高效液相色譜法測定氧化型谷胱甘肽二鈉

高效液相色譜法測定氧化型谷胱甘肽二鈉

氧化二鈉注射液由pharmabam公司生產(chǎn)，現(xiàn)在僅在俄羅斯上市，并在美國進(jìn)行了三次臨床試驗(yàn)。這種同類藥物也是意大利上市的。是一種丙烯藥物（順鉑、環(huán)磷酰胺、亞胺、濃縮物和博來霉素）的輔助藥物。它可以減少化療的損傷，對愈合的影響也可以增加化療的劑量。氧化二甲苯乙烯醚是其替代藥物，主要用于治療小細(xì)胞肺癌、肝炎和化療。廣東省中藥研究所科研人員自主開發(fā)出注射用氧化型谷胱甘肽二鈉注射液原料氧化型谷胱甘肽二鈉鹽,參考還原性谷胱甘肽的有關(guān)文獻(xiàn),建立了一種HPLC的有關(guān)物質(zhì)測定方法,可同時(shí)檢測有關(guān)物質(zhì)和含量,該法專屬性好,靈敏度高,可作為氧化型谷胱甘肽二鈉注射液的質(zhì)量控制方法。1實(shí)驗(yàn)部分1.1氧化型谷胱甘肽二鈉原料Waters2695型系列高效液相色譜儀(HPLC)(包括:PDA2996Empower數(shù)據(jù)處理軟件),Waters公司。氧化型谷胱甘肽二鈉注射液(批號:02172008),俄羅斯PharmBAM;氧化型谷胱甘肽二鈉原料(批號:080512、080515、080518),廣東省中藥研究所;對照品(純度99.8%,HPLC面積歸一化法測定批號080510),自制;對照品:甘氨酸,谷氨酸,半胱氨酸,還原型谷胱甘肽,均購自Sigma公司。0.006mol/L辛烷磺酸鈉溶液:稱取辛烷磺酸鈉1.3g,加水溶解成1L,加三乙胺10mL,磷酸調(diào)節(jié)pH3.0,經(jīng)0.45μm的微孔濾膜濾過,即得。1.2辛烷磺酸鈉+甲醇法反相色譜柱ZorbaxXB-C18(4.6mm×250mm,5μm);以V(0.006mol/L辛烷磺酸鈉)+V(甲醇)=95+5為流動(dòng)相,檢測波長為210nm,柱溫30℃。理論板數(shù)應(yīng)不低于2500。對照品色譜圖上各色譜峰的分離度應(yīng)符合要求。1.3對照品溶液的制備取氧化型谷胱甘肽二鈉原料加流動(dòng)相配置成每1mL含氧化型谷胱甘肽二鈉2mg的溶液。對照液制備:精密量取供試品溶液1mL,置100mL量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。取對照溶液10μL注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測靈敏度,使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%～25%,再分別量取供試品溶液與對照溶液各10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的6倍。2結(jié)果與討論2.1方法的特異性研究2.1.1有關(guān)物質(zhì)分離在“2.1”項(xiàng)色譜條件下,稱取有關(guān)物質(zhì)對照品適量用流動(dòng)相溶解并量稀釋成有關(guān)物質(zhì)的對照混合溶液,將氧化型谷胱甘肽二鈉加入有關(guān)物質(zhì)對照品混合溶液中,進(jìn)樣10μL,結(jié)果見圖1和圖2,表明各有關(guān)物質(zhì)的分離結(jié)果符合規(guī)定。2.1.2響應(yīng)值和檢測限調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度測得噪音值,取氧化型谷胱甘肽二鈉對照品適量不斷溶解,測得供試品的響應(yīng)值約為基線噪音的3倍高,本品的檢測限約0.08μg。2.2線性關(guān)系研究和方法與法律2.2.1峰面積測定取氧化型谷胱甘肽二鈉對照品50.0mg,精密稱定,置50mL量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液。精密量取母液0.5、1、2、5mL,置10mL量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為各質(zhì)量濃度梯度的供試品溶液。精密量取供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,記錄峰面積。峰面積A與質(zhì)量濃度x(mg/mL)的回歸方程為A=69041x-10871;r=0.9999。結(jié)果表明,本品進(jìn)樣量在0.5～10μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。2.2.2精密度測試取氧化型谷胱甘肽二鈉對照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,RSD=0.98%。2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線及方法檢出限取各批號氧化型谷胱甘肽二鈉供試品20mg,配置成每1mL含氧化型谷胱甘肽二鈉0.2mg的溶液,精密量取供試品溶液及對照品溶液10μL,注入色譜儀,供試品按照0,1,2,4,6,8h進(jìn)樣,記錄色譜圖,RSD=0.37。2.2.4溶液制備及色譜分析取自研樣品6份,加入流動(dòng)相配置成每1mL含氧化型谷胱甘肽二鈉0.2mg的溶液10μL,注入色譜儀,記錄色譜圖,RSD=0.34。2.3測量結(jié)果2.3.1測定結(jié)果80525、4005183批供試品(批號:080512、080515、080518)含量測定結(jié)果分別為99.13%,98.92%,99.32%,結(jié)果符合要求。2.3.2有關(guān)氧化二鈉氧化二鈉原料的測定供試品溶液如有雜質(zhì)峰,檢測并分析出4種雜質(zhì),其中峰5為氧化型谷胱甘肽二鈉,結(jié)果見表1和圖1、圖2。3氧化型谷胱甘肽二鈉/水溶液質(zhì)量檢測目前國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)有氧化型谷胱甘肽二鈉