009菌落總數(shù)檢查作業(yè)指導書

陜西威水飲品質(zhì)量治理文件題 目 菌落總數(shù)測定作業(yè)指導書

編 碼WI-ZL-009

51制定制定日期頒發(fā)部門分發(fā)單位

質(zhì)量治理部

審 核 批 準審核日期 批準日期頒發(fā)數(shù)量 3份 生效日期質(zhì)量治理部、綜合治理部、生產(chǎn)供給部目的：規(guī)定了菌落總數(shù)檢測方法。適用范圍：適用于固體、液體類樣品菌落總數(shù)的檢測。GB4789.2-2023術語和定義：菌落總數(shù)〔如培育基、培育溫度和培育時間等〕培育后，g〔mL〕檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。設備和材料：除微生物試驗室常規(guī)滅菌及培育設備外，其他設備和材料如下：5.1恒溫培育箱：36℃±1℃，30℃±1℃5.22℃～5℃5.3恒溫水浴箱：46℃±1℃天平：感量為0.1g均質(zhì)器振蕩器無菌吸管：1mL〔0.01mL、10mL〔0.1mL〕或微量移液器及吸頭250mL、500mL3.990mmpHpHpH試紙放大鏡或/和菌落計數(shù)器A中A.1A中A.2A中A.3菌落總數(shù)測定作業(yè)指導書題目編碼：WI-ZL-0095菌落總數(shù)測定作業(yè)指導書題目編碼：WI-ZL-00952檢驗程序：菌落總數(shù)的檢驗程序見圖1。檢樣25g檢樣25g〔mL〕樣品+225mL稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋2個～3個連續(xù)稀釋度的樣品勻液，1mL分別參加無菌培育皿內(nèi)15mL～20mL平板計數(shù)瓊脂培育基，混勻培育計數(shù)各平板菌落數(shù)計算菌落總數(shù)報告1菌落總數(shù)的檢驗程序操作步驟：樣品的稀釋225mL1min～2min，225mL1min～2min，1:1025mL225mL的無菌錐形瓶〔瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠〕中，充分混勻，制成1:10液。1mL1:101mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中〔留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面11:1006.1.3操作程序，制備1011mL2～3〔可包括原液101mL1mL空白稀釋液參加兩個無菌平皿內(nèi)作空白比照?！?6℃±1℃恒溫水浴箱中保溫〕傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。培育待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃48h±2h30℃±1℃培育72h±3h。外表掩蓋一薄層瓊脂培育基〔4mL8.2.1條件進展培育。菌落計數(shù)落計數(shù)以菌落形成單位〔colony-formingunits，CFU〕表示。30CFU～300CFU30CFU300CFU菌落數(shù)應承受兩個平板的平均數(shù)。平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；假設片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又2，代表一個平板菌落數(shù)。數(shù)。結(jié)果與報告：菌落總數(shù)的計算方法g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。假設有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式〔1〕計算：CN(n0.1n)d1 2

……………〔1〕式中：N——樣品中菌落數(shù)； C——平板〔含適宜范圍菌落數(shù)的平板〕菌落數(shù)之和；n——第一稀釋度〔低稀釋倍數(shù)〕平板個數(shù)；1n——其次稀釋度〔高稀釋倍數(shù)〕平板個數(shù)；2〔第一稀釋度。例如：稀釋度C

1:100〔第一稀釋度〕1:1000〔其次稀釋度〕232，244 33,35N(n0.1n)d1 22322443335[2(0.12)]102

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247279.2.2250002.5×104300CF其他平板可記錄為多不行計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。稀釋倍數(shù)計算。假設全部稀釋度〔包括液體樣品原液〕1稀釋倍數(shù)計算。假設全部稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU30CFU或大于300CFU時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。菌落總數(shù)的報告菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。32位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，承受兩位有效數(shù)字。假設全部平板上為集中菌落而無法計數(shù)，則報告菌落集中。假設空白比照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。A培育基和試劑平板計數(shù)瓊脂〔platecountagar，PCA〕培育基成分胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2.5g葡萄糖 1.0g瓊脂 15.0g蒸餾水 1000mLpH7.0±0.2制法pH。分裝試管或錐形瓶，12115min。磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀〔KHPO〕 34.0g2 4蒸餾水 500mLpH7.2制法34.0g500mL175mL1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。1