇洗脫液,干燥后獲得,經(jīng)鑒定主要含有新橙皮苷、柚皮苷、芍藥苷、甘草素、異甘草素等成分。鹽酸氯丙咪嗪(湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司,生產(chǎn)批號(hào)020124);帕吉林(Pargyline,sigma,P8013);5-HTP(sigma,H8127);利血平注射液(上海醫(yī)科大學(xué)紅旗制藥廠產(chǎn)品,批號(hào)930905)。1.2蒂蘇氏的四逆散大、小劑量組ICR雄性小鼠,重量20～25g。實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組、氯丙咪轅組和四逆散大、小劑量組,共4組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物藥物灌胃量如下:鹽酸氯丙咪嗪33mg/(kg·d)、四逆散有效部位600mg/(kg·d)、300mg/(kg·d)。1.3行為測(cè)試1.3.1獨(dú)立活動(dòng)的觀察每組小鼠15只,將各組小鼠放入自主活動(dòng)儀,觀察3min內(nèi)活動(dòng)次數(shù)。1.3.2不動(dòng)時(shí)間及滯后時(shí)間量筒內(nèi)裝21～23℃水至10cm,量筒之間放置一個(gè)不透明板,防止小鼠彼此看到。每組小鼠15只,持續(xù)給藥21d,末次灌藥后1h,小鼠被投入量筒,并滯留6min,計(jì)算后4min的不動(dòng)時(shí)間。判斷不動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn):停止掙扎,垂直體位,不動(dòng)漂浮,僅做一些必要的活動(dòng)使它的頭露出水面。1.3.3固定小鼠尾尖每組小鼠15只,持續(xù)給藥21d,末次灌藥后1h,用膠帶在距離小鼠尾尖30mm處將之固定于水平放置的棒狀物上,中間用板隔開,防止彼此看到對(duì)方。小鼠距離最近的物體大約100mm。懸掛6min,記錄后4min的不動(dòng)時(shí)間。1.3.5小鼠的降壓藥試驗(yàn)每組小鼠10只,帕吉林100mg/kg,腹腔注射2.5h后,各組分別灌胃生理鹽水、四逆散大、小劑量和鹽酸氯丙咪嗪,45min后給予5-HTP10mg/kg,腹腔注射,15min后觀察小鼠的甩頭次數(shù)。1.4統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析,卡方檢驗(yàn),在SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件上進(jìn)行。2結(jié)果2.1四散有效促進(jìn)措施對(duì)大鼠的獨(dú)立活動(dòng)結(jié)果見表1。2.2四個(gè)有效的散打部分對(duì)大鼠游泳實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間的影響結(jié)果見表2。2.3四個(gè)有效的分散劑影響著大鼠的懸尾實(shí)驗(yàn)時(shí)間結(jié)果見表3。2.4四逆散有效部位對(duì)促進(jìn)血平衡抗劑的影響結(jié)果見表4。2.55-hdt對(duì)大鼠屠宰試驗(yàn)的影響與腹腔注射帕吉林、5-HTP組比較,給藥1h后,氯丙咪嗪組和四逆散有效部位大、小劑量組明顯增加了小鼠的甩頭次數(shù),結(jié)果見表5。3逆散有效部位對(duì)抗抑郁藥物篩選的有效性小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾試驗(yàn)是較為常用的動(dòng)物行為絕望抑郁癥模型。強(qiáng)迫游泳方法由Porsolt于1977年首先提出,大部分三環(huán)類抗抑郁藥、單胺氧化酶抑制劑、非典型抗抑郁藥、電休克療法均能明顯縮短動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間。懸尾試驗(yàn)是受強(qiáng)迫游泳啟發(fā)而創(chuàng)建的,現(xiàn)已經(jīng)證實(shí)懸尾試驗(yàn)對(duì)各種抗抑郁藥均很敏感,而且懸尾試驗(yàn)避免了溫度和動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能障礙的干擾,因而在用一些鼠種篩選抗抑郁藥物時(shí)更為有效。以上兩種模型均有特異性較高的優(yōu)點(diǎn),而且大多數(shù)抗抑郁藥產(chǎn)生的減少不動(dòng)時(shí)間的效應(yīng)與其臨床療效相關(guān),因此被廣泛用于抗抑郁藥物的篩選。氯丙咪嗪為典型三環(huán)類抗抑郁藥物,減少不動(dòng)時(shí)間的顯著作用顯示了兩種小鼠模型用于抗抑郁藥物篩選的有效性。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示,四逆散有效部位大劑量顯著縮短了小鼠不動(dòng)時(shí)間,為了排除其行為改善作用由中樞興奮性作用引起,試驗(yàn)之前測(cè)定了小鼠的自主活動(dòng),發(fā)現(xiàn)四逆散有效部位對(duì)小鼠自主活動(dòng)無顯著影響,因此可以認(rèn)為四逆散有效部位具有一定的抗抑郁作用。我們進(jìn)一步選用了利血平拮抗、5-HTP誘導(dǎo)甩頭等藥物模型,以證實(shí)四逆散有效部位通過增強(qiáng)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)而發(fā)揮抗抑郁作用的機(jī)理。拮抗利血平引起體溫下降、眼瞼下垂主要通過增加去甲腎上腺素或5-HT能傳遞,增強(qiáng)5-HTP誘導(dǎo)甩頭與阻斷中樞5-HT重?cái)z取或單胺氧化酶抑制以增高5-HT有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示,四逆散有效部位大、小劑量可以對(duì)利血平降低小鼠體溫、引起小鼠眼瞼下垂起拮抗作用,并明顯增加5-HTP誘導(dǎo)的小鼠甩頭次數(shù)。提示四逆散有效部位抗抑郁作用與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化有關(guān),這一行為效果與我們的前期研究一致。綜上所述,四逆散有效部位可以改善小鼠抑郁狀態(tài)的行為,具有一定的抗抑郁作用,并與單胺類遞質(zhì),尤其是與5-HT系統(tǒng)有關(guān),其對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)的具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍有待進(jìn)一步的研究。1.3.4鹽酸氯丙咪嗪對(duì)小鼠的影響每組小鼠15只,利血平2.5mg/kg腹腔注射同時(shí),各組分別灌胃生理鹽水、四逆散大、小劑量和鹽酸氯丙咪嗪。給藥后1h,觀察